防治山東省特色小宗作物櫻桃褐斑病試驗研究

薛燕楠，張國福，信洪波，薛 雯，金 巖，夏曉明*

(1.山東農(nóng)業(yè)大學植物保護學院，山東 泰安 271018；2.山東省農(nóng)藥檢定所，山東 濟南 250100)

櫻桃(Prunusavium)屬于薔薇科落葉灌木果樹，果實色澤亮麗，富含多種維生素，含鐵量居于水果之首，素來深受廣大消費者喜愛。在中國，櫻桃的主要產(chǎn)地有遼寧、山東、浙江、河南、甘肅等地，種植地域廣[1]。根據(jù)中國園藝學會櫻桃分會統(tǒng)計，自2006年起，甜櫻桃的栽培面積由4萬hm2增長至18萬hm2，平均每年增加1.4萬hm2[2]。隨著櫻桃種植面積的不斷擴大，櫻桃病害呈現(xiàn)逐年加重的趨勢，其中櫻桃褐斑病成為了櫻桃葉片的主要病害之一。櫻桃褐斑病是一種真菌性病害，一般在5～6月份發(fā)病，7～9月份發(fā)病最為嚴重，甚至造成全樹8～9月份二次開花，嚴重影響樹勢和安全越冬[3]。櫻桃褐斑病在侵染初期葉表著生較小的紫色斑點，后擴大為褐色圓形斑，發(fā)病中后期斑點融合，造成葉片穿孔和早落，導致光合作用下降，樹勢衰弱，繼而影響翌年的櫻桃產(chǎn)量[4]。

目前，田間生產(chǎn)中對真菌性作物病害的防治主要以化學防治為主，但我國尚沒有登記用來防治櫻桃褐斑病的農(nóng)藥品種，農(nóng)民用藥存在安全隱患[5]。山東省農(nóng)藥檢定所為解決這一問題，組織開展了10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑和80%代森錳鋅可濕性粉劑防治櫻桃褐斑病的室內(nèi)活性測定、安全性及田間藥效試驗，并組織企業(yè)開展聯(lián)合登記工作，以期為篩選防治櫻桃炭疽病的安全、有效的農(nóng)藥產(chǎn)品提供相關(guān)的防治技術(shù)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試材料 供試菌種：櫻桃褐斑病菌(Passaloracircumscissa)，采自山東泰安市郊區(qū)，采用常規(guī)方法分離。

供試植物品種：紅燈、美早、早大果3個品種進行安全性試驗，均在同一園，樹齡9年，試驗區(qū)果樹生長基本一致。

試驗地點：山東省蓬萊市北溝鎮(zhèn)上朱潘村、河北省昌黎縣兩山鄉(xiāng)梁各莊村、陜西省楊凌示范區(qū)五泉鎮(zhèn)桶張村。

1.2 試驗藥劑 97%苯醚甲環(huán)唑原藥；95%代森錳鋅原藥；98%多菌靈原藥；10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑；80%代森錳鋅可濕性粉劑。

將97%苯醚甲環(huán)唑原藥用丙酮配制成1×104mg/L苯醚甲環(huán)唑母液，備用，使用時用含有0.1%的吐溫80水溶液稀釋至合適濃度。將95%代森錳鋅原藥，以白炭黑作填料，實驗室內(nèi)用小型氣流粉碎機將代森錳鋅制成10%可濕性粉劑，其濕潤劑含量5%，細度300目以上，備用。將98%多菌靈原藥用少量5N鹽酸溶解后，再用NaOH溶液中和，調(diào)節(jié)pH=5左右，最后加無菌水配制成1%多菌靈的鹽酸鹽水劑，備用。加工含有5%濕潤劑的白碳黑可濕性粉劑，并配制1N NaCl溶液，作為助劑對照，備用。代森錳鋅和多菌靈以及助劑對照在使用時用無菌水稀釋至合適濃度。

1.3 試驗方法

1.3.1 室內(nèi)活性試驗方法 采用菌絲生長速率法，測定3種殺菌劑對櫻桃褐斑病菌的抑制作用。在無菌操作條件下，根據(jù)試驗處理將預先融化、滅菌的72mL PSA培養(yǎng)基定量加入無菌錐形瓶中，從低濃度到高濃度依次定量吸取配好的濃度為設(shè)計濃度10倍的各處理藥液8mL，分別加入上述錐形瓶中，充分搖勻。然后等量倒入4個直徑為9cm的培養(yǎng)皿中，制成相應(yīng)系列濃度的含藥平板。試驗設(shè)添加不含藥劑的處理作空白對照，每處理4個重復。其中，苯醚甲環(huán)唑以最高濃度中含有丙酮的0.1%吐溫80水溶液作為對照，代森錳鋅和多菌靈以最高濃度中所含有的助劑的蒸餾水溶液作為對照。

將在PSA培養(yǎng)基上轉(zhuǎn)接活化后的櫻桃褐斑病菌，在無菌條件下用內(nèi)徑為0.5cm的滅菌打孔器從菌落邊緣切取菌柄，用接種器將菌餅接種于含藥平板中央，菌絲面朝下，蓋上皿蓋，26±1℃恒溫條件下培養(yǎng)7、14、21d，然后用十字交叉法量取菌落直徑。通過菌絲生長抑制概率值和藥劑濃度對數(shù)值之間的線性回歸分析， 求出各藥劑對菌株的有效抑制中濃度(EC50值)、置信區(qū)間及相關(guān)系數(shù)(r)。

1.3.2 安全性試驗方法 試驗設(shè)10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑1 000、500、250倍液3個劑量，80%代森錳鋅可濕性粉劑600、300、150倍液3個劑量。試驗共計6個處理，每處理重復4次，每2株樹為一個小區(qū)，隨機區(qū)組排列。

試驗共施藥2次。于櫻桃采摘后和雨季前分別對紅燈、美早、早大果3個品種進行1次施藥。全樹均勻噴霧施藥，以葉片、枝干均勻著藥，稍有藥滴下淌為度。

試驗共調(diào)查2次。分別于第1次施藥后1、3、5、7、10d和第2次施藥后1、3、5、7、10、14、21d，定性觀察對櫻桃葉片和嫩稍的影響。

1.3.3 田間藥效試驗方法 按照(表1)中的試驗藥液設(shè)計濃度，使用機動噴霧器對全樹噴霧，葉片正反兩面均勻噴霧，施藥后以葉片濕潤、稍有藥滴下滴為宜。每4株樹為一小區(qū)，隨機區(qū)組排列，重復4次。于櫻桃褐斑病發(fā)病前(6月中旬)進行第1次施藥，然后于7月中旬和8月中旬再各施藥1次，總共施藥3次。

表1 試驗處理設(shè)計

于第3次藥后14d調(diào)查病害發(fā)生情況。每小區(qū)調(diào)查2株果樹，每株分東、南、西、北、中各掛牌1個大小基本一致的枝條(≥10葉片)，調(diào)查全部葉片，根據(jù)葉片上病斑面積占整個葉面積的百分率分級，調(diào)查記錄各級病葉數(shù)及總?cè)~數(shù)。

葉片分級方法：

0級：無病斑；

1級：病斑面積占整片葉面積的<5%；

3級：病斑面積占整片葉片面積6%～10%；

5級：病斑面積占整片葉片面積11%～20%；

7級：病斑面積占整片葉片面積21%～40%；

9級：病斑面積占整片葉片面積>41%或葉片脫落。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析 按以下公式計算抑菌率(%)：

采用Microsoft Excel 2003統(tǒng)計校正抑菌率，然后采用DPS數(shù)據(jù)處理軟件分別求出試驗藥劑的毒力回歸方程和EC50、EC90以及相關(guān)系數(shù)。

按下列公式計算安全系數(shù)：

按下列公式計算防治效果：

2 結(jié)果與分析

2.1 室內(nèi)活性試驗結(jié)果 苯醚甲環(huán)唑和代森錳鋅對櫻桃褐斑病菌具有較好的室內(nèi)活性(表2)。7d調(diào)查結(jié)果表明，苯醚甲環(huán)唑和代森錳鋅對櫻桃褐斑病菌的EC50分別為0.000 12mg/L和0.79mg/L，EC90分別為0.59mg/L和5.83mg/L。14d調(diào)查結(jié)果表明，苯醚甲環(huán)唑和代森錳鋅對櫻桃褐斑病菌的EC50分別為0.054 36mg/L和1.32mg/L，EC90分別為0.33mg/L和12.71mg/L。21d調(diào)查結(jié)果表明，苯醚甲環(huán)唑和代森錳鋅對櫻桃褐斑病菌的EC50分別為0.019 65mg/L和6.41mg/L，EC90分別為0.15mg/L和44.06mg/L。但3次調(diào)查結(jié)果均表明，對照藥劑多菌靈在供試濃度范圍內(nèi)對櫻桃褐斑病菌抑制作用不明顯，且與濃度變化無相關(guān)性。

表2 苯醚甲環(huán)唑及代森錳鋅對櫻桃褐斑病菌的毒力測定結(jié)果

續(xù)表

2.2 安全性試驗結(jié)果 10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑對櫻桃樹安全性試驗結(jié)果表明(表3)，在對第1次施藥后1、3、5、7、10d，第2次施藥后1、3、5、7、10、14、21d的定性觀察下，10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑對紅燈、美早和早大果3個品種的葉片和嫩稍均無變色、壞死、萎蔫、畸形、生長延緩、銹斑等藥害癥狀。綜合分析，10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑在稀釋1 000、500、250倍液3個高劑量試驗濃度下噴霧對櫻桃樹安全，安全系數(shù)為400%。

80%代森錳鋅可濕性粉劑對櫻桃樹安全性試驗結(jié)果表明(表3)，在600、300、150倍液3個試驗濃度劑量下，在第1次施藥后1、3、5、7、10d；第2次施藥后1、3、5、7、10、14 、21d對葉片和嫩稍的定性觀察中均發(fā)現(xiàn)，80%代森錳鋅可濕性粉劑150倍液，藥后3d在3個品種葉片邊緣處均產(chǎn)生褐色銹斑現(xiàn)象，但10d后大部分葉片均能逐步恢復，僅個別葉片葉緣呈現(xiàn)焦枯。其他2個濃度處理未發(fā)現(xiàn)對紅燈、美早和早大果3個品種有變色、壞死、萎蔫、銹斑等明顯藥害癥狀表現(xiàn)。綜合分析認為：80%代森錳鋅可濕性粉劑在稀釋600、300、150倍液3個高劑量試驗濃度下噴霧后，600、300倍液2個濃度處理對櫻桃樹安全。盡管150倍液在藥后3d時，葉片呈現(xiàn)輕微藥害癥狀，但在10d后大部分葉片均能逐步恢復。安全系數(shù)為200%。

2.3 田間藥效試驗結(jié)果分析 田間藥效試驗結(jié)果表明(表3～4)，試驗藥劑10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑和80%代森錳鋅可濕性粉劑在櫻桃褐斑病發(fā)病前進行全樹均勻噴霧處理，對櫻桃褐斑病表現(xiàn)出較好的防治效果。且隨著用藥量和用藥次數(shù)的增加，防效呈現(xiàn)升高趨勢，表現(xiàn)出較好的保護和一定的治療效果。

表3 10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑防治櫻桃褐斑病田間藥效試驗結(jié)果

續(xù)表

第3次藥后14d，10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑防治櫻桃褐斑病的防效在64.77%～92.47%之間；80%代森錳鋅可濕性粉劑防治櫻桃褐斑病的防效在62.62%～90.61%之間。2種試驗藥劑的防效均高于對照藥劑或與其相當。綜合3地田間藥效試驗數(shù)據(jù)顯示，10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑和80%代森錳鋅可濕性粉劑是防治櫻桃褐斑病的高效藥劑，能有效的防治櫻桃褐斑病。

表4 80%代森錳鋅可濕性粉劑防治櫻桃褐斑病田間藥效試驗結(jié)果

3 結(jié)論與討論

苯醚甲環(huán)唑是三唑類脫甲基抑制劑，具有良好的內(nèi)吸性，兼具保護和治療作用，在殺菌劑中安全性比較高，防病譜廣，廣泛應(yīng)用于果樹、蔬菜等作物，可以有效防治子囊菌門、半知菌門和擔子菌門引起的病害。

代森錳鋅屬硫代氨基甲酸酯類高效、低毒、廣譜的保護性殺菌劑。在殺菌劑中安全性比較高，防病譜廣，廣泛應(yīng)用于果樹、蔬菜和糧食等作物，可以有效防止卵菌、子囊菌門、半知菌門和擔子菌門引起的病害，且不易產(chǎn)生抗性[6]。

本研究室內(nèi)活性測定結(jié)果表明，苯醚甲環(huán)唑和代森錳鋅對櫻桃褐斑病菌具有較高的室內(nèi)活性。安全性試驗表明，10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑對櫻桃樹安全性很高，安全系數(shù)為400%。80%代森錳鋅可濕性粉劑對櫻桃樹的安全性也較高，除最高劑量150倍液在藥后3d觀察到葉片邊緣部位產(chǎn)生褐色銹斑，到10d后逐步恢復外，其他兩個濃度處理沒有觀察到變色、壞死、萎蔫、畸形、生長延緩、銹斑等藥害癥狀。安全系數(shù)為200%。10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑的安全性要>80%代森錳鋅可濕性粉劑。田間在應(yīng)用80%代森錳鋅可濕性粉劑防治櫻桃褐斑病時，不得超量使用。

田間藥效試驗結(jié)果表明，10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑和80%代森錳鋅可濕性粉劑在試驗劑量下防效均可達到80%左右，且持效性較好。綜合試驗結(jié)果表明，10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑和80%代森錳鋅可濕性粉劑均可以做為田間防治櫻桃褐斑病的藥劑。于櫻桃褐斑病發(fā)病前或發(fā)病初期，采用10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑1 000～2 500倍液或80%代森錳鋅可濕性粉劑600～1 200倍液對櫻桃全樹均勻噴霧，間隔20～30d施藥1次，連續(xù)施藥3次，可有效的防治櫻桃褐斑病。同時，注意交替用藥，延緩病菌抗藥性的產(chǎn)生和發(fā)展。

櫻桃被譽為早春第一果[7]，采摘完畢后隨著氣溫升高病蟲害隨之而來，果農(nóng)常常忽視摘后對果園的管理，使得病蟲害逐年積累，樹勢衰弱，櫻桃產(chǎn)量不佳。因此，應(yīng)當大力開展防治櫻桃病蟲害的藥劑篩選工作，強化對櫻桃病蟲害防治技術(shù)的宣傳力度。