廣西德保黃精炮制前后的液相圖譜變化研究

趙秋華 黃元河 潘喬丹 陸海峰

【摘 要】 目的：比較分析黃精炮制前后的液相圖譜變化。方法：以薯蕷皂苷元為考察指標(biāo)，采用HPLC法分析比較，色譜條件為Eclipse XDB-C18色譜柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相為乙腈-水，梯度洗脫，波長200 nm，柱溫30 ℃。結(jié)果：廣西德保黃精炮制前后均有薯蕷皂苷元，但是炮制后薯蕷皂苷元含量有所下降，液相圖譜炮制前后有顯著差異，黃精炮制后產(chǎn)生新的色譜峰。結(jié)論：HPLC建立的黃精液相圖譜穩(wěn)定性、重復(fù)性較好，為黃精的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究提供參考依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】 黃精;炮制;高效液相色譜;薯蕷皂苷元

【中圖分類號(hào)】R284.1 ? 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A ? ?【文章編號(hào)】1007-8517（2021）12-0039-03

Abstract：Objective To compare and analysis The changes of liquid chromatogram of Rhizoma Polygonati before and after processing. Methods Taking diosgenin as the index，HPLC was used to analyze and compare，The chromatographic conditions were eclipse XDB-C18 column （150 mm × 4.6 mm，5μm），mobile phase was Acetonitrile-water，gradient elution，the wavelength was 200 nm，and the column temperature was 30 ℃.Results The content of diosgenin was determined by HPLC. There were diosgenin before and after processing，but the content of diosgenin decreased after processing. There were significant differences in HPLC chromatogram before and after processing，and new chromatographic peaks appeared after processing Rhizoma Polygonati.Conclusion The results showed that the HPLC chromatogram of semen luteum was stable and reproducible，which could provide reference for the quality standard research of Rhizoma Polygonati.

Keywords：Rhizoma Polygonati; Processing; High Performance Liquid Chromatography; Diosgenin

黃精為百合科植物滇黃精Polygonatum kingianum Coll.et Hemsl.黃精Polygonatum sibiricum Red.或多花黃精Polygonatum cyrtonema Hua的干燥根莖。按形狀不同，習(xí)稱“大黃精”“雞頭黃精”“姜形黃精”，其性平、味甘，具有補(bǔ)氣養(yǎng)陰、健脾、潤肺、益腎的功效[1]。近年來有關(guān)黃精化學(xué)成分研究報(bào)道日趨增多，至今已確定其中主要含有多糖、低聚糖、皂苷、氨基酸等活性成分，其中薯蕷皂苷是黃精屬植物主要成分之一[2]?，F(xiàn)代藥理研究表明，黃精具有抗氧化和抗衰老、改善學(xué)習(xí)記憶、降血糖、抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗菌抗病毒、抗腫瘤等藥理作用[3]。蘇仕林[4]對(duì)德保黃精進(jìn)行植物學(xué)研究，發(fā)現(xiàn)由于山地開發(fā)，重采輕護(hù)，黃精資源銳減，而且生產(chǎn)周期長，產(chǎn)量非常有限。本研究通過對(duì)比德保黃精炮制后的液相圖譜變化分析，以期為德保黃精藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和進(jìn)一步開發(fā)研究奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 島津LC-20A高效液相色譜儀，Eclipse XDB-C18色譜柱（150 mm×4.6 mm，5μm），sartorius CPA64分析天平，HC-5002S數(shù)控型臺(tái)式超聲波清洗機(jī)，超純水機(jī)。

1.2 材料 黃精藥材（購于靖西端午藥市，采自德?？h），經(jīng)右江民族醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院黃元河副教授鑒定為百合科植物黃精的根莖。黃酒（紹興女兒紅釀酒有限公司，酒精度%vol：14.0），薯蕷皂苷元（111539-200001），購于中國食品藥品檢定研究所。色譜級(jí)乙腈（MACKLIN），色譜級(jí)甲醇（TEDIA），其余試劑為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

2.1.1 色譜條件 島津LC-20A高效液相色譜儀，Eclipse XDB-C18色譜柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），以乙腈和水為流動(dòng)相，采用二元梯度洗脫（梯度洗脫程序見表1），流速1 mL/min，檢測(cè)波長200 nm，柱溫30 ℃，進(jìn)樣量20 μL。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 精確稱取薯蕷皂苷元適量，加甲醇溶解后配制成0.18 mg/mL的對(duì)照品溶液，0.22 μm微孔濾膜濾過，備用。

2.3 供試品溶液的制備

2.3.1 生品黃精 將黃精除去雜質(zhì)，洗凈，略潤，切厚片，干燥，得生品黃精。將黃精藥材粉碎成粗粉，精確稱取黃精粉末2 g，加入70%乙醇40 mL，超聲提取2次，每次30 min，抽濾，合并濾液，旋干，浸膏加10 mL甲醇定容，放置過夜，0.22 μm微孔濾膜濾過，取濾液作為供試品溶液。

2.3.2 酒黃精 將生品黃精，加入黃酒燜潤（每100 g黃精，用黃酒20 g）， 高壓鍋蒸制2 h，取出稍晾，干燥。將酒黃精粉碎成粗粉，精確稱取黃精粉末2 g，加入70%乙醇40 mL，超聲提取2次，每次30 min，抽濾，合并濾液，旋干，浸膏加10 mL甲醇定容，放置過夜，0.22 μm微孔濾膜濾過，取濾液作為供試品溶液。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 精密度試驗(yàn) 精密吸取薯蕷皂苷元對(duì)照品10 μL，按照2.1.1色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣5次進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得峰面積RSD為0.46%，表明儀器精密度良好。

2.4.2 重復(fù)性試驗(yàn) 取生品黃精5份，制備成供試品溶液，按照2.1.1色譜條件，重復(fù)進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算RSD值，測(cè)得峰面積RSD為1.85%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.4.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取生品黃精藥材制備成供試品溶液，按照2.1.1色譜條件，分別于0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、12 h進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得峰面積RSD為1.74%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5 結(jié)果 將德保黃精樣品分別按2.3方法制成供試品溶液，按色譜條件測(cè)定。通過色譜圖結(jié)果分析比較，生品黃精檢測(cè)出19個(gè)色譜峰，其中3號(hào)為薯蕷皂苷元;酒黃精檢測(cè)出20個(gè)色譜峰，其中8號(hào)為薯蕷皂苷元。通過色譜圖綜合對(duì)比（色譜圖1 為薯蕷皂苷元標(biāo)準(zhǔn)品，在條件探索中發(fā)現(xiàn)其在20 min左右出峰，后面無色譜峰，故保留時(shí)間設(shè)置為30 min，樣品保留時(shí)間設(shè)置為65 min），生品黃精及酒黃精均含有薯蕷皂苷元，但是炮制后薯蕷皂苷元含量下降，且酒黃精產(chǎn)生了新的色譜峰，生品黃精有的色譜峰在酒黃精中也未檢測(cè)到。如圖1所示，生品黃精的7、13、16、17號(hào)峰在酒黃精中未檢測(cè)到，生品黃精的3、11號(hào)峰的峰面積明顯變小;另外，酒黃精中產(chǎn)生2、4、5、6、7號(hào)新的色譜峰。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可推斷德保黃精炮制前后，化學(xué)成分發(fā)生了變化，有待進(jìn)一步研究，以確定消失或新產(chǎn)生的是何化學(xué)成分。

3 討論

3.1 黃精的炮制 黃精生用刺激咽喉，接觸過生黃精或其汁液的皮膚會(huì)產(chǎn)生瘙癢感，故須經(jīng)過炮制后才可用于臨床[5]。有文獻(xiàn)報(bào)道高壓蒸制酒黃精的外觀色澤、質(zhì)地、氣味、口感等性狀與常壓蒸制酒黃精無差異，可以達(dá)到傳統(tǒng)蒸制的要求，而且高壓蒸制酒黃精技術(shù)可顯著節(jié)省炮制時(shí)間，有效提高生產(chǎn)效率[6]，因此本次實(shí)驗(yàn)采取高壓蒸制的方法。通過對(duì)比黃精炮制前后色譜圖，推斷黃精炮制后原有的一些色譜峰消失與降低刺激性相關(guān)。

3.2 黃精的液相圖譜變化 黃精藥材在廣西德保以野生為主，采挖后大多泡酒服用。薯蕷皂苷元藥理作用明顯，具有抗腫瘤、抗心血管系統(tǒng)及雌激素樣作用，是合成甾體激素類藥物的前體[7]，被認(rèn)為是黃精發(fā)揮作用的真正有效成分[8]。通過對(duì)比生品黃精與酒黃精色譜圖，炮制后薯蕷皂苷元含量下降。有研究認(rèn)為[9] ，薯蕷皂苷元是其它許多皂苷元的前體，而通過炮制是否將使其轉(zhuǎn)化為其它皂苷元而使炮制品中薯蕷皂苷元含量下降？ 本實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，此推斷可能性較大，黃精炮制后在降低刺激性副作用的同時(shí)，能增強(qiáng)藥物補(bǔ)脾潤肺、益腎的作用。黃精炮制后藥效增強(qiáng)是否還與黃精中其它成分的含量變化有關(guān)，則有待后續(xù)研究確定。

3.3 黃精的質(zhì)量評(píng)價(jià) 在本實(shí)驗(yàn)中，對(duì)比等度洗脫和梯度洗脫的色譜圖，黃精炮制后黃精的色譜峰有變化，表明薯蕷皂苷元含量并不能作為衡量黃精質(zhì)量的唯一標(biāo)準(zhǔn)，黃精中尚有多糖、人參皂苷等多種活性成分。黨艷妮等[10]通過中藥網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫和分析平臺(tái)，發(fā)現(xiàn)黃精中已鑒定的39個(gè)化合物，其中18個(gè)具有良好的藥物代謝性質(zhì)的化合物，黃精可通過多成分、多靶點(diǎn)及多通絡(luò)的作用機(jī)制發(fā)揮其抗腫瘤活性。因此對(duì)德保黃精進(jìn)行化學(xué)成分檢測(cè)和多成分綜合分析，可為德保黃精藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和進(jìn)一步開發(fā)研究奠定基礎(chǔ)。

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（收稿日期：2020-11-15 編輯：程鵬飛）