高效液相色譜法測定大豆異黃酮片中的大豆異黃酮的含量

石維++李海濤

[摘 要]目的：建立測定大豆異黃酮片中大豆異黃酮的含量的方法。方法：樣品采用80%甲醇溶液提取，液相色譜條件：C18色譜柱，流動相：甲醇：0.05mol/L乙酸銨，流速1.0ml/min，紫外檢測器，波長260nm[1]。結(jié)果：該方法測得黃豆苷、染料木苷、黃豆苷原、金雀異黃素的平均回收率為99.73%、100.47%、98.62%、98.78%，RSD為0.91%、0.87%、1.23%、1.17%。結(jié)論：該方法樣品提取簡便，測定結(jié)果準(zhǔn)確高，精密度好，適合大豆異黃酮片中大豆異黃酮的檢測。

[關(guān)鍵詞]大豆異黃酮片 大豆異黃酮 高效液相色譜

中圖分類號：TD353.5 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1009-914X（2016）02-0326-02

大豆異黃酮是一類從大豆中分離提取的具有抗氧化、抗腫瘤、改善心血管功能的主要活性成分，具有防止骨質(zhì)疏松、降低膽固醇、免疫調(diào)節(jié)、改善婦女更年期綜合癥等藥理作用。隨著人們保健意識的加強(qiáng)，大豆異黃酮將成為醫(yī)藥、保健品、食品等方面多功能產(chǎn)品。目前，大豆異黃酮的重要生理功能和廣泛應(yīng)用前景已受普遍關(guān)注。

一、材料和方法

1.材料

黃豆苷（Daidzin，D）、染料木苷（Genistin，G）、黃豆苷原（Daidzein，De）、金雀異黃素（Genistein，Ge）標(biāo)準(zhǔn)品：上海同田生物技術(shù)有限公司，甲醇 （HPLC）：默克公司，醋酸銨、冰醋酸均為分析純，大豆異黃酮片（樣品，批號：S001、S002、S003），水為重蒸餾水。

2.儀器

戴安高效液相色譜儀：P680泵、UV170u紫外檢測器，超聲波清洗器。

3.色譜條件

3.1 色譜柱：不銹鋼柱，內(nèi)徑4.6mm，長250mmC18柱，填料粒徑10μm。

3.2 流動相：甲醇+0.05mol/L乙酸銨，pH4.6（46+54，V/V）。

3.3 流量：1.2ml/min。

3.4 進(jìn)樣量：20.0μL。

4.樣品制備

取20片大豆異黃酮片，用研缽研碎，準(zhǔn)確稱取1.0g試樣，加50ml的80%甲醇溶液超聲提取30min，上清液抽濾，殘渣再用80%甲醇溶液洗，洗液一并抽濾，定容至100.0mL，過0.45μm濾膜，待測。

5.混合標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

5.1混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液 稱取黃豆苷、染料木苷、黃豆苷原、金雀異黃素對照品用甲醇溶解并定容至10mL。

5.2混合標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液 分別取混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液0.01、0.05、0.10、0.30、0.50、1.25mL，用甲醇定容至10mL。計算各自的濃度。

二、結(jié)果和數(shù)據(jù)

1.混合工作曲線 分別吸取一系列濃度范圍的對照品混和溶液，進(jìn)樣量20μ L，按1.3項色譜條件注入液相色譜儀，測定峰面積。以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.精密度試驗 分別精密吸取對照品溶液20μL，按1.3項色譜條件注入液相色譜儀，測定峰面積，結(jié)果顯示：黃豆苷、染料木苷、黃豆苷原、金雀異黃素的RSD（n=5）分別為1.07%、0.98%、1.41%、1.95%，表明儀器的精密度良好。

3.穩(wěn)定性試驗 精密吸取供試品溶液20 μL，每隔4 h按1.3項色譜條件進(jìn)樣一次，共5次，測定峰面積，結(jié)果顯示：黃豆苷、染料木苷、黃豆苷原、金雀異黃素的RSD分別為1.74%、1.45%、1.56%、1.93% ，表明20h內(nèi)測定結(jié)果穩(wěn)定性良好。

4.重復(fù)性試驗 取同一樣品5份，按1.3項色譜條件進(jìn)樣，測定4種大豆異黃酮含量，得出黃豆苷、染料木苷、黃豆苷原、金雀異黃素的RSD分別為1.85%、1.61%、1.94 %、1.87%，表明本方法的重復(fù)性良好[3]。

5.回收率試驗 向已知濃度的樣品溶液中等量加入黃豆苷0.2mg/mL、染料木苷0.4 mg/mL、黃豆苷原0.1 mg/mL、金雀異黃素0.1 mg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液（n=5），進(jìn)行測定計算回收率，測得5次黃豆苷、染料木苷、黃豆苷原、金雀異黃素的平均回收率為99.73%、100.47%、98.62%、98.78%，RSD為0.91%、0.87%、1.23%、1.17%。

6.樣品的測定 按1.4的方法對樣品進(jìn)行處理制備供試品溶液并測定，測定結(jié)果見表3

三、討論

實驗結(jié)果表明，本法快速、簡便、準(zhǔn)確性好，靈敏度高，樣品不需要特殊處理，能夠準(zhǔn)確的測定大豆異黃酮片中大豆異黃酮的含量，適合大豆異黃酮片中大豆異黃酮的檢測。

參考文獻(xiàn)：

[1] 胡曉娟 蘇惠.保健品原料中大豆異黃酮的HPLC法測定.光譜實驗室.2007，24（2）：268—270

[2] 王萬能，全學(xué)軍，付玉潔，等.超聲波循環(huán)提取大豆異黃酮的研究[J].西南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)版，2005，27（4）：554-556，564.

[3] 吳周和，周麗明.反相高效液相色譜法測定豆制品中兩種異黃酮苷元的含量[J]. 分析科學(xué)學(xué)報，2006，22（3）：303—305.