拉米夫定片原輔料相容性的研究

吳文華，王麗娜（.安徽省藥品審評(píng)查驗(yàn)中心，合肥 3005；.合肥市市場(chǎng)監(jiān)督管理局，合肥 3004）

拉米夫定（lamivudine），為（－）-1-[（2R，5S）-2-（羥甲基）-1，3-氧硫雜環(huán)戊烷-5-基]胞嘧啶（結(jié)構(gòu)如圖1所示），是核苷酸類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，屬抗病毒藥，通過結(jié)合到新合成的HBVDNA中來使DNA鏈的延長(zhǎng)終止，從而達(dá)到抑制病毒復(fù)制的作用。臨床主要應(yīng)用于艾滋病、乙肝等疾病的治療[1-6]。拉米夫定片于20世紀(jì)90年代最先在美國(guó)上市，目前已過專利保護(hù)期，國(guó)內(nèi)有多家仿制陸續(xù)獲批。根據(jù)FDA查詢拉米夫定片說明書[7]，本品輔料為微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉和硬脂酸鎂。經(jīng)初步試驗(yàn)研究，擬定拉米夫定片（規(guī)格300 mg）處方組成如表1所示，主要工藝步驟為：將處方量的拉米夫定原料、微晶纖維素和羧甲基淀粉鈉過篩后，預(yù)混15 min，再加處方量硬脂酸鎂進(jìn)行總混2 min后壓片，最后用歐巴代包衣粉進(jìn)行包衣。為提高產(chǎn)品質(zhì)量，減少因相容性問題帶來的藥物安全性風(fēng)險(xiǎn)，本課題組開展拉米夫定片原料與輔料的相容性研究，保障拉米夫定片仿制藥的一致性。

表1 拉米夫定片處方組成Tab 1 Prescription composition of lamivudine tablets

圖1 拉米夫定的化學(xué)結(jié)構(gòu)式Fig 1 Formula of lamivudine

1 儀器與試藥

1.1 儀器

賽默飛世爾U3000高效液相色譜儀（DAD檢測(cè)器），XP205電子天平（瑞士梅特勒-托利多），SYZ-250B藥品穩(wěn)定性試驗(yàn)箱（寧波東南儀器），SHH-100GD-2藥品強(qiáng)光照射試驗(yàn)箱（上海永生）。

1.2 試藥

拉米夫定原料藥（批號(hào)：LZ01101160220，石家莊龍澤制藥股份有限公司）；拉米夫定片（自制，規(guī)格：300 mg/片）；拉米夫定對(duì)照品（批號(hào)：101007-201502，含量：99.7%）、胞嘧啶對(duì)照品（批號(hào)：420017-201501，含量：99.9%）、尿嘧啶對(duì)照品（批號(hào)：100469-201302，含量：99.6%）、水楊酸對(duì)照品（批號(hào)：100106-201104，含量：99.9%）、拉米夫定分離度混合物B對(duì)照品（批號(hào)：101222-201101，供含量測(cè)定用）（中國(guó)食品藥品檢定研究院）；微晶纖維素（輔料1，批號(hào)：20160101，山東聊城阿華制藥有限公司）；羧甲基淀粉鈉（輔料2，批號(hào)：150927）、硬脂酸鎂（輔料3，批號(hào)：151240）（安徽淮南山河輔料有限公司）；歐巴代（輔料4，批號(hào)：THL39057，上?？房蛋录夹g(shù)公司）；全輔料（上述4種輔料按處方比例混合均勻）；甲醇（色譜純，批號(hào)：190263，美國(guó)賽默飛世爾科技公司）；其他化學(xué)試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

參考《中國(guó)藥典》2015年版二部拉米夫定項(xiàng)下有關(guān)物質(zhì)方法[8]，確定液相色譜條件如下：色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠（Agilent Zorbax XDB-C18，4.6 mm×250 mm，5 μm）；以0.025 mol·L－1醋酸銨溶液（用冰醋酸調(diào)節(jié)pH值至3.8）-甲醇（95∶5）為流動(dòng)相，流速1.0 mL·min－1；檢測(cè)波長(zhǎng)277 nm；柱溫35℃；進(jìn)樣量10 μL。

2.2 原輔料相容性樣品研究制備

依據(jù)《化學(xué)藥物制劑研究基本技術(shù)指導(dǎo)原則》[9]以及相關(guān)文獻(xiàn)[10-16]中的要求，分別稱取拉米夫定原料與各輔料按照不同比例充分混勻后（具體比例見表2），分別放置在高溫（60℃）、高濕（90% RH）、高照度（4500 Lx）的試驗(yàn)箱中，30 d后取出。并與原料、各輔料進(jìn)行平行對(duì)照研究。

表2 原輔料相容性試驗(yàn)樣品的稱樣量Tab 2 Sample mass of the experimental sample for excipient compatibility

2.3 溶液的制備

取胞嘧啶對(duì)照品和尿嘧啶對(duì)照品各適量，加流動(dòng)相溶解并稀釋制成每1 mL中分別含10 μg的溶液，作為溶液①。另取拉米夫定分離度混合物B對(duì)照品（含拉米夫定與雜質(zhì)Ⅱ）5 mg，置10 mL量瓶中，加流動(dòng)相2 mL，振搖使溶解，再精密加入溶液①1 mL，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。

取拉米夫定原料約50 mg，置100 mL量瓶中，加流動(dòng)相振搖使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，作為拉米夫定原料藥原始溶液。

按表2取原料和原輔料相容性樣品適量，置100 mL量瓶中，加流動(dòng)相適量振搖使拉米夫定溶解，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液；精密量取供試品溶液1 mL，置50 mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，再精密量取2 mL，置20 mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，作為對(duì)照溶液。另稱取相對(duì)應(yīng)的輔料適量，置100 mL量瓶中，加流動(dòng)相振搖，濾過，取續(xù)濾液作為輔料溶液。

取水楊酸對(duì)照品適量，精密稱定，加流動(dòng)相溶解并定量稀釋，制成每1 mL中約含0.5 μg的溶液，作為水楊酸對(duì)照品溶液。

2.4 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

取“2.3”項(xiàng)下各種溶液分別精密量取10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。拉米夫定與混合輔料的因素試驗(yàn)典型色譜圖如圖2所示。結(jié)果顯示胞嘧啶、尿嘧啶、雜質(zhì)Ⅱ和拉米夫定峰的分離度均大于1.5，說明色譜系統(tǒng)適用性符合要求。

圖2 拉米夫定片原輔料相容性高效液相色譜圖Fig 2 HPLC chromatogram of the mixture of lamivudine and accessories

2.5 影響因素試驗(yàn)

采用目視法對(duì)外觀性狀進(jìn)行觀察，HPLC法對(duì)雜質(zhì)進(jìn)行分析，結(jié)果可見拉米夫定原料在高溫、高濕、強(qiáng)光條件下外觀性狀和含量均未發(fā)生明顯變化。圖2及表3結(jié)果表明各樣品各種條件下均未產(chǎn)生水楊酸的雜質(zhì)；光照、高溫條件下，雜質(zhì)未有變化，樣品外觀性狀、含量均未有顯著變化；高濕試驗(yàn)條件下，拉米夫定與微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉、歐巴代產(chǎn)生了新雜質(zhì)胞嘧啶，雜質(zhì)Ⅰ和其他雜質(zhì)略有增加，總雜質(zhì)也略有增加，但新產(chǎn)生雜質(zhì)胞嘧啶和其他雜質(zhì)的限度均符合拉米夫定片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)限度要求和ICH Q3限度要求。

表3 主藥與各輔料相容性研究結(jié)果Tab 3 Raw material/excipient compatibility test

3 討論

3.1 影響因素

從研究結(jié)果看，拉米夫定片原輔料相容性試驗(yàn)各輔料和原料在高溫和光照條件下雜質(zhì)均無明顯變化，原輔料相容性較好；在高濕條件下拉米夫定原料，輔料微晶纖維素、羧甲淀粉鈉、歐巴代包衣粉和全輔料雜質(zhì)均有所增加，可能是由于水分子的參與，有助于原輔料反應(yīng)基團(tuán)的接觸，從而加速雜質(zhì)的降解速度，對(duì)樣品的穩(wěn)定性帶來一定的影響。結(jié)果提示拉米夫定片要選擇防水較好的薄膜包衣預(yù)混料，另外在產(chǎn)品的外包裝上要特別注意防潮包裝材料的選擇，因此在生產(chǎn)工藝選擇直接壓片工藝比傳統(tǒng)濕法制粒再壓片的工藝更合理。

3.2 雜質(zhì)變化原因討論

從本研究結(jié)果看，拉米夫定與歐巴代在高濕條件下，雜質(zhì)胞嘧啶的量顯著增加，查閱相關(guān)文獻(xiàn)[17-18]，推測(cè)其可能的原因?yàn)椋簹W巴代是一種良好的薄膜衣包衣系統(tǒng)，其吸濕相對(duì)其他輔料更強(qiáng)，而拉米夫定的合成主要由酯化、環(huán)合、酰化、耦合、還原五步組成，而最后一步還原必須在無水條件下進(jìn)行，在高濕條件下拉米夫定易氧化形成耦合后的中間體，然后水解形成胞嘧啶。

3.3 小結(jié)

隨著中國(guó)加入ICH，中國(guó)的藥品注冊(cè)均需遵守ICH的基本原則，其中《新藥制劑中的雜質(zhì)》[Q3B（R2）]和《藥品研發(fā)》[Q8（R2）]對(duì)原料藥與輔料的相容性研究做了明確規(guī)定，相容性研究可發(fā)現(xiàn)藥物與輔料發(fā)生的物理化學(xué)作用，其預(yù)測(cè)和指導(dǎo)性能對(duì)藥物輔料篩選意義重大，為仿制藥順利通過一致性評(píng)價(jià)篩選出最優(yōu)化的處方工藝。