火焰原子吸收光譜法測定那屈肝素鈣中的鈉

（北京賽升藥業(yè)股份有限公司，北京 100176）

那屈肝素鈣是以豬腸黏膜來源的肝素為原料，采用亞硝酸解聚后，精制而得的硫酸氨基葡聚糖的鈣鹽，是低分子肝素的一種。低分子肝素經(jīng)幾十年的發(fā)展，已成為抗凝市場中舉足輕重的藥物，具有生物利用度高、半衰期長、抗凝效果好和出血傾向小等特點，在臨床上表現(xiàn)出極大的優(yōu)勢，已廣泛用于血栓栓塞性疾病的防治[1-3]。而那屈肝素鈣作為一種新型的抗血栓形成藥物，相比低分子肝素有明顯的活性，抗栓效果突出、出血風(fēng)險低于肝素、對血小板幾乎無影響，在臨床上發(fā)揮著重要作用。

那屈肝素鈣結(jié)構(gòu)復(fù)雜，生產(chǎn)過程中引入及產(chǎn)生的雜質(zhì)是影響藥品安全的重要因素。那屈肝素鈣在其制備工藝中需經(jīng)過氯化鈣的轉(zhuǎn)鹽后去除多余的鈉鹽，終產(chǎn)品會有痕量的鈉殘留。為了控制那屈肝素鈣中鈉的殘留量，同時避免人體攝入鈉過多及保證原料藥中鈉含量的批間一致性，開發(fā)那屈肝素鈣原料藥中鈉含量的殘留檢測方法尤為重要?；鹧嬖游展庾V法是測定痕量鈉含量的最佳技術(shù)手段之一[4]，是一種操作快速簡便、準(zhǔn)確度高、分析周期短、重復(fù)性好的分析方法。本文通過大量的研究工作，以氯化銫為消電離劑，首次建立了測定那屈肝素鈣中痕量鈉離子殘留的檢測方法，該方法結(jié)果穩(wěn)定，準(zhǔn)確可靠。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

WFX 120型火焰原子吸收分光光度計（北京瑞利分析儀器公司）；鈉空心陰極燈（國家有色金屬及電子材料分析測試中心）；燃?xì)鉃楦呒円胰?；BP211D型電子天平（德國賽多利斯股份有限公司，感量：0.01 mg）。

1.2 試藥

那屈肝素鈣原料藥（本公司自制，批號：20190717，20190719，20190722）；鈉單元素溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)[中國計量科學(xué)研究院，批號GBW（E）080127 19052]；鹽酸，氯化銫（分析純，天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所）。

2 方法與結(jié)果

2.1 光譜條件

光源：鈉空心陰極燈；波長：589.0 nm；燈電流：3.0 mA；狹縫：0.2 nm；燃燒器高度：7 mm；乙炔流量：1.2 L/min；空氣流量：7.0 L/min。

2.2 溶液的制備

2.2.1 空白溶液的制備 取氯化銫約0.635 g，精密稱定，置于500 ml量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸（量取鹽酸4.2 ml，用水稀釋至500 ml）溶解并稀釋至刻度（每1 ml中含氯化銫1.27 mg）。

2.2.2 鈉標(biāo)準(zhǔn)貯備液的制備 精密量取鈉單元素溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（1000 μg/ml）1 ml，置100 ml量瓶中，加氯化銫的鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，即得10 μg/ml的鈉單元素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)貯備液。

2.2.3 供試品溶液的制備 稱取供試品溶液約30 mg，置于100 ml量瓶中，加氯化銫的鹽酸溶液定容至刻度，搖勻。

2.3 檢測條件的優(yōu)化

2.3.1 狹縫寬度 火焰原子吸收光譜法測定鈉含量的主要干擾因素有：光譜干擾、化學(xué)干擾、物理干擾和電離干擾，而光譜干擾主要是由光源和原子化器中的譜線重疊、光散射和分子吸收引起的，可通過調(diào)節(jié)狹縫寬度來改變或消除[5-7]。狹縫寬度直接影響分析譜線的光譜帶寬，與信噪比相關(guān)。因此試驗了狹縫寬度對0.6 μg/ml鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的影響，結(jié)果見表1。由表1可知，當(dāng)狹縫寬度由0.2 nm變?yōu)?.4 nm時，鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度降低，故選擇狹縫寬度為0.2 nm。

表1 狹縫寬度對鈉吸收的影響

2.3.2 燈電流 取2.2.2項下鈉標(biāo)準(zhǔn)貯備液，稀釋至0.6 μg/ml，按2.1項下光譜條件，只改變燈的電流大小，測定鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度。結(jié)果見圖1。由圖1可見，燈電流對鈉吸光度有著顯著影響，鈉的吸光度隨燈電流增大而降低，因此選擇燈電流為3 mA。

圖1 燈電流對鈉（0.6 μg/ml）吸收的影響

2.3.3 消電離劑的選擇 鈉離子在空氣-乙炔火焰中易電離，使得參與能級躍遷的基態(tài)原子減少，加入比其更容易電離的銫作電離抑制劑，可提供足夠的電子使電離平衡向生成基態(tài)原子的方向移動[8-10]。本文選擇氯化銫作為電離抑制劑，配制濃度為0.5，0.75，1.0，1.27，1.5 mg/ml的系列氯化銫鹽酸溶液，分別用上述含有不同濃度氯化銫的鹽酸溶液配制0.6 μg/ml的鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液進行測定，結(jié)果顯示，鹽酸溶液中含1.27 mg/ml氯化銫時，吸光度最高，因此選用含1.27 mg/ml氯化銫的鹽酸溶液為電離抑制劑。

2.4 方法學(xué)驗證

2.4.1 專屬性 分別取去離子水、空白稀釋劑（含氯化銫的鹽酸溶液）、0.6 μg/ml鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液及那屈肝素鈣供試品溶液，在589.0 nm處測定吸光度，比較三者的響應(yīng)值，結(jié)果見表2。由表2可見，去離子水和空白溶劑不干擾樣品溶液的測定，說明該方法的專屬性良好。

表2 專屬性實驗結(jié)果

2.4.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密量取鈉單元素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)貯備液（10 μg/ml）0.2，0.6，0.9，1.2、1.5 ml，分別置于5個10 ml量瓶中，加入稀釋劑定容至刻度，搖勻，制得0.2，0.6，0.9，1.2，1.5 μg/ml的系列鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液，依法測定。結(jié)果表明，鈉離子在0.2～1.5 μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為：A=0.4533C+0.0304，r=0.9999。

2.4.3 方法的檢出限及定量限 按照試驗方法制備試劑空白溶液20份，測定，求其標(biāo)準(zhǔn)偏差（SD），以3倍的SD對應(yīng)的濃度值作為該方法的檢出限（LOD），以10倍的SD為定量限（LOQ）[11-12]。測得LOD和LOQ分別為0.006，0.020 μg/ml。

2.4.4 儀器精密度 取濃度為0.6 μg/ml的鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液，連續(xù)測定6次，計算精密度RSD為0.79 %。結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.4.5 重復(fù)性 取本公司自制的那屈肝素鈣原料藥（批號：20190717），按2.2.3項下方法制備供試品溶液，平行配制6份，照原子吸收光譜法（標(biāo)準(zhǔn)曲線法），在589.0 nm波長處測定，測得那屈肝素鈣中鈉的平均含量為0.13 %，RSD為1.22 %（n=6），說明方法的重復(fù)性良好。

2.4.6 穩(wěn)定性實驗 按2.2.3項下方法制備供試品溶液，分別于第0，2，4，6，8，12 h，照原子吸收光譜法（標(biāo)準(zhǔn)曲線法），在589.0 nm波長處測定鈉的吸光度，考察其穩(wěn)定性。結(jié)果顯示，在12 h內(nèi)的鈉吸光度變化的RSD為1.20 %（n=6），說明那屈肝素鈣供試液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.7 回收率實驗 采用標(biāo)準(zhǔn)加樣法測定回收率。精密稱取同一批號的那屈肝素鈣供試品9份，每份約30 mg，置100 ml量瓶中，分成3組，每組分別加入10 μg/ml鈉標(biāo)準(zhǔn)貯備液4.8，6.0，7.2 ml，再加入氯化銫鹽酸溶液定容至刻度，搖勻，制備低、中、高濃度的供試品溶液，結(jié)果見表3。鈉離子的平均回收率為100.72 %，RSD為1.24 %。

表3 那屈肝素鈣中鈉測定的回收率

2.4.8 樣品測定 按2.4.2和2.2.3項下方法制備標(biāo)準(zhǔn)曲線和供試品溶液，并進行測定，結(jié)果見表4。

表4 3批樣品測定結(jié)果

3 討論

本文建立了火焰原子吸收光譜法測定那屈肝素鈣中鈉元素含量的方法。鈉在乙炔火焰中易電離，因此本實驗中以氯化銫作為電離抑制劑，提高了方法的準(zhǔn)確度和靈敏度。該方法操作簡便，分析時間短、干擾少，將在那屈肝素鈣原料藥質(zhì)量控制中發(fā)揮重要的作用。