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    黃芩苷緩釋膜應(yīng)用于重度慢性牙周炎的體外抑菌效果

    2020-12-02 08:14:14陳苑景向東盧惠冰
    關(guān)鍵詞:齦溝牙周袋牙周病

    陳苑, 景向東, 盧惠冰

    (廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院,廣東廣州 510405)

    慢性牙周炎,是由局部牙菌斑引起牙周支持組織進(jìn)行性破壞的慢性疾病,影響患者生活質(zhì)量。黃芩,味苦,性寒,入心、肺、膽、大腸經(jīng),具有清熱燥濕、瀉火解毒、涼血的功效,對牙周病抗菌抗炎療效顯著[1-2]。黃芩苷,是黃芩發(fā)揮藥效的主要成分,它是黃酮類化合物,色黃、味苦。研究[3-4]表明,黃芩苷既有廣譜抗菌的特點,又有抗常見耐藥菌的優(yōu)點。本研究針對重度慢性牙周炎的特征,將黃芩的有效成分黃芩苷制作成緩釋膜,體外培養(yǎng)患者齦溝液中的菌群,觀察4種不同含量黃芩苷緩釋膜的體外抑菌效果,為該緩釋膜的口腔臨床應(yīng)用提供實驗數(shù)據(jù)參考,現(xiàn)將研究結(jié)果報道如下。

    1 對象與方法

    1.1臨床資料

    1.1.1 研究對象 選取自2018 年3 月至2018 年6 月來廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院口腔科就診的重度慢性牙周炎患者20例,其中男12例,女8例,年齡區(qū)間48~63 歲,年齡(55.23 ± 4.12)歲,均簽署知情同意書。

    1.1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)[5]①臨床診斷為重度慢性牙周炎,至少有1 位點牙周袋>6 mm,附著喪失≥5 mm,X線片顯示牙槽骨吸收超過根長的1/2;②無全身系統(tǒng)性疾病史。

    1.1.3 排除標(biāo)準(zhǔn)[5]①3 個月內(nèi)使用過抗生素者;②伴有因創(chuàng)傷或不良修復(fù)體導(dǎo)致的牙周病者;③伴有頜面腫瘤或黏膜病累及牙周軟組織者;④妊娠期或哺乳期婦女。

    1.2方法

    1.2.1 材料 黃芩苷對照品(粉劑)(北京北納創(chuàng)聯(lián)公司,批號:zl-a-018),純度>98%;聚羧乙烯(廣州偉伯科技有限公司);聚乙烯醇(斯百全化學(xué)有限公司);羥甲基纖維素鈉(上海吉至生化科技有限公司)。

    1.2.2 儀器 SHA-B 恒溫水浴振蕩器(上海比郎儀器公司);DGG-924BD 電熱恒溫干燥箱(上海森信公司);ZW36S24W 型紫外線殺菌燈(江蘇巨光光電科技有限公司);GHP-9080 隔水式恒溫培養(yǎng)箱(上海印溪儀器表有限公司)。

    1.2.3 黃芩苷緩釋膜配制 將緩釋膜材料聚羧乙烯5.0 g、聚乙烯醇15.0 g、羥甲基纖維素鈉30.0 g混合后加入適量溫水,水浴加熱溶解,再倒入甘油40 mL攪拌均勻,將混合液均分為4份,然后分別加入黃芩苷粉劑0.5、1.0、1.5、2.0 g,慢慢攪拌均勻,涂膜、烘干、成膜,膜厚度均勻3 mm為成功,再用壓花工具將膜壓成直徑為5 mm的圓形膜片備用。

    1.2.4 體外降解實驗 將制備好的緩釋片分別置于37 ℃9.0 g/L 氯化鈉注射液中,每天定時取出緩釋膜1次,洗滌、干燥至質(zhì)量無變化后作記錄。

    1.2.5 體外抑菌試驗

    1.2.5.1 齦溝液采集 患者經(jīng)過基礎(chǔ)齦上潔治、齦下刮治及根面平整治療后1 周,將40#滅菌紙尖置入牙周袋袋底處,靜止30 s取出,將紙尖立即放入標(biāo)記好的無菌EP 管(含1 mL 磷酸鹽緩沖液)中。取樣采集一個位點一根紙尖,分別為唇頰、舌側(cè)的近、遠(yuǎn)中軸角處,4位點/牙,然后快速放入冰箱儲存?zhèn)溆谩?/p>

    1.2.5.2 細(xì)菌復(fù)蘇與培養(yǎng) 將EP 管內(nèi)滅菌試紙中齦溝液細(xì)菌接種于斯氏血液瓊脂,于37 ℃厭氧環(huán)境中培養(yǎng)48 h后備用。

    1.2.5.3 瓊脂擴(kuò)散法 參照紙片擴(kuò)散法,取已制備好的4種含量的黃芩苷緩釋膜,用無菌鑷子分別放置于培養(yǎng)基平板上4個區(qū)域內(nèi)。每兩個膜之間的中心距離不小于35 mm,輕壓標(biāo)本使其與瓊脂平板充分接觸,觀察細(xì)菌的生長情況。

    1.3觀察指標(biāo)測量緩釋膜體質(zhì)量,通過算式計算緩釋膜降解率。降解率=(降解前質(zhì)量- 降解后質(zhì)量)÷ 降解前質(zhì)量× 100%。用游標(biāo)尺量取抑菌環(huán)直徑,通過測量抑菌環(huán)的直徑對樣品進(jìn)行療效評估。計算抑菌穩(wěn)定性,抑菌穩(wěn)定性=|當(dāng)日抑菌圈直徑- 隔日抑菌圈直徑|。

    1.4統(tǒng)計方法采用SPSS 20.0 統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)。采用正相關(guān)檢驗分析黃芩苷含量與降解率的關(guān)系;計量資料以均數(shù)± 標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,采用t檢驗分析4 種不同含量黃芩苷緩釋膜的抑菌效果。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1緩釋膜體外降解率表1 結(jié)果顯示:含黃芩苷0.5、1.0、1.5、2.0 g 的緩釋膜的8 d 降解率均>91%, 10 d 降解率均>96%, 12 d 降解率均為100%,表明含不同質(zhì)量黃芩苷的緩釋膜體外降解率接近,均可在12 d 內(nèi)完全降解。根據(jù)正相關(guān)檢驗,黃芩苷含量與緩釋膜降解率的|r|=0.215 <0.3,提示變量之間相關(guān)程度較弱。表明黃芩苷含量與緩釋膜降解率無明顯相關(guān)性。

    表1 不同含量黃芩苷緩釋膜體外降解率比較Table 1 Comparison of the degradation rates of the sustained-release membranes containing different contents of baicalin (p/%)

    2.2抑菌效果評價

    2.2.1 抑菌圈直徑 本研究通過測量抑菌圈直徑大小進(jìn)行評價,在放置緩釋膜后第1、3、5、7 天測量,具體數(shù)據(jù)見表2。結(jié)果顯示:緩釋膜抑菌時間1 d(短效)~7 d(長效)的抑菌圈直徑,均是含黃芩苷0.5 g 的緩釋膜最小,含黃芩苷2.0 g 的緩釋膜最大,各組間比較,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。表明含黃芩苷2.0 g 的緩釋膜抑菌作用最強(qiáng),含黃芩苷1.5 g 的次之,且抑菌作用與黃芩苷含量呈正相關(guān)。

    2.2.2 抑菌穩(wěn)定性 抑菌穩(wěn)定性絕對值越小,穩(wěn)定性越好。圖1 結(jié)果顯示:含黃芩苷2.0 g 的緩釋膜7 d內(nèi)抑菌穩(wěn)定性絕對值最小,含黃芩苷1.5 g的次之,各組間比較,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。表明含黃芩苷2.0 g 的緩釋膜穩(wěn)定性最好,含黃芩苷1.5 g 的次之,抑菌圈直徑隨時間的穩(wěn)定性與黃芩苷含量呈正相關(guān)。

    表2 不同含量黃芩苷緩釋膜抑菌圈直徑比較Table 2 Comparison of the antibacterial ring diameter of the sustained-release membranes containing different contents of baicalin ( ± s,d/mm)

    表2 不同含量黃芩苷緩釋膜抑菌圈直徑比較Table 2 Comparison of the antibacterial ring diameter of the sustained-release membranes containing different contents of baicalin ( ± s,d/mm)

    注:各組間比較,P <0.01

    黃芩苷含量(m/g)0.5 1.0 1.5 2.0緩釋膜抑菌時間(t/d)1 16.10 ± 4.72 18.32 ± 4.31 22.11 ± 3.21 25.03 ± 2.97 3 17.23 ± 4.14 19.08 ± 4.15 22.62 ± 2.82 25.30 ± 2.58 5 18.67 ± 3.91 20.29 ± 3.59 23.35 ± 2.97 26.01 ± 2.13 7 17.53 ± 5.06 19.27 ± 4.56 23.06 ± 3.68 26.02 ± 3.57

    圖1 不同含量黃芩苷緩釋膜抑菌穩(wěn)定性比較( ± s,d/mm)Figure 1 Comparison of the antibacterial stabilities of the sustained-release membranes containing different contents of baicalin( ± s,d/mm)

    綜上得出,含黃芩苷2.0 g 的緩釋膜抑菌效果最佳且最穩(wěn)定,含1.5 g的次之。

    3 討論

    在深牙周袋內(nèi)齦溝液中的致病菌,貫穿著整個牙周病病情發(fā)展,而且非常頑固[6],對于重度牙周炎患者的治療,控制齦溝液內(nèi)致病菌是最為棘手的關(guān)鍵問題。在臨床上,經(jīng)過基礎(chǔ)齦上潔治、深層齦下刮治及根面平整治療后,被重度炎癥破壞的組織恢復(fù)需要一定的時間,但一部分患者在這期間牙周袋內(nèi)容易再次發(fā)生感染,影響預(yù)后,造成患者生理上與心理上的困擾。目前,對于這一部分易感人群,提出在維護(hù)期期間牙周袋內(nèi)放置緩釋藥物,達(dá)到有效且穩(wěn)定地抑制牙周炎致病菌的功效,創(chuàng)造更有利于牙周組織恢復(fù)的微環(huán)境。

    在早期研究中,黃芩苷含漱液在牙周病中的抑菌作用與抗炎作用已得到了證實[7-8]。含漱液對牙齦炎及輕中度牙周病療效顯著,但對于重度牙周病,牙周袋深、狹窄等問題,未必能發(fā)揮很好的效果。而緩釋膜的優(yōu)勢在于可根據(jù)牙周袋形狀修剪,放置袋內(nèi)至袋底后可持續(xù)、有效、充分地釋放藥力。牙周炎的主要致病微生物包括牙齦卟啉單胞菌、福賽斯坦納菌、牙密螺旋體、伴放線放線桿菌[9]等。本研究提取重度牙周炎患者的自體齦溝液進(jìn)行體外研究,與傳統(tǒng)單一牙周致病菌的體外抑菌實驗相比,更能模擬患者牙周袋內(nèi)的菌群。臨床上含黃芩苷1.5 g 與2.0 g 的緩釋膜更適合應(yīng)用于重度牙周炎的輔助治療,而濃度過高的緩釋膜可能會破壞牙周組織的微環(huán)境,因此,本試驗采用0.5、1.0、1.5、2.0 g等4組質(zhì)量的黃芩苷粉劑進(jìn)行研究[10]。本研究結(jié)果顯示,此種緩釋膜的降解速度與黃芩苷的含量無顯著相關(guān)性,此方法制備的緩釋膜可在12 d 左右完全降解,無需擔(dān)心殘留在牙周袋內(nèi),7 d內(nèi)抑菌效果穩(wěn)定。

    綜上所述,本研究結(jié)果再次證明了黃芩苷對牙周炎致病菌的抑菌作用,且其緩釋膜劑型更持續(xù)、穩(wěn)定。黃芩苷緩釋膜在口內(nèi)慢性釋放,隨唾液進(jìn)入胃腸道刺激小,且對大腸桿菌、金色葡萄糖菌、幽門螺桿菌等腸道致病菌有抑制作用[11],可長期在口內(nèi)使用,對提高牙周治療效果值得再進(jìn)一步探究與應(yīng)用。為進(jìn)一步證實其臨床應(yīng)用前景,本團(tuán)隊計劃下一步招募志愿者,開展小范圍的臨床應(yīng)用研究,以期為重度慢性牙周炎的臨床治療提供科學(xué)依據(jù)。

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