聯(lián)合檢測外周血T淋巴細(xì)胞及DNT細(xì)胞在惡性腫瘤早期診斷中的應(yīng)用

劉曉華 沈迎春 王勇

[摘要] 目的 研究聯(lián)合檢測外周血T淋巴細(xì)胞及DNT細(xì)胞在惡性腫瘤早期診斷中的應(yīng)用效果。 方法 方便選擇該院2017年1月—2019年1月期間治療的乳腺腫瘤、腸道腫瘤、肺腫瘤患者各40例，3組患者均分為良性、惡性組，觀察所有患者外周血T淋巴細(xì)胞及DNT細(xì)胞，并分析早中晚與晚期患者上述指標(biāo)。 結(jié)果 乳腺腫瘤惡性患者CD3+細(xì)胞（65.75±4.36）%、CD3+CD4+細(xì)胞（34.85±4.89）、CD3+CD4+/CD3+CD8+（1.05±0.32）均低于良性組（75.54±4.21）%、（43.42±5.21）%、（1.85±0.25），CD3+CD8+（28.85±4.21）%細(xì)胞高于良性組（24.42±4.25）%（t=7.174、5.355、8.657、-3.297，P =0.000、0.000、0.000、0.002），腸道腫瘤惡性患者CD3+細(xì)胞（70.47±5.05）%、CD3+CD4+細(xì)胞（34.85±2.10）%、CD3+CD4+/CD3+CD8+（1.05±0.16）均低于良性組（77.54±6.85%、（44.54±3.52）%、（1.65±0.21），CD3+CD8+細(xì)胞（35.46±1.85）%高于良性組（25.85±2.05）%（t=3.715、10.573、10.164、-15.564，P=0.001、0.000、0.000、0.000），肺腫瘤惡性患者CD3+細(xì)胞（66.85±5.21）%、CD3+CD4+細(xì)胞（36.85±3.65）%、CD3+CD4+/CD3+CD8+（1.02±0.23）均低于良性組（74.45±5.85）%、（42.21±4.25）%、（1.71±0.25），CD3+CD8+細(xì)胞（28.54±2.54）%高于良性組（24.88±3.05）%（t=4.347、4.291、9.092、-4.138，P=0.000、0.000、0.000、0.000），乳腺腫瘤組、腸道腫瘤組、肺腫瘤組惡性DNT細(xì)胞均高于良性患（P<0.05）。 結(jié)論 對于惡性腫瘤患者可實(shí)施外周血T淋巴細(xì)胞聯(lián)合DNT細(xì)胞檢測，良惡性之間存在一定差異，能夠提高惡性腫瘤患者診斷準(zhǔn)確率，確保患者及時診斷并治療，值得應(yīng)用。

[關(guān)鍵詞] 外周血T淋巴細(xì)胞;DNT細(xì)胞;惡性腫瘤;診斷

[中圖分類號] R734? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1674-0742（2020）08（a）-0004-04

Application of Combined Detection of Peripheral Blood T Lymphocytes and DNT Cells in Early Diagnosis of Malignant Tumors

LIU Xiao-hua1， SHEN Ying-chun2， WANG Yong1

1.Department of Laboratory Medicine， Changle County People's Hospital， Weifang， Shandong Province， 262400 China;2.Hongshagou Central Hospital of Anqiu City， Weifang， Shandong Province， 262000 China

[Abstract] Objective To study the effect of combined detection of peripheral blood T lymphocytes and DNT cells in the early diagnosis of malignant tumors. Methods From January 2017 to January 2019， 40 patients with breast cancer， intestinal cancer and lung cancer were convenient selected. All patients were divided into benign and malignant groups. The peripheral blood T-lymphocytes and DNT cells of all patients were observed， and the above indexes of early， middle， late and late patients were analyzed. Results CD3+ cells （65.75±4.36）%， CD3+CD4+ cells （34.85±4.89）， CD3+CD4+/CD3+CD8+ （1.05±0.32） in breast cancer malignant patients were lower than benign group （75.54±4.21）%， （43.42± 5.21）%， （1.85±0.25）， CD3+CD8+（28.85±4.21）% cells were higher than the benign group （24.42±4.25）% （t=7.174， 5.355， 8.657， -3.297， P=0.000， 0.000， 0.000，0.002）， CD3+ cells （70.47±5.05）%， CD3+CD4+ cells （34.85±2.10）%， CD3+CD4+/CD3+CD8+ （1.05±0.16） in malignant tumor patients were lower than the benign group （77.54±6.85%， （44.54±3.52）%， （1.65±0.21）， CD3+CD8+ cells （35.46±1.85）% were higher than the benign group （25.85±2.05）% （t=3.715， 10.573， 10.164， -15.564， P=0.001， 0.000 ， 0.000， 0.000）， CD3+ cells （66.85±5.21）%， CD3+CD4+ cells （36.85±3.65）%， CD3+CD4+/CD3+CD8+ （1.02±0.23） were lower than the benign group （74.45±5.85）%， （42.21±4.25）%， （1.71±0.25）， CD3+CD8+ cells （28.54±2.54）% are higher than the benign group （24.88±3.05）% （t=4.347， 4.291，? 9.092，-4.138，P= 0.000， 0.000， 0.000， 0.000）， malignant DNT cells in breast tumor group， intestinal tumor group， and lung tumor group were higher than those in benign patients （P<0.05）.Conclusion For patients with malignant tumors， peripheral blood T-lymphocytes combined with DNT cells can be detected. There is a certain difference between the benign and malignant， which can improve the diagnostic accuracy of patients with malignant tumors， ensure the timely diagnosis and treatment of patients， and is worthy of application.

[Key words] Peripheral blood T lymphocytes; DNT cells; Malignant tumors; Diagnosis

惡性腫瘤的出現(xiàn)，嚴(yán)重威脅了人類的健康與生命，目前全球惡性腫瘤總體發(fā)病情況已經(jīng)逐年出現(xiàn)上升，目前惡性腫瘤的出現(xiàn)已經(jīng)嚴(yán)重威脅到人類生存[1]。但對于惡性腫瘤的診療原則，就在于早期治療，但由于其發(fā)病存在一定隱匿性，缺乏有效的檢測指標(biāo)，使得患者診斷時期已經(jīng)為中晚期，延誤了最佳治療時間[2]。但腫瘤的發(fā)生、預(yù)后與患者免疫功能存在一定關(guān)系，其中外周血T淋巴細(xì)胞能夠及時反映患者免疫功能，在腫瘤診斷中具有重要意義[3]。而雙陰性T淋巴細(xì)胞（DNT）被證實(shí)屬于免疫調(diào)節(jié)性T細(xì)胞，目前也在臨床獲得一定認(rèn)可;該文通過將外周血T淋巴細(xì)胞及DNT細(xì)胞納入研究，方便選擇該院2017年1月—2019年1月期間治療的乳腺腫瘤、腸道腫瘤、肺腫瘤患者各40例，現(xiàn)報(bào)道如下。

1? 資料與方法

1.1? 一般資料

方便抽取該院治療的乳腺腫瘤、腸道腫瘤、肺腫瘤患者均40例，3組患者均分為良性、惡性組，納入標(biāo)準(zhǔn)：①均通過病理、影像學(xué)檢查獲得確診;②所有患者研究取樣時均未進(jìn)行手術(shù)、放療化療;③肢體功能正常，精神正常;④知曉該文研究且愿意參加。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并糖尿病者;②晚期惡性腫瘤，預(yù)計(jì)存活期不超過1個月;③患者及家屬無法積極配合研究者;④相關(guān)資料不完善者。其中乳腺腫瘤組：男性22例，女性18例;年齡在36～68歲之間，平均年齡為（47.54±3.05）歲;良性18例，惡性22例。腸道腫瘤組：男性21例，女性19例;年齡在23～65歲之間，平均年齡為（47.32±3.33）歲;良性20例，惡性20例。肺腫瘤組：男性23例，女性17例;年齡在25～69歲之間，平均年齡為（48.96±3.75）歲;良性19例，惡性21例。上述患者一般資料之間，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），可進(jìn)行研究。

1.2? 方法

要求所有患者生活飲食均處于日常狀態(tài)，空腹?fàn)顟B(tài)最佳，采取經(jīng)乙二胺四乙酸抗凝的靜脈血2 mL在采集后6 h內(nèi)處理，根據(jù)檢測要求，分別向編號的流失試管中加入20 μL單克隆抗體后加入100 μL混勻的抗凝血，混勻避光，并在室溫下孵育15 min，加入溶血劑，溶解未標(biāo)記細(xì)胞及紅細(xì)胞，按照操作流程檢測。使用四色流式術(shù)檢測T淋巴細(xì)胞、DNT細(xì)胞[4]。

1.3? 統(tǒng)計(jì)方法

該研究采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料用（x±s）表示，進(jìn)行t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2? 結(jié)果

2.1? 乳腺腫瘤組患者外周血T淋巴細(xì)胞

乳腺腫瘤惡性患者CD3+細(xì)胞、CD3+CD4+細(xì)胞、CD3+CD4+/CD3+CD8+均低于良性組，CD3+CD8+細(xì)胞高于良性組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1。

2.2? 腸道腫瘤組患者外周血T淋巴細(xì)胞

腸道腫瘤患者CD3+細(xì)胞、CD3+CD4+細(xì)胞、CD3+CD4+/CD3+CD8+均低于良性組，CD3+CD8+細(xì)胞高于良性組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表2。

2.3? 肺腫瘤組患者外周血T淋巴細(xì)胞

肺腫瘤患者CD3+細(xì)胞、CD3+CD4+細(xì)胞、CD3+CD4+/CD3+CD8+均低于良性組，CD3+CD8+細(xì)胞高于良性組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表3。

2.4? 腫瘤患者DNT細(xì)胞檢測情況

乳腺腫瘤組、腸道腫瘤組、肺腫瘤組惡性DNT細(xì)胞均高于良性患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表4。

3? 討論

在腫瘤方面的研究中，由于早期不伴轉(zhuǎn)移，可以進(jìn)行手術(shù)切除根治術(shù)，為患者贏得了一定的生存機(jī)會，因此全球均在尋找準(zhǔn)確、快速的腫瘤診斷技術(shù)[5]。既往臨床中診斷需要根據(jù)病灶的大小、形狀、質(zhì)地等情況，判斷患者性質(zhì)，會使得術(shù)前診斷出現(xiàn)誤差，但多數(shù)患者早期并無特異癥狀，使得診斷期間會出現(xiàn)忽視，使得早期難以發(fā)現(xiàn)[6]。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)多種與腫瘤相關(guān)的標(biāo)志物，但或多或少會存在一定影響，或靈敏度不高，使得診斷出現(xiàn)一定難度[7]。

目前國內(nèi)外均發(fā)現(xiàn)腫瘤患者免疫功能會出現(xiàn)紊亂，通過細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測外周血T淋巴細(xì)胞亞群，能夠用于發(fā)現(xiàn)、鑒定惡性腫瘤，在臨床獲得一定認(rèn)可[8-9]。該文通過將外周血T淋巴細(xì)胞及DNT細(xì)胞納入研究，選擇3種不同的腫瘤患者，通過急性良惡性分組，結(jié)果顯示：乳腺腫瘤惡性患者CD3+細(xì)胞（65.75±4.36）%、CD3+CD4+細(xì)胞（34.85±4.89）、CD3+CD4+/CD3+CD8+（1.05±0.32）均低于良性組（75.54±4.21）%、（43.42±5.21）%、（1.85±0.25），CD3+CD8+（28.85±4.21）%細(xì)胞高于良性組（24.42±4.25）%（P<0.05），腸道腫瘤惡性患者CD3+細(xì)胞（70.47±5.05）%、CD3+CD4+細(xì)胞（34.85±2.10）%、CD3+CD4+/CD3+CD8+（1.05±0.16）均低于良性組（77.54±6.85）%、（44.54±3.52）%、（1.65±0.21），CD3+CD8+細(xì)胞（35.46±1.85）%高于良性組（25.85±2.05）%（ P<0.05），肺腫瘤惡性患者CD3+細(xì)胞（66.85±5.21）%、CD3+CD4+細(xì)胞（36.85±3.65）%、CD3+CD4+/CD3+CD8+ （1.02±0.23）均低于良性組（74.45±5.85）%、（42.21±4.25）%、（1.71±0.25），CD3+CD8+細(xì)胞（28.54±2.54）%高于良性組（24.88±3.05）%（ P<0.05），乳腺腫瘤組、腸道腫瘤組、肺腫瘤組惡性DNT細(xì)胞均高于良性患（P<0.05）。 能夠看出3種不同的良惡性腫瘤患者，存在共同差異，T淋巴細(xì)胞亞群是細(xì)胞免疫的主要免疫應(yīng)答形式，在應(yīng)答過程中，能夠起到良好的免疫調(diào)節(jié)作用[10]。結(jié)果中：乳腺腫瘤組、腸道腫瘤組、肺腫瘤組惡性DNT細(xì)胞均高于良性患者（P<0.05）。其中DNT細(xì)胞屬于目前研究較為廣泛的免疫細(xì)胞，在維持自身免疫耐受與下調(diào)各種免疫應(yīng)答中的作用，已經(jīng)被臨床證實(shí)，屬于抑制性免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞，因此與該文結(jié)果相符，惡性患者DNT均高于良性患者。正常情況下，患者CD4+/CD8+比值降低，能夠說明患者免疫功能低下，容易引起腫瘤繁殖[11]。因此通過外周血T淋巴細(xì)胞亞群鑒別腫瘤的良惡性，其假陽性主要受到患者自身免疫功能的影響[12]。且有研究指出，DNT細(xì)胞在免疫調(diào)節(jié)與排斥反應(yīng)中，均發(fā)揮了有效作用，也是目前免疫學(xué)研究的重點(diǎn)，后期臨床可擴(kuò)大研究，證實(shí)DNT細(xì)胞在研究的研究。趙美淇等[13]學(xué)者在研究中指出，其中健康組CD3+：（70.27±7.46）%，CD4+：（38.62±7.41）%，CD8+：（19.94±8.54）%，CD4+/CD8+：（2.13±0.77）%，CD19+：（13.55±4.01）%，NK：（16.68±5.47）%。腫瘤組：CD3+：（62.19±11.82）%，CD4+：（34.88±10.38）%，CD8+：（21.19±8.49）%，CD4+/CD8+：（1.92±1.06）%，CD19+：（10.57±6.64）%，NK：（18.07±8.24）%。腫瘤組外周血的CD3+、CD4+、CD19+細(xì)胞比例及CD4+/CD8+比值均低于健康組，NK細(xì)胞比例高于健康組 （P<0.05）。亞組分析結(jié)果顯示，不同腫瘤間的CD8+細(xì)胞比例差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P>0.05）;CD3+、CD4+、CD19+、NK細(xì)胞比例及CD4+/CD8+比值（P<0.05）。這一結(jié)果與該文研究一致，外周血T淋巴細(xì)胞可用于惡性腫瘤患者的診斷。

綜上所述，對于惡性腫瘤患者可實(shí)施外周血T淋巴細(xì)胞、DNT細(xì)胞進(jìn)行診斷，在良惡性上存在一定差異，有助于臨床加快惡性腫瘤診斷，并及時獲得治療，值得應(yīng)用。

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（收稿日期：2020-05-09）

[基金項(xiàng)目] 濰坊市科技發(fā)展項(xiàng)目（2018YX108）。

[作者簡介] 劉曉華（1979-），女， 山東濰坊人，本科，主管檢驗(yàn)技師，研究方向：分子免疫學(xué)。

[通信作者] 王勇（1984-），男，山東膠南人，碩士，主管檢驗(yàn)技師，研究方向：分子免疫學(xué)，E-mail：yong_121@163.com。