滅蠅胺在萵筍和油麥菜中殘留消解及膳食風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

馮義志，潘金菊，李瑞娟，王曉玉，齊曉雪，劉同金,于建壘*，梁 林*，左伯軍

（1.山東省農(nóng)藥科學(xué)研究院山東省化學(xué)農(nóng)藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，濟(jì)南 250033；2.山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所，濟(jì)南250100）

滅蠅胺（cyromazine）（圖1），又名環(huán)丙氨嗪，是一種選擇性昆蟲(chóng)生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，具有內(nèi)吸傳導(dǎo)作用，對(duì)雙翅目昆蟲(chóng)的卵及幼蟲(chóng)有特殊生物活性，可使幼蟲(chóng)在形態(tài)上發(fā)生畸變，不能正常化蛹。目前，主要用于防治黃瓜、菜豆、姜、韭菜、食用菌和花卉上的雙翅目害蟲(chóng)，也可用于控制動(dòng)物廄舍內(nèi)的蒼蠅[1-2]。毒理學(xué)研究[3-4]表明，滅蠅胺可導(dǎo)致老鼠乳腺癌的發(fā)生，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)其與其他產(chǎn)生乳腺腫瘤的類(lèi)似物在結(jié)構(gòu)上有一些相似之處。因此，滅蠅胺被美國(guó)環(huán)境保護(hù)署（EPA）列為C類(lèi)致癌物（潛在致癌物）。為保證食品安全，許多國(guó)家和組織已先后制定了滅蠅胺在農(nóng)產(chǎn)品中的最大殘留限量（MRL）標(biāo)準(zhǔn)[5-7]。我國(guó)GB 2763—2019《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中農(nóng)藥最大殘留限量》[8]已經(jīng)制定了滅蠅胺在黃瓜、蔥等農(nóng)產(chǎn)品中20余項(xiàng)限量標(biāo)準(zhǔn)。

圖1 滅蠅胺化學(xué)結(jié)構(gòu)式

目前，有關(guān)滅蠅胺在農(nóng)作物中的殘留消解及其膳食風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估研究較少。張鋒鋒等[2]研究了滅蠅胺在菜豆上的殘留及消解規(guī)律，結(jié)果表明滅蠅胺在菜豆中消解較快，半衰期為3.2～6.1 d，推薦劑量下使用，安全間隔期為7 d。陳麗萍[9]研究表明滅蠅胺在菜用大豆上的半衰期為5.6～6.1 d，在末次施藥后15 d，菜用大豆最終殘留量低于我國(guó)規(guī)定的豆類(lèi)的MRL值（0.5 mg/kg）要求。毛江勝等[10]對(duì)滅蠅胺在韭菜中的殘留量進(jìn)行了檢測(cè)并對(duì)滅蠅胺在韭菜中的膳食風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行了評(píng)估。Zhao等[11]采用液質(zhì)聯(lián)用測(cè)定了雙孢菇中滅蠅胺的殘留量并進(jìn)行了膳食風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，結(jié)果表明雖然滅蠅胺在雙孢菇培養(yǎng)基中降解較慢（半衰期為38.5～53.3 d），但膳食風(fēng)險(xiǎn)結(jié)果表明雙孢菇中滅蠅胺殘留量不會(huì)對(duì)人體健康產(chǎn)生影響。魏茂瓊等[12]研究了兩種濃度的滅蠅胺在平菇培養(yǎng)料中的消解動(dòng)態(tài)規(guī)律，結(jié)果表明滅蠅胺在培養(yǎng)料中的消解半衰期為22.5～24.2 d。蔡春平等[13]研究表明滅蠅胺在銀耳中的降解半衰期為5.6 d，銀耳采收時(shí)滅蠅胺的殘留量符合日本肯定列表制度要求。

目前，中國(guó)正在開(kāi)展滅蠅胺在萵筍和油麥菜中的限量制定工作，而有關(guān)滅蠅胺在萵筍和油麥菜中的殘留消解及對(duì)我國(guó)居民的膳食風(fēng)險(xiǎn)研究均未報(bào)道。本研究通過(guò)1年兩地的田間試驗(yàn)，研究了滅蠅胺在萵筍和油麥菜中的殘留消解及殘留量，結(jié)合滅蠅胺在我國(guó)登記情況和我國(guó)居民的人均膳食結(jié)構(gòu)，對(duì)普通人群的膳食風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行了評(píng)估。

1 材料與方法

1.1 材料和試劑

99.2%滅蠅胺標(biāo)準(zhǔn)品，德國(guó)Dr. Ehrenstorfer公司；氯化鈉（分析純）、乙酸銨（分析純）、甲酸（色譜純），國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；乙腈（色譜純），美國(guó)賽默飛世爾科技公司；C18填料（40～60 μm），天津博納艾杰爾科技有限公司；有機(jī)濾器（0.22 μm），美瑞泰克科技有限公司；純凈水，廣州屈臣氏食品飲料有限公司。

1.2 儀器

LCMS-8030高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀，日本島津公司；MTV-100多管漩渦混合儀，杭州奧盛儀器有限公司；Sorvall ST16臺(tái)式通風(fēng)型離心機(jī)，美國(guó)Thermo Fisher公司；艾柯Exceed-Cd-08實(shí)驗(yàn)室超純水機(jī)，成都唐氏康寧科技發(fā)展有限公司；AL204電子天平，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司。

1.3 分析方法

LCMS-8030液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀；色譜柱：ACCL RSLCPA2色譜柱（100 mm×2.1 mm，2.2 μm）；樣品室溫度：15℃；進(jìn)樣體積：2 μL；流動(dòng)相：0.1%甲酸水溶液＋乙腈（體積比95∶5）；流速：0.4 mL/min；質(zhì)譜條件：電噴霧離子源（ESI）；加熱塊溫度：400℃；干燥氣溫度：250℃；干燥氣流量：15 L/min；霧化氣流量：3 L/min；反應(yīng)氣（Ar）壓力：230 kPa；采集方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式；滅蠅胺母離子：167.10m/z；子離子：125.10m/z（定量）、108.10m/z（定性），碰撞能量20 eV。

1.4 田間試驗(yàn)設(shè)計(jì)

按照NY/T 788—2004《農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則》[14]和《農(nóng)藥登記殘留田間試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》[15]要求設(shè)試驗(yàn)小區(qū)，小區(qū)面積30 m2，重復(fù)3次，隨機(jī)排列，小區(qū)間設(shè)保護(hù)帶，另設(shè)對(duì)照小區(qū)。50%滅蠅胺可溶性粉劑在萵筍和油麥菜上防治斑潛蠅的推薦使用劑量為112.50～168.75 g/hm2，在斑潛蠅發(fā)生初期使用，施藥1～2次。

1.4.1 消解動(dòng)態(tài)試驗(yàn)

在消解動(dòng)態(tài)試驗(yàn)中，按有效成分253.125 g/hm2（推薦最高劑量的1.5倍）的用量施藥于作物生長(zhǎng)期，噴霧1次。分別于施藥后當(dāng)天，1、3、5、7、10、14、21 d采集萵筍和油麥菜樣品。在試驗(yàn)小區(qū)內(nèi)用隨機(jī)的方式采樣，每次在每小區(qū)選擇10個(gè)以上采樣點(diǎn)采集2 kg以上生長(zhǎng)正常的萵筍和油麥菜樣品（所有地上部分），去除明顯腐壞、萎蔫、枯老部分的莖葉，裝入樣本容器中包扎妥當(dāng)。將田間采集的樣本用不銹鋼刀切成1～2 cm大小的碎塊，并于不銹鋼盆中充分混勻。用四分法縮分樣品，分取兩份150 g的樣品，分別裝入封口袋中，并貼好標(biāo)簽，放入-20℃低溫冰柜中貯存。

1.4.2 最終殘留試驗(yàn)

設(shè)2個(gè)施藥劑量：低劑量按有效成分為168.75 g/hm2（推薦最高劑量）的用量，高劑量按有效成分為253.125 g/hm2（推薦最高劑量的1.5倍）的用量，各設(shè)2次和3次施藥，施藥間隔7 d。末次施藥后間隔3、5、7 d采集萵筍（萵筍葉、萵筍莖）和油麥菜樣品。樣品采集及制備同動(dòng)態(tài)樣品。

1.5 樣品處理

將樣品用食品調(diào)理儀進(jìn)行粉碎，準(zhǔn)確稱(chēng)取樣品10.0 g至50 mL具塞塑料離心管內(nèi)，加入10 mL乙酸銨-乙腈（體積比1∶4）混合溶液，2 500 r/min渦旋5 min，4 000 r/min離心5 min，取全部上清液轉(zhuǎn)移至容量瓶中；再加入7 mL乙酸銨-乙腈（體積比1∶4）混合溶液，重復(fù)上述操作，再次收集全部上清液至容量瓶中，并用乙酸銨-乙腈（體積比1∶4）混合溶液定容至25 mL，搖勻；靜置后，取上清液過(guò)0.22 μm有機(jī)系濾膜，待檢測(cè)。

1.6 風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

膳食暴露和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估采用以下公式計(jì)算:

式中：NEDI為國(guó)家估算每日攝入量，mg/(kg bw)；Fi為食物攝入量，kg；STMRi為第i類(lèi)初級(jí)食用農(nóng)產(chǎn)品的；bw為中國(guó)居民的平均體重，kg；RQ為風(fēng)險(xiǎn)商，%；ADI為每日允許攝入量，mg/(kg bw)。RQ值越高表示接觸農(nóng)藥的風(fēng)險(xiǎn)越高；RQ＞1表示對(duì)人類(lèi)健康的風(fēng)險(xiǎn)不能接受。

1.7 方法驗(yàn)證

取適量滅蠅胺母液，用乙腈稀釋配得100 mg/L標(biāo)準(zhǔn)混合溶液。分別用乙腈和萵筍葉、萵筍莖和油麥 菜 空 白 基 質(zhì) 梯 度 稀 釋 配 得10、1、0.5、0.1、0.02 mg/L，在1.3節(jié)色譜條件下進(jìn)行測(cè)定。在空白萵筍葉、萵筍莖中添加0.05、0.2、4、10 mg/kg滅蠅胺標(biāo)準(zhǔn)品；在空白油麥菜中添加0.05、0.2、4、20 mg/kg滅蠅胺標(biāo)準(zhǔn)品，每個(gè)質(zhì)量分?jǐn)?shù)5次平行試驗(yàn)。按1.5節(jié)方法進(jìn)行提取、凈化，按1.3節(jié)色譜條件進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)定回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。

2 結(jié)果和討論

2.1 提取方法選擇

滅蠅胺微溶于水，稍溶于甲醇，屬于極性化合物，水溶液呈弱堿性，因此提取溶劑一般都選用極性較強(qiáng)的有機(jī)溶劑或緩沖溶液[16]。本試驗(yàn)比較了甲醇-水、乙腈-水、乙酸-乙腈和乙酸銨-乙腈等不同種類(lèi)和混合比例的提取溶劑的提取效果，最終選擇乙酸銨-乙腈水溶液（體積比1∶4）為提取溶劑，回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均能得到預(yù)期的結(jié)果。

2.2 方法線性范圍及基質(zhì)效應(yīng)

結(jié)果表明（表1），在0.02～10 mg/L范圍內(nèi)，滅蠅胺在乙腈和樣品空白基質(zhì)溶液中定量離子峰面積與進(jìn)樣質(zhì)量濃度間均呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)（r）都大于0.998 4。滅蠅胺在萵筍和油麥菜各基質(zhì)中方法定量限均為0.05 mg/kg。

表1 滅蠅胺的線性方程、相關(guān)系數(shù)和斜率比

采用基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率和溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率之比（k）來(lái)評(píng)價(jià)基質(zhì)效應(yīng)：當(dāng)k＞1.1時(shí)為基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)；k＜0.9為基質(zhì)減弱效應(yīng)，而當(dāng)k在0.9～1.1之間時(shí)為基質(zhì)效應(yīng)不明顯[17]。由表1可知，滅蠅胺在在油麥菜中基質(zhì)效應(yīng)不明顯，而在萵筍葉和萵筍莖基質(zhì)中基質(zhì)效應(yīng)為基質(zhì)減弱。為保證方法的通用性和適用性，萵筍葉和莖采用在基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液校正消除基質(zhì)效應(yīng)影響。

2.3 添加回收試驗(yàn)

本試驗(yàn)通過(guò)在萵筍和油麥菜中添加滅蠅胺的回收率試驗(yàn)來(lái)評(píng)斷方法的準(zhǔn)確度和精密度（表2）。試驗(yàn)結(jié)果表明，滅蠅胺在各基質(zhì)中平均回收率為90%～104%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1%～11%，符合SANTE/11813/2017歐盟指導(dǎo)方針要求平均回收率在70%～120%、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于20%的要求[18]。

2.4 滅蠅胺在萵筍和油麥菜中的消解試驗(yàn)

圖2、圖3顯示了在田間條件下滅蠅胺在萵筍和油麥菜中的消解曲線。消解試驗(yàn)結(jié)果表明（表3），按照有效成分為253.125 g/hm2（推薦最高劑量的1.5倍）劑量施藥，滅蠅胺在山東保護(hù)地和浙江露地萵筍中原始沉積量分別為3.89 mg/kg和8.51 mg/kg；在油麥菜中分別為5.57 mg/kg和9.73 mg/kg。兩地萵筍和油麥菜中滅蠅胺原始沉積量差異較大。分析原因，可能與施藥時(shí)不同栽培品種的生長(zhǎng)條件及各地種植習(xí)慣有關(guān)。滅蠅胺在兩地萵筍和油麥菜中半衰期為分別為6.9～7.7 d和6.1～9.6 d，且差異不大。張鋒鋒等[2]和陳麗萍等[9]研究表明，滅蠅胺在菜豆和菜用大豆中半衰期分別為3.2～6.1 d和5.6～6.1 d，與本試驗(yàn)結(jié)果相近，說(shuō)明滅蠅胺在蔬菜中降解較快。

表2 滅蠅胺在萵筍和油麥菜中的添加回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差

圖2 滅蠅胺在山東和浙江兩地萵筍中消解曲線

圖3 滅蠅胺在山東和浙江兩地油麥菜中消解曲線

表3 滅蠅胺在萵筍和油麥菜中消解方程和半衰期

2.5 滅蠅胺在萵筍和油麥菜中的最終殘留量及膳食風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

滅蠅胺在萵筍和油麥菜中最終殘留量如表4所示，滅蠅胺在萵筍葉和油麥菜菜種殘留量較高，而在萵筍莖中殘留較少，這可能與葉類(lèi)蔬菜表面積較大，著藥量比較高有關(guān)?？紤]到萵筍和油麥菜等屬于生長(zhǎng)較快的蔬菜，本研究根據(jù)采收間隔3 d采樣品中滅蠅胺殘留數(shù)據(jù)來(lái)評(píng)估滅蠅胺的長(zhǎng)期膳食風(fēng)險(xiǎn)。滅蠅胺在萵筍葉、萵筍莖和油麥菜3 d采收間隔的殘留中值分別3.92、0.187、4.67 mg/kg。萵筍和油麥菜同屬深色蔬菜，本次評(píng)估選用最大的殘留中值4.67 mg/kg進(jìn)行評(píng)估。根據(jù)中國(guó)健康與營(yíng)養(yǎng)調(diào)查總結(jié)報(bào)告，中國(guó)成年人每天所有深色蔬菜的攝入量為0.091 5 kg。參考我國(guó)GB2763—2019《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中農(nóng)藥最大殘留限量》[8]，滅蠅胺ADI值為0.06 mg/(kg bw)。中國(guó)居民的平均體重為63 kg。根據(jù)1.6中公式（1）計(jì)算普通人群滅蠅胺的國(guó)家估算ADI值為0.007 mg/(kg bw)。因此，滅蠅胺的RQ值為0.113，遠(yuǎn)低于1。基于風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估最大化原則，本次評(píng)估不僅考慮萵筍和油麥菜兩種蔬菜，而且對(duì)滅蠅胺所有登記作物均進(jìn)行膳食風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。查詢(xún)中國(guó)農(nóng)藥信息網(wǎng)可知[19]，滅蠅胺在中國(guó)已登記韭菜、黃瓜、菜豆、姜等4種作物。將所有登記作物進(jìn)行膳食分類(lèi)和限量查詢(xún)后，結(jié)果匯總于表5。滅蠅胺在所有登記作物中RQ值為0.162，低于1。因此，滅蠅胺在菜薹中的殘留量對(duì)我國(guó)一般人群健康的影響是在一個(gè)可接受的風(fēng)險(xiǎn)水平。

表4 滅蠅胺在萵筍和油麥菜中最終殘留量

表5 滅蠅胺在所有登記作物中的長(zhǎng)期膳食攝入評(píng)估

3 結(jié)論與討論

本文建立了滅蠅胺在萵筍和油麥菜中的殘留分析方法。方法線性，準(zhǔn)確度、精密度均滿(mǎn)足殘留檢測(cè)要求。應(yīng)用此方法對(duì)兩地萵筍和油麥菜樣品中滅蠅胺進(jìn)行了檢測(cè)，并對(duì)滅蠅胺的膳食風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行了評(píng)估。膳食風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估結(jié)果表明，萵筍和油麥菜中滅蠅胺的殘留量不會(huì)對(duì)我國(guó)一般人群健康產(chǎn)生影響。目前，我國(guó)GB2763—2019《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中農(nóng)藥最大殘留限量》未制定萵筍和油麥菜中滅蠅胺的最大殘留限量，其他國(guó)家或組織亦未制定滅蠅胺在萵筍和油麥菜中的最大殘留限量。本試驗(yàn)結(jié)果為我國(guó)制定滅蠅胺在萵筍和油麥菜中最大殘留限量提供了數(shù)據(jù)參考。

滅蠅胺在萵筍和油麥菜中的殘留消解符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程，其在萵筍和油麥菜中的半衰期為分別為6.9～7.7 d和6.1～9.6 d。鑒于農(nóng)藥在作物中的降解趨勢(shì)受多種因素影響，降雨、光、熱、pH、濕度等物理化學(xué)因素都會(huì)對(duì)農(nóng)藥在植物體內(nèi)的降解起著重要作用[20-21]，而本試驗(yàn)只進(jìn)行一年兩地的消解試驗(yàn)，結(jié)果有一定的局限性，后期需要做更深入研究。