PRRX1 在胃癌細(xì)胞增殖與轉(zhuǎn)移中的作用及其與 TGF-β/Smad2 介導(dǎo)的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的關(guān)系

楊忠 ，黃婉霞 ，王尚, ，鄧維博 ，姚繼彬，達(dá)明緒

（1. 寧夏醫(yī)科大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院，寧夏 銀川 750004；2. 甘肅省人民醫(yī)院 腫瘤外科，甘肅 蘭州 730000；3. 甘肅中醫(yī)藥大學(xué) 臨床醫(yī)學(xué)院，甘肅 蘭州 730000）

胃癌是消化道常見的惡性腫瘤之一，最新統(tǒng)計(jì)2017年全世界胃癌新增發(fā)病約122萬例，造成了 86.5萬人死亡，而我國(guó)胃癌新發(fā)病例和死亡病例約占全球近5 0%，發(fā)病率和病死率居惡性腫瘤 第2位[1-3]。雖然醫(yī)療診治水平和模式明顯改善，但胃癌患者的5年生存率卻仍低于30%[4]。胃癌的預(yù)后與復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，但具體機(jī)制尚未明確。研究[5-8]證實(shí)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial mesenchymal transition，EMT）是誘導(dǎo)惡性腫瘤發(fā)生增殖與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的重要機(jī)制，EMT的發(fā)生過程不僅涉及TGF-β/Smad、Wnt/β-catenin、PI3K/Akt、Notch等主要信號(hào)通路，也受Snail、Twist1、Slug、NFκB、Zeb等重要轉(zhuǎn)錄因子誘導(dǎo)調(diào)控，其表現(xiàn)為上皮細(xì)胞表型標(biāo)志物E-cadherin、Laminin1、ZO-1等下調(diào)和間質(zhì)細(xì)胞表型標(biāo)志物N-cadherin、vimentin、β-catenin等表達(dá)上調(diào)，最終使腫瘤細(xì)胞獲得間質(zhì)表型特性，容易脫離原發(fā)病灶向遠(yuǎn)處迀移。

近年來研究[9-16]報(bào)道配對(duì)相關(guān)同源框1（paired related homeobox 1，PRRX1）是表達(dá)于細(xì)胞核內(nèi)可誘導(dǎo)腫瘤發(fā)EMT的重要轉(zhuǎn)錄因子，在胃癌、胰腺癌、乳腺癌、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、甲狀腺癌、頭頸部鱗癌和口腔鱗癌等腫瘤中PRRX1表達(dá)明顯增加，并且促進(jìn)腫瘤的EMT過程，與患者的預(yù)后不良密切相關(guān)。但有研究[17-19]表明在大腸癌、肝癌、肺癌中PRRX1低表達(dá)可誘導(dǎo)腫瘤的增殖與轉(zhuǎn)移，并與腫瘤的轉(zhuǎn)移灶的定植密切相關(guān)。Guo等[7]研究表明過表達(dá)的PRRX1可誘導(dǎo)Wnt/β-catenin通路促進(jìn)胃癌的EMT過程，使得胃癌細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移能力明顯增強(qiáng)。研 究[11,13-15,20-21]表明PRRX1可與TGF-β/Smad協(xié)同作用促進(jìn)腫瘤的E M T 過程。筆者前期研究[22]表明，在人胃癌組織中PRRX1表達(dá)水平明顯高于癌旁正常胃黏膜組織和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)與患者的預(yù)后不良正相關(guān)。而PRRX1與TGF-β/Smad通路在胃癌中的作用機(jī)制研究尚未見報(bào)道，本研究旨在探究PRRX1表達(dá)上調(diào)與TGF-β/Smad2通路在胃癌細(xì)胞增殖與轉(zhuǎn)移中的作用機(jī)制，為早期干預(yù)胃癌的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

人正常胃黏膜細(xì)胞G E S - 1 和胃癌細(xì)胞S G C 7 9 0 1、M N K 4 5 由甘肅省人民醫(yī)院消化道腫瘤重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供。P R R X 1 過表達(dá)慢病毒及空載慢病毒（攜綠色熒光）由中國(guó)漢恒生物科技（上海）有限公司構(gòu)建。胎牛血清、RPMI-1640培養(yǎng)基、0.2 5%胰酶、青-鏈霉素雙抗、P B S 購(gòu)于以色列Biological Industries（BI）公司。兔抗人P R R X 1 一抗購(gòu)自美國(guó)A b c a m 公司，兔抗人一抗TGF-β1、Smad2、E-cadherin、vimentin、GAPDH購(gòu)自美國(guó)SAB公司，兔抗人辣根過氧物酶HRP標(biāo)記親和純化山羊抗兔IgG（H+L）二抗購(gòu)自美國(guó)Proteintech公司；TGF-β/Smad2通路阻斷劑SB-431542購(gòu)自美國(guó)MCE公司。RIPA裂解液、SDS-PAGE凝膠配制試劑盒、BCA蛋白定量試劑盒購(gòu)自北京索萊寶公司，Transwell小室購(gòu)自美國(guó)康寧公司，25 mL培養(yǎng)瓶購(gòu)自中國(guó)香港耐思生物科技有限公司，Western blot轉(zhuǎn)膜儀、電泳儀、電源購(gòu)自北京六一生物科技公司，酶標(biāo)儀購(gòu)自美國(guó)Bio Rad公司，Tanon-2500R全自動(dòng)數(shù)據(jù)凝膠圖像分析系統(tǒng)購(gòu)自上海天能科技有限公司。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng)

GES-1、SGC7901和MNK45細(xì)胞均采用10%胎牛血清和1%青-鏈霉素雙抗的RPMI-1640培養(yǎng)液置于37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每1～2 d換液1次，2～3 d傳代1次，選取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。待細(xì)胞長(zhǎng)至25 mL培養(yǎng)瓶80%棄去培養(yǎng)基用PBS清洗，1 mL 0.25%胰酶消化待細(xì)胞相互分離后并輕吸去，加入1 mL的凍存液（900 μL血清+100 μL DMSO）輕輕吹打混勻轉(zhuǎn)移至凍存管，4 ℃ 10 min，-20 ℃ 2 h，-80 ℃過夜后液氮長(zhǎng)期保存。

1.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期胃癌細(xì)胞MNK45胰酶消化收集細(xì)胞，PBS清洗2次后計(jì)數(shù)，接種于6孔板中，37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，待細(xì)胞于6孔板中長(zhǎng)至50%時(shí)，加入轉(zhuǎn)染慢病毒30 μL+聚凝胺5 μL（轉(zhuǎn)染效果最佳），每孔慢病毒+聚凝胺+完全培養(yǎng)基共 1 mL，4 h后補(bǔ)加共1 mL的完全培養(yǎng)基，24 h后更換新鮮完全培養(yǎng)液，72 h鏡下觀察轉(zhuǎn)染效果較好。轉(zhuǎn)染慢病毒后的細(xì)胞待長(zhǎng)滿六孔板后收集于25 mL培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)傳代，于正常培養(yǎng)的25 mL培養(yǎng)瓶中加入嘌呤霉素的體積8 μL（效果最佳），作用24 h后更換新鮮的完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。將MNK45細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染PRRX1過表達(dá)慢病毒（PRRX1過表達(dá)組）與空載慢病毒（陰性對(duì)照組），將無處理的MNK45細(xì)胞作為空白對(duì)照組。

1.4 Transwell 遷移實(shí)驗(yàn)

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的胃癌細(xì)胞，分別胰酶消化離心（做好標(biāo)記），PBS清洗3次后計(jì)數(shù)，RPMI-1640培養(yǎng)基分別配成等濃度細(xì)胞混勻液（5×105/mL），分別取200 μL細(xì)胞懸浮液接種于Transwell上室， 下室加入含10%胎牛血清的培養(yǎng)基500 μL，37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h，取出小室，棉簽輕輕擦去上室培養(yǎng)基及細(xì)胞，4%多聚甲醛固定下室膜上細(xì)胞15 min，PBS清洗3次，1%結(jié)晶紫染色30 min，PBS再次沖洗小室3次，干燥后倒置顯微鏡下觀察計(jì)數(shù)并采圖。

1.5 Western blot 實(shí)驗(yàn)

取對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)細(xì)胞，冰P B S 清洗2 ～3 次，吸干殘余液體，根據(jù)細(xì)胞裂解液說明書操作收集總蛋白，BCA法進(jìn)行蛋白定量，加入蛋白上樣緩沖液，水浴鍋 100 ℃ 10 min。迅速置于冰上，冰浴5 min，置于-20 ℃?zhèn)溆?。每?0 μg蛋白樣品上樣，10%SDS-PAGE進(jìn)行蛋白分離，80 V電泳約 3 0 m i n，目標(biāo)蛋白跑至分離膠時(shí)，電壓調(diào)至 120 V，直至目標(biāo)蛋白所在位置上下兩條Marker條帶分開，停止電泳。半干濕式轉(zhuǎn)膜（恒流200 mA 2 h），冰浴條件下轉(zhuǎn)模，轉(zhuǎn)模完成后，5%脫脂牛奶室溫?fù)u床封閉2 h，加入一抗P R R X 1 （1:1 0 0 0）、T G F-β 1（1:5 0 0）、S m a d 2 （1:1 000）、E-cadherin（1:1 000）、vimentin （1:1 000）、GAPDH（1:2 000），4 ℃慢搖孵育過夜，TBST清洗3次，每次10 min，加入二抗 （1:2 000），室溫?fù)u床孵育2 h，TBST清洗3次，每次 10 min，化學(xué)發(fā)光試劑蛋白顯影，GAPDH作為內(nèi)參蛋白。

1.6 SB-431542 抑制實(shí)驗(yàn)

取對(duì)數(shù)期長(zhǎng)滿25 mL培養(yǎng)瓶50%的轉(zhuǎn)染PRRX1過表達(dá)慢病毒的M N K 4 5 細(xì)胞分為兩組：加有TGF-β/Smad2通路阻斷劑SB-431542組（最佳濃度為10 μmol/L）的培養(yǎng)液作為實(shí)驗(yàn)組，加有溶劑DMSO的培養(yǎng)液為對(duì)照組，作用24 h后提取蛋白，Western blot法檢測(cè)PRRX1、TGF-β、Smad2和EMT標(biāo)志物表達(dá)差異（步驟同前）。

圖1 Western blot 檢測(cè)GES-1、SGC7901 和MNK45 細(xì)胞中PRRX1 蛋白表達(dá)Figure 1 The PRRXI protein expressions in GES-1, SGC7901 and MNK45 cells determined by Western blot analysis

1.7 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

8 只5 周 齡B A L B/c 雌 性 裸 鼠，平 均 質(zhì) 量（18.3±0.64）g，購(gòu)自北京維通利華公司，飼養(yǎng)于甘肅中醫(yī)藥大學(xué)SPF級(jí)動(dòng)物中心。將裸鼠隨機(jī)分2組，每組4只，分別皮下注射轉(zhuǎn)染PRRX1過表達(dá)慢病毒的MNK45細(xì)胞（PRRX1過表達(dá)組）與轉(zhuǎn)染空載慢病毒MNK45細(xì)胞（陰性對(duì)照組）。注射方法：取對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)期的細(xì)胞，0.9%生理鹽水重懸細(xì)胞并計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞濃度為1.0×107/mL，選裸鼠左側(cè)后背部皮下為注射部位，75%酒精消毒皮膚，1 mL注射器吸取細(xì)胞懸液，按0.1 mL/只注入皮下，棉簽輕輕按壓15 s以防細(xì)胞懸液溢出。每周測(cè)量瘤體的長(zhǎng)徑和短徑，并計(jì)算瘤體的體積。計(jì)算瘤體體積公式為（V=長(zhǎng)×寬2/2 cm3），以瘤體積為縱軸，生長(zhǎng)時(shí)間為橫軸，繪制皮下瘤的生長(zhǎng)曲線。8周后脫臼法處死裸鼠并取下瘤體，稱重并采圖后，瘤體于-80 ℃冰箱保存，動(dòng)物尸體按照實(shí)驗(yàn)室規(guī)定處理。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理，其中計(jì)數(shù)資料顯著性比較采用χ2檢驗(yàn)，組間兩兩比較采用t 檢驗(yàn)，多組間比較采用方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 GES-1、SGC7901 和MNK45 細(xì)胞中PRRX1表達(dá)情況

PRRX1在胃癌細(xì)胞SGC7901和MNK45中表達(dá)明顯高于人正常胃黏膜細(xì)胞GES-1，并且SGC7901表達(dá)高于MNK45細(xì)胞，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）（圖1）。

2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染及形態(tài)觀察

熒光倒置顯微鏡下觀察慢病毒轉(zhuǎn)染的兩組M N K 4 5 細(xì)胞生長(zhǎng)良好，均可見明顯的綠色熒光（圖2A）；在普通倒置顯微鏡下觀察到空白對(duì)照組與陰性對(duì)照組細(xì)胞形態(tài)近圓形，PRRX1過表達(dá)組細(xì)胞形態(tài)變?yōu)椴灰?guī)則或梭形（圖2B）。

圖2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染情況及形態(tài)觀察 A：熒光顯微鏡觀察慢病毒轉(zhuǎn)染后的MNK45 細(xì)胞（×4）；B：普通倒置顯微鏡下的各組細(xì)胞（×20）Figure 2 Observation of the transfection efficiency and cell shapes A: The MNK45 cells after lentiviral transfection under fluorescence microscope (×4); B: Cells of each group under ordinary inverted microscope (×20)

2.3 Transwell 實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移能力

Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，PRRX1過表達(dá)組MNK45細(xì)胞遷移的細(xì)胞數(shù)較空白對(duì)照組與陰性對(duì)照組明顯增多（均P＜0.05），但后兩組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）（圖3） 。

圖3 Transwell 遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞遷移能力Figure 3 The migration abilities of each group of cells detected by Transwell migration assay

2.4 Western blot 檢測(cè)各組細(xì)胞中相關(guān)蛋白表達(dá)

與空白對(duì)照組與陰性對(duì)照組比較，P R R X 1過表達(dá)組中間質(zhì)表型標(biāo)志物v i m e n t i n 蛋白表達(dá)、T G F-β 1 和S m a d 2 蛋白表達(dá)明顯增加（均P＜0.05），而上皮表型標(biāo)志物E-cadherin蛋白表達(dá)明顯減低（均P ＜0.0 5）；空白對(duì)照組與陰性對(duì)照組上述蛋白表達(dá)水平均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（均P＞0.05）（圖4）。

2.5 TGF-β/Smad2 通路阻斷劑SB-431542 對(duì)相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

與給予溶劑DMSO處理比較，給予阻斷劑SB-431542處理的PRRX1過表達(dá)組MNK45細(xì)胞上皮表型標(biāo)志物E-cadherin蛋白表達(dá)明顯增加，而間質(zhì)表型標(biāo)志物vimentin和Smad2明顯減低降低（均P ＜0.0 5），但P R R X 1 和T G F-β 1 無 統(tǒng) 計(jì)學(xué)差異（均P＞0.05）（圖5）。

圖5 Western blot 法檢測(cè)SB-431542 對(duì)PRRX1、TGF-β1、Smad2 和EMT 相關(guān)蛋白表達(dá)的影響Figure 5 The influence of SB-431542 on protein expressions of PRRX1, TGF-β1, Smad2, and EMT markers determined by Western blot

2.6 裸鼠皮下移植瘤生長(zhǎng)情況

兩組裸鼠的皮下移植瘤均構(gòu)建成功。從第4周后各時(shí)間點(diǎn)，PRRX1過表達(dá)組皮下移植瘤體積增長(zhǎng)明顯大于陰性對(duì)照組（均P＜0.05）；第8周時(shí)P R R X 1 過表達(dá)組皮下移植瘤體積、質(zhì)量分別為（0.82±0.14）cm3、（2.33±0.23）g，陰性對(duì)照組皮下移植瘤體積、質(zhì)量分別為（0.21±0.06）cm3、（1.54±0.05）g，PRRX1過表達(dá)組皮下移植瘤體積和瘤重明顯大于陰性對(duì)照（均P＜0.05）（圖6）。

圖6 裸鼠皮下移植瘤的生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果 A-B：兩組移植瘤情況；C：兩組移植瘤生長(zhǎng)曲線；D：兩組移植瘤瘤重比較Figure 6 Results of the subcutaneously implanted tumor model in nude mice A-B: The xenografts in the two groups of mice; C: Growth curves of the implanted tumors in the two groups of mice; D: Comparison of the weight of the implanted tumors between the two groups of mice

3 討 論

近年來胃癌的發(fā)病率在我國(guó)雖有下降的趨勢(shì)，但早期因缺乏特異性表現(xiàn)，絕大多數(shù)患者確診時(shí)已屬于進(jìn)展期，腫瘤病灶已經(jīng)發(fā)生局部侵犯、淋巴轉(zhuǎn)移或是遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[2-4]。胃癌的增殖與轉(zhuǎn)移是一個(gè)涉及多因素、多階段、多通路的復(fù)雜過程，具體機(jī)理不清。EMT過程在惡性腫瘤的增殖與轉(zhuǎn)移過程中起著關(guān)鍵性的作用[5-8]。E-cadherin是一種有效的腫瘤抑制蛋白質(zhì)，典型上皮型標(biāo)志物，在上皮源性的表達(dá)喪失時(shí)，其介導(dǎo)的細(xì)胞間的黏附性減弱或者逐漸消失，使得惡性腫瘤細(xì)胞獲得侵襲性和遷移能力，E-cadherin表達(dá)減低與胃癌患者的臨床分期晚和預(yù)后差密切相關(guān)[7,22-24]。vimentin是典型的間質(zhì)型標(biāo)志物，是表達(dá)于間質(zhì)細(xì)胞和間葉源性腫瘤的一種中間絲蛋白，在維持細(xì)胞骨架形態(tài)和黏附性，參與細(xì)胞凋亡的調(diào)控，在腫瘤的侵襲、遷移、新生血管生成和淋巴管形成中發(fā)揮著重要的作用[25-26]。

P R R X 1 家 族 包 括P R R X 1 a、P R R X 1 b 和P R RX2，其中PRRX1編碼的蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞核，是促進(jìn)腫瘤發(fā)生EMT的重要轉(zhuǎn)錄因子[7,9]。PRRX1在多種腫瘤中異常表達(dá)，可誘導(dǎo)TGF-β/Smad、Wnt/β-catenin、p53等信號(hào)通路調(diào)節(jié)上皮型標(biāo)志物E-c a d h e r i n 表達(dá)減低，v i m e n t i n、β-catenin等間質(zhì)標(biāo)志物表達(dá)增加，從而促進(jìn)腫瘤的侵襲和遷移，并通過調(diào)節(jié)免疫抑制和血管生成來調(diào)控惡性腫瘤的EMT過程[7,9,11,13-16,18-19,26-28]。

TGF-β/Smad信號(hào)通路是細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的重要通路，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中起著雙重作用，腫瘤發(fā)生早期起抑制作用，但在腫瘤進(jìn)展時(shí)可通過Wnt等信號(hào)通路直接抑制E-cadherin表達(dá)，同時(shí)可激活β-catenin/TCF/LEF復(fù)合物，間接導(dǎo)致vimentin等間質(zhì)標(biāo)志物的表達(dá)來激活VEGF-C的產(chǎn)生促進(jìn)胃癌的淋巴轉(zhuǎn)移調(diào)節(jié)其EMT過程[29-34]。Smad2是TGF-β/Smad信號(hào)通路的關(guān)鍵，它可以直接把TGF-β信號(hào)透過細(xì)胞膜傳導(dǎo)入細(xì)胞核內(nèi)，激活核內(nèi)基因表達(dá)[35]。胃癌中Smad2表達(dá)增高與其分化差、分期晚和患者的不良結(jié)局相關(guān)[32-34]。相關(guān)研究表明PRRX1可與TGF-β/Smad協(xié)同作用促進(jìn)腫瘤的EMT過程[11,13-15,20-21]。

本研究表明，P R R X 1 在胃癌細(xì)胞S G C 7 9 0 1和MNK45中表達(dá)明顯高于正常胃黏膜細(xì)胞GES-1，且SGC7901表達(dá)高于MNK45，PRRX1在胃癌組織中表達(dá)明顯高于癌旁正常組織，因此PRRX1在胃癌中表達(dá)明顯增高，并調(diào)節(jié)胃癌的EMT過程[7,22]。為了明確觀察PRRX1過表達(dá)對(duì)胃癌細(xì)胞的侵襲與轉(zhuǎn)移的影響，所以選擇了P R R X 1 相對(duì)表達(dá)低的MNK45胃癌細(xì)胞進(jìn)行慢病毒轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染PRRX1過表達(dá)慢病毒的MNK45細(xì)胞，形態(tài)由近圓形變?yōu)椴灰?guī)則或梭形，而陰性對(duì)照組與空白對(duì)照組細(xì)胞形態(tài)未見明顯差異，這可能是上皮表型細(xì)胞向間質(zhì)表型細(xì)胞轉(zhuǎn)化時(shí)的形態(tài)學(xué)改變[32]。Transwell遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，PRRX1過表達(dá)組細(xì)胞的遷移能力明顯增加；移植瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，PRRX1過表達(dá)組移植瘤增長(zhǎng)速度明顯增快，這與PRRX1過表達(dá)可以促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖與轉(zhuǎn)移的相關(guān)報(bào)道[7]一致。Western blot顯示，PRRX1過表達(dá)組細(xì)胞中PRRX1、間質(zhì)型標(biāo)志物vimentin、TGF-β1和Smad2表明顯增加，而上皮型標(biāo)志物E-cadherin表達(dá)降低，有研究[14]表明甲狀腺癌乳頭狀中TGF-β1可與PRRX1協(xié)同作用增強(qiáng)其癌細(xì)胞的增殖與轉(zhuǎn)移能力。而本實(shí)驗(yàn)中給予TGF-β1受體激酶抑制劑SB-431542作用PRRX1過表達(dá)組胃癌細(xì)胞后，PRRX1和TGF-β1表達(dá)水平無明顯變化，但vimentin和Smad2表達(dá)減低，而E-cadherin表達(dá)增加，提示給予TGF-β/Smad2通路抑制劑可以逆轉(zhuǎn)PRRX1過表達(dá)誘導(dǎo)的EMT過程。有研究表明在頭頸部鱗狀細(xì)胞癌中上調(diào)PRRX1過表達(dá)時(shí)，TGF-β1、p-Smad2和p-Smad3表達(dá)增加，而給予TGF-β受體激酶抑制劑后，p-Smad2、p-Smad3和vimentin表達(dá)減低，但E-cadherin表達(dá)增加，細(xì)胞的侵襲和遷移能力明顯減弱[15]。有報(bào)道過表達(dá)的PRRX1可以促進(jìn)脂肪組織中的TGF-β活性，從而導(dǎo)致肥胖期間脂肪細(xì)胞功能異常[36]。

總之，過表達(dá)的P R R X 1 可以促進(jìn)胃癌細(xì)胞向著梭形或不規(guī)則形的間質(zhì)細(xì)胞形態(tài)轉(zhuǎn)化，從而有利于胃癌細(xì)胞的增殖和遷移，上調(diào)TGF-β1、Smad2和間質(zhì)型標(biāo)志物vimentin表達(dá)，下調(diào)上皮型標(biāo)志物E-cadherin表達(dá)，而TGF-β/Smad信號(hào)通路抑制劑可以逆轉(zhuǎn)過表達(dá)的PRRX1所誘導(dǎo)的EMT過程，提示過表達(dá)的PRRX1可以誘導(dǎo)TGF-β/Smad2通路促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖與轉(zhuǎn)移，這可能是早期干預(yù)治療胃癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的潛在靶點(diǎn)。