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    牙齦卟啉單胞菌感染與口腔及食管鱗癌臨床病理特征相關(guān)性分析

    2020-01-07 00:52:06趙世杰劉怡文楊海軍張耀文馮連杰周福有
    食管疾病 2019年4期
    關(guān)鍵詞:鱗癌食管陰性

    趙世杰,原 翔,劉怡文,楊海軍,張耀文,馮連杰,周福有

    牙齦卟啉單胞菌(Porphyromonasgingivalis,Pg)是目前研究廣泛且證據(jù)充足的重要牙周致病菌之一??谇籔g感染與口腔鱗癌的相關(guān)性研究較多,已證明其與口腔鱗癌的發(fā)病呈正相關(guān)[1-2]。Gao等研究首次發(fā)現(xiàn)Pg感染與食管鱗癌的相關(guān)性[3],提出酸性環(huán)境的變化對(duì)Pg的定植影響顯著[4]。Pg在口腔、食管上、中、下段鱗癌組織中的定植分布狀況如何?自上而下是否也有一定規(guī)律?其與患者臨床病理特征及預(yù)后是否相關(guān)?本研究就針對(duì)上述問(wèn)題研究總結(jié)報(bào)道如下。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料收集安陽(yáng)市腫瘤醫(yī)院(河南科技大學(xué)第四附屬醫(yī)院)口腔鱗癌及食管鱗癌術(shù)后石蠟組織207例,分為4組,口腔、食管胸上、中、下段鱗癌分別為50、50、57和50例?;颊呦鄳?yīng)臨床病理資料均來(lái)自病歷資料。納入標(biāo)準(zhǔn):R0切除,T1-3NxM0。排除標(biāo)準(zhǔn):術(shù)前行新輔助治療(放療、化療、放化療),術(shù)前1個(gè)月內(nèi)行抗炎治療。該項(xiàng)目經(jīng)過(guò)安陽(yáng)市腫瘤醫(yī)院倫理委員會(huì)審核同意。

    1.2 方法所有鱗癌石蠟組織4 μm厚連續(xù)切片,免疫組織化學(xué)SP法染色觀察。免疫組化SP超敏試劑盒購(gòu)于中杉金橋公司,HRP標(biāo)記山羊抗兔IgG抗體購(gòu)于康為公司,山羊抗兔IgG(H+L)熒光抗體購(gòu)于CST公司。

    1.3 結(jié)果評(píng)估隨機(jī)挑選5個(gè)高倍鏡視野(400倍),根據(jù)切片胞質(zhì)及胞核著色的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)以及著色面積進(jìn)行評(píng)分,對(duì)組織切片的染色強(qiáng)度和染色面積進(jìn)行半定量分析; 染色強(qiáng)度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)為:0分,未著色,陰性;1分,著色較弱,呈淺黃色,弱陽(yáng)性;2分,中性著色,呈棕黃色,中度陽(yáng)性;3分,著色較強(qiáng),呈棕褐色,強(qiáng)陽(yáng)性;染色面積評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)為:陽(yáng)性細(xì)胞0%~5%,0分;陽(yáng)性細(xì)胞6%~25%,1分;陽(yáng)性細(xì)胞25%~75%,2分;陽(yáng)性細(xì)胞超過(guò)75%,3分;免疫組化評(píng)分計(jì)算方法:總得分=染色強(qiáng)度×染色面積。0分,陰性(-);1~3分,弱陽(yáng)性(+);4~8分,中陽(yáng)性(++);9~12分,強(qiáng)陽(yáng)性(+++)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)標(biāo)準(zhǔn):0分為陰性,>1分為陽(yáng)性。

    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法使用SPSS 23.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)分析。計(jì)數(shù)資料以百分率(%)表示,Pg在不同組陽(yáng)性率及與臨床病理特征的比較采用χ2檢驗(yàn),Kaplan-Meier方法繪制生存曲線并以Log-rank檢驗(yàn)生存時(shí)間之間的差異。隨訪時(shí)間至2018年底, 以死亡為終點(diǎn)事件,以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 4組免疫組化染色結(jié)果分析4組均有陽(yáng)性表達(dá)率,Pg的陽(yáng)性定位主要在鱗癌細(xì)胞的胞質(zhì)中,呈棕黃色顆粒??谇击[癌組普遍以強(qiáng)陽(yáng)性為主,食管胸上、中段鱗癌組普遍以中度陽(yáng)性為主,食管胸下段鱗癌組普遍以弱陽(yáng)性為主,免疫組化染色評(píng)分由上至下呈逐漸下降趨勢(shì),見(jiàn)圖1。

    圖1 免疫組化染色結(jié)果(蘇木素襯染,×400)

    2.2 4組的免疫組化陽(yáng)性率分析4組Pg陽(yáng)性率存在差異,從解剖位置上分析由上到下陽(yáng)性率遞減,4組的陽(yáng)性率依次為54.00%、48.00%、42.10%、40.00%,見(jiàn)圖2。

    2.3 Pg與口腔鱗癌臨床病理特征的相關(guān)性及生存分析在口腔鱗癌組中Pg與腫瘤的浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期與生存情況具有相關(guān)性,在腫瘤的浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期與生存方面Pg陰性組優(yōu)于Pg陽(yáng)性組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見(jiàn)表1。生存分析顯示:在口腔鱗癌患者中Pg陽(yáng)性組的中位生存期為69個(gè)月,5 a生存率為44.40%。Pg陰性組中位生存未達(dá)到,5 a生存率為55.60%,Pg陽(yáng)性組生存期低于Pg陰性組患者,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見(jiàn)圖3。

    圖2 口腔鱗癌與食管上、中、下段鱗癌Pg陽(yáng)性率差異分析

    表1 Pg與口腔鱗癌臨床病理特征的相關(guān)性分析例(%)

    臨床病理特征Pg(+)Pg(-)χ2 P性別男12(48.00)13(52.00)女15(60.00)10(40.00)0.7250.395年齡<60歲10(66.70)5(33.30)≥60歲17(48.60)18(51.40)1.3840.239吸煙有8(47.10)9(52.90)無(wú)19(57.60)14(42.40)0.5000.480飲酒有4(40.00)6(60.00)無(wú)23(57.50)17(42.50)0.9860.321分化程度高分化18(54.50)15(45.50)中/低分化9(52.90)8(47.10)0.0120.914浸潤(rùn)深度<肌層5(29.40)12(70.60)≥肌層22(66.70)11(33.30)6.2690.012淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有9(90.00)1(10.00)無(wú)18(45.00)22(55.00)6.5220.011臨床分期Ⅰ/Ⅱ期11(35.50)20(64.50)Ⅲ/Ⅳ期16(84.20)3(15.80)11.260.001生存生存16(44.40)20(55.60)死亡11(78.60)3(21.40)4.7260.030

    2.4 Pg與食管胸上段鱗癌臨床病理特征的相關(guān)性及生存分析食管胸上段鱗癌組中Pg與飲酒、腫瘤浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期及生存具有相關(guān)性,在腫瘤浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期及生存Pg陰性組優(yōu)于Pg陽(yáng)性組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見(jiàn)表2。生存分析顯示:在食管胸上段鱗癌患者中,Pg陽(yáng)性組的中位生存期為29個(gè)月,5 a生存率為38.90%。Pg陰性組中位生存未達(dá)到,5 a生存率為61.10%。Pg陽(yáng)性組生存期低于Pg陰性組患者,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見(jiàn)圖4。

    圖3 口腔鱗癌組生存分析

    表2 Pg與食管胸上段鱗癌臨床病理特征的相關(guān)性分析例(%)

    臨床病理特征Pg(+)Pg(-)χ2 P性別男17(54.80)14(45.20)女7(36.80)12(63.20)1.5290.216年齡<60歲8(72.70)3(27.30)≥60歲16(41.00)23(59.00)3.4550.063吸煙有14(50.00)14(50.00)無(wú)10(45.50)12(54.50)0.1020.749飲酒有13(65.00)7(35.00)無(wú)11(36.70)19(63.30)3.8600.049分化程度中/低分化22(51.20)21(48.80)高分化2(28.60)5(71.40)1.2310.267浸潤(rùn)深度<纖維膜4(25.00)12(75.00)≥纖維膜20(58.80)14(41.20)4.9870.026淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有19(73.10)7(26.90)無(wú)5(20.80)19(79.20)13.6470.001臨床分期Ⅰ/Ⅱ期1(9.10)10(90.90)Ⅲ/Ⅳ期23(59.00)16(41.00)8.5540.003生存生存14(38.90)22(61.10)死亡10(71.40)4(28.60)4.2760.039

    2.5 Pg與食管胸中段鱗癌臨床病理特征的相關(guān)性及生存分析在食管胸中段鱗癌組中Pg與年齡、腫瘤浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性,在腫瘤浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面Pg陰性組優(yōu)于Pg陽(yáng)性組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見(jiàn)表3。由于所選病人均為2018年新診斷為食管癌病人,隨訪時(shí)間短,生存分析無(wú)意義。

    圖4 食管胸上段鱗癌組生存分析

    表3 Pg與食胸中段鱗癌臨床病理特征的相關(guān)性分析例(%)

    臨床病理特征Pg(+)Pg(-)χ2 P性別男17(47.20)19(52.80)女7(33.30)14(66.70)1.050.306年齡<60歲10(71.40)4(28.60)≥60歲14(32.60)29(67.40)6.5460.011吸煙有9(45.00)11(55.00)無(wú)15(40.50)22(59.50)0.1060.745飲酒有6(46.20)7(53.80)無(wú)18(40.90)26(59.10)0.1130.736分化程度低分化7(53.80)6(46.20)中/高分化17(38.60)27(61.40)0.9520.329浸潤(rùn)深度<纖維膜2(10.00)18(90.00)≥纖維膜22(59.50)15(40.50)13.0280.001淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有22(64.70)12(35.30)無(wú)2(8.70)21(91.30)17.6560.001臨床分期Ⅰ/Ⅱ期1(33.30)2(66.70)Ⅲ/Ⅳ期23(42.60)31(57.40)0.10.752生存生存23(41.10)33(58.90)死亡1(100.00)0(0.00)1.40.237

    2.6 Pg與食管胸下段鱗癌臨床病理特征的相關(guān)性及生存分析在食管胸下段鱗癌組中Pg與性別、飲酒、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期及生存具有相關(guān)性,在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期及生存方面,Pg陰性組優(yōu)于Pg陽(yáng)性組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見(jiàn)表4。生存分析顯示:在食管胸下段鱗癌患者中,Pg陽(yáng)性組的中位生存期為40個(gè)月,5 a生存率為20.60%。Pg陰性組中位生存未達(dá)到,5 a生存率為79.40%。Pg陽(yáng)性組生存期低于Pg陰性組患者,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見(jiàn)圖5。

    表4 Pg與食管胸下段鱗癌臨床病理特征的相關(guān)性分析 例(%)

    臨床病理特征Pg(+)Pg(-)χ2 P性別男20(45.50)24(54.50)女0(0)6(100.00)4.5450.033年齡<60歲10(45.50)12(54.50)≥60歲10(35.70)18(64.30)0.4870.485吸煙有11(50.00)11(50.00)無(wú)9(32.10)19(67.90)1.6370.201飲酒有10(71.40)4(28.60)無(wú)10(27.80)26(72.20)8.0030.005分化程度中/低分化18(40.90)26(59.10)高分化2(33.30)4(66.70)0.1260.722浸潤(rùn)深度<纖維膜4(36.40)7(63.60)≥纖維膜16(41.00)23(59.00)0.0780.780淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有18(56.30)14(43.80)無(wú)2(11.10)16(88.90)9.780.002臨床分期Ⅰ/Ⅱ期0(0)8(100.00)Ⅲ/Ⅳ期20(47.6)22(52.40)6.3490.012生存生存7(20.6)27(79.40)死亡13(81.3)3(18.80)16.6820.001

    圖5 食管胸下段鱗癌組生存分析

    3 討論

    細(xì)菌感染與癌癥發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性是近年癌癥研究熱點(diǎn)之一,有關(guān)Pg在癌癥發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性研究也日漸增多。研究表明Pg感染與口腔鱗癌發(fā)生發(fā)展呈正相關(guān)[5],Pg感染與多種消化道、呼吸道腫瘤的發(fā)生發(fā)展也有關(guān)[6-7]。Pg感染導(dǎo)致宿主細(xì)胞癌變的機(jī)制可能是多方面的,已知的如Pg可增加IL-6和STAT3活性,促進(jìn)腫瘤發(fā)生[8]。Pg能上調(diào)微RNAs(micro-RNAs),例如miR-203在牙齦上皮細(xì)胞中可以抑制凋亡等[6]。2016年高社干等[3]首次研究已提示Pg感染可能是食管鱗癌一個(gè)新的危險(xiǎn)因素,應(yīng)作為食管鱗癌的預(yù)后生物標(biāo)志物之一。

    本研究結(jié)果顯示Pg在口腔、食管上、中、下段癌組織中均有一定的檢出率。從口腔到食管胸下段鱗癌組,Pg的檢出率從上而下依次遞減,免疫組化染色評(píng)分由上至下也呈逐漸下降趨勢(shì)??紤]與Pg不耐酸性環(huán)境,而從口腔至食管下段接觸胃酸的機(jī)會(huì)逐漸增加有關(guān)。通過(guò)對(duì)Pg與食管胸上、中、下段3組鱗癌的臨床病理特征的相關(guān)性進(jìn)行分析,縱向比較結(jié)果顯示:在食管胸上段鱗癌組中,Pg與飲酒、腫瘤浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期及生存具有顯著相關(guān)性;在食管胸中段鱗癌組中,Pg與年齡、腫瘤浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有顯著相關(guān)性;在食管胸下段鱗癌組中,Pg與性別、飲酒、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期及生存具有顯著相關(guān)性,并且各組中Pg陽(yáng)性組在以上相關(guān)因素中均較Pg陰性組差,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

    通過(guò)縱向比較發(fā)現(xiàn),在腫瘤浸潤(rùn)深度方面,食管胸上段鱗癌組浸潤(rùn)深度達(dá)到或超過(guò)纖維膜的Pg檢出率58.00%,明顯高于下段組的41.00%,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);中段與下段無(wú)差別(P>0.05);在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面,食管上段鱗癌組中發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的Pg檢出率73.10%,食管胸中段組64.70%,食管下段組56.30%。3組發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的比例由上到下逐漸下降,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。在臨床分期方面,分期為Ⅲ/Ⅳ期的食管上、中、下段鱗癌組的Pg檢出率分別為59.00%、42.60%和47.60%,上、下段差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),中、下段無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。Pg在口腔和食管鱗癌組織中的感染率和腫瘤浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期3個(gè)方面的相關(guān)性分析,均提示Pg感染是促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展的危險(xiǎn)因素,生存分析也提示Pg感染者預(yù)后較差。

    本研究結(jié)果表明:Pg感染在口腔和食管鱗癌的發(fā)生發(fā)展中具有明顯的促進(jìn)作用,可能是口腔和食管鱗癌發(fā)生發(fā)展的重要危險(xiǎn)因素,并可能作為評(píng)價(jià)其惡性程度和預(yù)后的生物標(biāo)志物之一;防治Pg感染可能會(huì)改善口腔和食管鱗癌的治療效果及預(yù)后。上述結(jié)論有待于進(jìn)一步的基礎(chǔ)和臨床研究證據(jù)支持。

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