超聲聯(lián)合AKR1B10在甲狀腺結(jié)節(jié)良惡性鑒別中的應(yīng)用

彭旭紅 李佳 張健

【摘 要】：目的：探討超聲聯(lián)合AKR1B10在甲狀腺良惡性結(jié)節(jié)鑒別中的作用。方法：利用超聲診斷甲狀腺結(jié)節(jié)的良惡性特征;用免疫組織化學(xué)檢測(cè)36例甲狀腺病理組織中AKR1B10的表達(dá)水平（表達(dá)評(píng)分）;分析36例甲狀腺結(jié)節(jié)患者的超聲檢查與AKR1B10表達(dá)評(píng)分聯(lián)合診斷甲狀腺結(jié)節(jié)性質(zhì)，以病理診斷結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，評(píng)價(jià)超聲檢查、AKR1B10檢測(cè)及聯(lián)合診斷甲狀腺結(jié)節(jié)良惡性的應(yīng)用價(jià)值。結(jié)果：?jiǎn)斡贸曉\斷甲狀腺癌的準(zhǔn)確率分別是75%（27/36）;單用腫瘤標(biāo)志物AKR1B10診斷甲狀腺腫瘤的準(zhǔn)確率為75%（27/36）;超聲聯(lián)合腫瘤標(biāo)志物AKR1B10檢查診斷甲狀腺腫瘤的準(zhǔn)確率為97.20%（35/36），顯著高于單獨(dú)超聲或單獨(dú)AKR1B10檢測(cè)。結(jié)論：超聲聯(lián)合腫瘤標(biāo)志物AKR1B10檢查可提高甲狀腺腫瘤診斷的準(zhǔn)確度、特異性，AKR1B10有望作為分子標(biāo)志物，為甲狀腺乳頭狀癌的臨床診斷和治療提新思路。

【關(guān)鍵詞】：甲狀腺腫瘤;超聲;AKR1B10

【中圖分類號(hào)】R876【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B【文章編號(hào)】1672-3783（2019）10-03--01

當(dāng)代社會(huì)由于環(huán)境問(wèn)題和生活壓力越來(lái)越大，甲狀腺結(jié)節(jié)發(fā)生率越來(lái)越高。甲狀腺結(jié)節(jié)是指在甲狀腺內(nèi)的腫塊，包括增生性結(jié)節(jié)性甲狀腺腫、甲狀腺良性腫瘤、甲狀腺囊腫、甲狀腺癌等。甲狀腺癌發(fā)病率呈逐漸上升趨勢(shì)，甲狀腺乳頭狀癌（papillary thyroid carcinoma， PTC）是最常見(jiàn)的病理類型。甲狀腺良惡性鑒別是甲狀腺結(jié)節(jié)治療的關(guān)鍵，診斷的金標(biāo)準(zhǔn)是病理組織診斷。病理活檢之前判斷甲狀腺良惡性對(duì)發(fā)現(xiàn)結(jié)節(jié)后的下一步診療非常重要。超聲醫(yī)學(xué)診斷在甲狀腺良惡性鑒別中具有重要的作用。另外，腫瘤標(biāo)志物在實(shí)體腫瘤診斷方面具有重要的臨床意義，目前沒(méi)有甲狀腺癌腫瘤標(biāo)志物應(yīng)用到臨床，因此甲狀腺乳頭狀癌特異性腫瘤標(biāo)志物的確立，以及可靠、可行的檢測(cè)手段的建立，對(duì)臨床提高確診率，改善甲狀腺癌的治療具有重要意義。

醛酮還原酶1B10（aldo-Keto reductase family 1 B10， AKR1B10）是醛酮還原酶超家族成員，在胃腸道正常上皮細(xì)胞內(nèi)高表達(dá)，在胃腸道腫瘤組織中低表達(dá);在多種非胃腸道實(shí)體腫瘤如乳腺癌、肝細(xì)胞癌、吸煙導(dǎo)致的非小細(xì)胞肺癌等腫瘤組織中高表達(dá)。我們前期研究發(fā)現(xiàn)AKR1B10是在甲狀腺癌組織中高表達(dá)，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移正相關(guān)。AKR1B10是經(jīng)溶酶體非經(jīng)典途徑分泌的分泌性蛋白，是潛在的腫瘤血清標(biāo)記物及防治靶標(biāo)。AKR1B10在甲狀腺結(jié)節(jié)良惡性鑒別以及能否作為甲狀腺癌血清標(biāo)志物未有文獻(xiàn)報(bào)道。因此，本研究探討AKR1B10在甲狀腺結(jié)節(jié)良惡性鑒別中的意義，并分析其聯(lián)合超聲鑒別甲狀腺結(jié)節(jié)良惡性的應(yīng)用價(jià)值，為臨床診斷提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2013年1月至2015年7月到郴州市第一人民醫(yī)院就診的36例甲狀腺結(jié)節(jié)患者的病理組織樣本，其中良性甲狀腺結(jié)節(jié)（結(jié)節(jié)性甲狀腺腫、甲狀腺濾泡性腺瘤）15例，甲狀腺乳頭狀癌21例。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）患者未接受針對(duì)甲狀腺的治療;（2）有病理診斷結(jié)果;（3）有超聲診斷結(jié)果。

1.2 AKR1B10免疫組化方法及結(jié)果評(píng)判

將用福爾馬林浸泡的甲狀腺組織包埋在蠟塊中，用切片機(jī)切成組織薄片，經(jīng)烤干、脫蠟、脫水后;用3%H2O2滅活組織中內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，用pH為6.0的枸櫞酸緩沖液修復(fù)抗原抗原;用BSA封閉30 min。用兔抗AKR1B10抗體（實(shí)驗(yàn)室自己制備）孵育過(guò)夜，用1：1000的羊抗兔二抗37 ℃孵育1小時(shí);然后用DAB顯色，用蘇木素復(fù)染，最后封片，顯微鏡觀察AKR1B10的染色情況。

每張切片于高倍鏡（40×）下選取5個(gè)相應(yīng)病理組織視野，每個(gè)視野采用染色強(qiáng)度（無(wú)色為0分，淡黃色1分，深黃色2分，黃褐色3分）和染色面積（0-5%為0分，5-10%為1分，10-50%為2分，50%以上為3分）雙重指標(biāo)綜合判斷陽(yáng)性表達(dá)情況，兩項(xiàng)指標(biāo)評(píng)分相乘，結(jié)果<2為計(jì)為“-”，2～3計(jì)為“+”，4～5計(jì)為“++”，6分以上計(jì)為“+++”。為降低人為誤差，由兩人分別在鏡下評(píng)分，結(jié)果取二人打分的平均值，對(duì)評(píng)分差異較大的結(jié)果，請(qǐng)示病理科專家會(huì)診。

1.3 超聲診斷方法

選用飛利浦IU22超聲診斷儀，探頭頻率為9-12 MHz?；颊唧w位為仰臥位，使其頭部向下、肩膀抬高，確保甲狀腺與結(jié)節(jié)的充分暴露。對(duì)患者實(shí)施彩色超聲檢查，對(duì)甲狀腺結(jié)節(jié)的成分、性狀、回聲、邊緣、強(qiáng)回聲以及甲狀腺周邊及內(nèi)部血流情況等進(jìn)行評(píng)分（見(jiàn)表1），再進(jìn)行甲狀腺結(jié)節(jié)超聲分級(jí)（TI-RADS）評(píng)分，評(píng)分≥4分超聲診斷為惡性。

1.4 觀察指標(biāo)

對(duì)比病理診斷結(jié)果，分析評(píng)價(jià)超聲檢查、AKR1B10檢測(cè)及二者聯(lián)合診斷甲狀腺結(jié)節(jié)良惡性的應(yīng)用價(jià)值。以病理診斷結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，評(píng)估三種診斷方法的準(zhǔn)確度、敏感度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。其中AKR1B10在不同甲狀腺病理組織中的表達(dá)差異采用卡方檢驗(yàn)，當(dāng)理論頻數(shù)小于1時(shí)，采用Fisher確切概率法;AKR1B10表達(dá)水平與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系采用相關(guān)性分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 AKR1B10在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)

AKR1B10在PTC組織內(nèi)主要表達(dá)于乳頭狀細(xì)胞的胞漿內(nèi)，不均勻分布，細(xì)胞染色深淺不一（圖1）。

A～D分別表示AKR1B10在甲狀腺癌組織免疫組化評(píng)分的四個(gè)等級(jí)，依次是（A）、+（B）、++（C）和+++（D），染色強(qiáng)度逐漸增強(qiáng)

2.2 AKR1B10在甲狀腺不同病理組織中的表達(dá)

AKR1B10在正常甲狀腺組織、結(jié)節(jié)性甲狀腺腫組織、甲狀腺濾泡性腺瘤中不表達(dá)或低表達(dá)（圖2A-C），在甲狀腺乳頭狀癌中表達(dá)較高（圖2D）。

正常甲狀腺組織（A），結(jié)節(jié)性甲狀腺腫（B），甲狀腺濾泡性腺瘤（C），甲狀腺乳頭狀癌（D）的免疫組化染色結(jié)果。

2.3 AKR1B10表達(dá)水平在甲狀腺乳頭狀癌及甲狀腺良性病變中的差異分析

AKR1B10在甲狀腺乳頭狀癌陽(yáng)性表達(dá)率最高（88.0%），在橋本甲狀腺炎內(nèi)的陽(yáng)性表達(dá)率次之（82.5%），在結(jié)節(jié)性甲狀腺腫、甲狀腺濾泡性腺瘤、癌旁組織和甲狀腺正常組織內(nèi)低表達(dá)（陽(yáng)性率分別為22.5%、32.5%、28.6%、38.5%）。PTC與橋本甲狀腺炎的比較不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（χ2=0.218 ，p>0.05），與結(jié)節(jié)性甲狀腺腫、甲狀腺濾泡性腺瘤、PTC癌旁組織、正常甲狀腺組織比較，差別均有顯著性（p<0.05）。

2.4 單用及聯(lián)合超聲及腫瘤標(biāo)志物AKR1B10檢查診斷甲狀腺腫瘤的結(jié)果

單用超聲診斷甲狀腺腫瘤的準(zhǔn)確率為75%（27/36），單用腫瘤標(biāo)志物AKR1B10診斷甲狀腺腫瘤的準(zhǔn)確率為75%（27/36），超聲聯(lián)合腫瘤標(biāo)志物AKR1B10檢查診斷甲狀腺腫瘤的準(zhǔn)確率為97.20%（35/36），見(jiàn)表2。

2.5 單用及聯(lián)合腫瘤標(biāo)志物AKR1B10及超聲檢查對(duì)腫瘤的診斷效果評(píng)價(jià)

單用超聲診斷甲狀腺腫瘤的靈敏度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值 分別是90.48%、53.33%、73.08%、80.00%，單用腫瘤標(biāo)志物AKR1B10診斷甲狀腺腫瘤的靈敏度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值分別是85.71%、60.00%、75.00%、75%，超聲聯(lián)合腫瘤標(biāo)志物AKR1B10檢查診斷甲狀腺腫瘤的靈敏度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值分別是100%、93.33%、95.5%、100%，見(jiàn)表3。

3 討論

本研究對(duì)比分析了超聲、腫瘤標(biāo)志物AKR1B10檢查以及聯(lián)合超聲與腫瘤標(biāo)志物AKR1B10檢查診斷甲狀腺結(jié)節(jié)良惡性的應(yīng)用價(jià)值，結(jié)果顯示聯(lián)合兩種方法診斷的準(zhǔn)確度、特異性顯著高于超聲和AKR1B10檢測(cè)。由此提示，在甲狀腺結(jié)節(jié)良惡性診斷中，聯(lián)合超聲與腫瘤標(biāo)志物AKR1B10檢查可發(fā)揮較高的應(yīng)用價(jià)值，有助于提高臨床診斷的準(zhǔn)確性。下一步我們將研究AKR1B10作為甲狀腺癌血清標(biāo)志物的可能性，并開(kāi)發(fā)血清診斷試劑盒，將血清AKR1B10濃度聯(lián)合超聲檢查應(yīng)用到甲狀腺良惡性結(jié)節(jié)診斷與鑒別診斷中，提高甲狀腺癌臨床診斷靈敏度、特異度和準(zhǔn)確度。

參考文獻(xiàn)

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