超高效液相色譜法測定調(diào)味品中姜黃素及其同系物

陳曦 馬妍 王同蕾 秦文 王晶波 沈葹

摘?要：目的：建立一種超高效液相色譜（UPLC）法測定調(diào)味品中姜黃素及其同系物去甲姜黃素和雙去甲姜黃素的方法。方法：使用BEH C18色譜柱（1.7 μm，2.1mm×100mm）分離，乙腈-4%冰醋酸為流動相等度洗脫，采用外標(biāo)法定量。結(jié)果：3種化合物在5min內(nèi)達(dá)到基線分離，在5～100 μg/mL內(nèi)線性關(guān)系良好。方法檢出限為2.4～3.0mg/kg，加標(biāo)回收率在80.2%～107.8%之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.26%～8.93%（n=6）。結(jié)論：該方法快速準(zhǔn)確、靈敏度高、前處理簡單，能夠快速測定調(diào)味品中姜黃素及其同系物的含量。

關(guān)鍵詞：姜黃素類化合物;超高效液相色譜;姜黃素

姜黃素是從姜黃、郁金、莪術(shù)等姜黃屬植物中提取的一種酚類化合物，普遍存在于姜黃、芥末等調(diào)味品中，可作為著色劑用于面糊、果凍、膨化食品和調(diào)味料等食品。姜黃素類化合物的檢測方法主要有薄層色譜分析法[1]、熒光分光光度法[2]、毛細(xì)管電泳法[3]、高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法[4]和高效液相色譜法等。其中，最常用的是高效液相色譜法。大量研究表明，姜黃具有抗腫瘤、抗炎、抗病毒[5]、抗氧化[6]、降脂等生理活性[7]。有研究表明，在抗氧化活性上，姜黃素>去甲姜黃素>雙去甲姜黃素[8]。去甲姜黃素比姜黃素的生物利用度更高[9]。在抑制人體內(nèi)皮細(xì)胞增殖和抑制腫瘤細(xì)胞遷移的活性上，雙去甲姜黃素>去甲姜黃素>姜黃素[10-11]。目前，雖然已有對于食品[12-15]和保健食品[16]中添加的姜黃素檢測的研究，但這些研究大多集中在對于含有大量姜黃提取物（如姜黃粉[17-19]和咖喱粉[20]）的樣品的研究，樣品種類并不全面。同時，目前關(guān)于姜黃素類化合物檢測的國標(biāo)為藥典方法，該方法只檢測姜黃素這一種化合物，對于同樣含有姜黃成分的眾多其他性狀和種類的調(diào)味品，和其中姜黃素及其同系物的檢測研究則很少。本研究以市售常見含有姜黃的各類調(diào)味品為研究對象，建立了對于各種類型調(diào)味品中姜黃素及其同系物的檢測方法，可以為我國今后制定相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)提供參考。

1?材料與方法

1.1?儀器

UPLC液相色譜儀，美國Waters科技有限公司;超聲波清洗儀，KQ5200E型超聲波清洗器;離心機(jī)，德國IKA公司;Milli-Q超純水儀;氮?dú)獯祾邇x。

1.2?試劑和標(biāo)準(zhǔn)品

甲酸（色譜純，F(xiàn)isher公司）;乙腈（色譜純，F(xiàn)isher公司）;乙醇，北京試劑廠;丙酮，北京試劑廠;乙酸乙酯，北京試劑廠;二氯甲醇，北京試劑廠;冰乙酸，北京試劑廠;實驗所用水均為純水機(jī)制備的超純水（電阻率18.2MΩ）。姜黃素標(biāo)準(zhǔn)品（純度98.9%）、去甲姜黃素標(biāo)準(zhǔn)品（純度98.5%）、雙去甲姜黃素標(biāo)準(zhǔn)品（純度95%），均購自中國食品藥品檢定研究院。

1.3?標(biāo)準(zhǔn)溶液配置

分別稱取姜黃素、去甲姜黃素、雙去甲姜黃素標(biāo)準(zhǔn)品各20mg（精確至0.000 1g），用色譜甲醇定容至10mL，得到標(biāo)準(zhǔn)品濃度為2.0mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液。將標(biāo)準(zhǔn)儲備液混合后逐級稀釋，配制成分別含有姜黃素、去甲姜黃素、雙去甲姜黃素5、10、20、40、60、80、100 μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。標(biāo)準(zhǔn)儲備液轉(zhuǎn)移至儲液瓶中，密封保存在4℃冰箱中?；旌蠘?biāo)準(zhǔn)工作液需要臨用現(xiàn)配。分別以各分析物的峰面積（y）和對應(yīng)的質(zhì)量濃度（x）進(jìn)行線性回歸計算，得到線性方程和相關(guān)系數(shù)。

1.4?樣品前處理

粉末狀樣品：將樣品混勻后，稱取2.0 g樣品置于50mL三角瓶中，加入25mL 80%丙酮溶液，超聲提取30min后，以3 000 r/min離心5min，吸取上清液后，用0.22 μm微孔濾膜過濾，進(jìn)樣分析。

油狀、塊狀樣品：將樣品混勻后，稱取2.0 g樣品置于50mL三角瓶中，加入25mL 80%甲醇溶液，超聲提取30min后，以3 000 r/min離心5min，吸取上清液后，用0.22 μm微孔濾膜過濾，進(jìn)樣分析。

1.5?色譜條件

色譜柱：ACQUITY 色譜柱，BEH C18，1.7μm，2.1mm×100mm;紫外檢測波長：403 nm;流動相：乙腈∶4%冰醋酸=48∶52;流速：0.2mL/min;柱溫：室溫;進(jìn)樣量：2μL。外標(biāo)法定量。

2?結(jié)果與分析

2.1?提取溶劑的選擇

姜黃素及其同系物易溶于甲醇、乙醇、丙酮等試劑，不溶于水和乙醚。本試驗從回收率和色譜峰形兩方面對甲醇、乙醇、丙酮、80%甲醇、80%乙醇、80%丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷等常見溶劑對姜黃素類化合物的提取效率進(jìn)行了考察。當(dāng)樣品為醬裝、油狀或塊狀時，只有80%甲醇溶劑提取的樣品可以得到較好的峰形。當(dāng)樣品為粉末狀固體時，上述溶劑都可以得到較好的峰性。由表1可知，當(dāng)樣品為粉末狀固體時，80%丙酮對于姜黃素及其同系物均有較高的提取效率。因此，當(dāng)樣品為粉末狀時，應(yīng)選擇80%丙酮為提取溶劑;當(dāng)樣品為醬狀、油狀或塊狀時，應(yīng)選擇80%甲醇為提取溶劑。

2.2?加標(biāo)回收和精密度試驗

分別取已知含量的咖喱粉和咖喱醬，加入樣品中各成分含量的25%、50%、100%的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行3個水平的加標(biāo)回收試驗。每種基質(zhì)每個水平平行進(jìn)行6次試驗（表2～3）。

2.3?線性范圍、檢出限及定量限

姜黃素、去甲姜黃素和雙去甲姜黃素在5min內(nèi)可完全分離，在5～100μg/mL濃度范圍內(nèi)均具有良好的線性關(guān)系。向陰性基質(zhì)中加入待測化合物，以色譜峰信噪比S/N=3時對應(yīng)的濃度為方法檢出限;以信噪比S/N=10時對應(yīng)的濃度為方法定量（表4）。

2.4?實際樣品檢測1056AC8E-4657-45B7-9FE6-8DE3A5E9A0AB

從超市采購標(biāo)識含有姜黃素的不同種類的調(diào)味品進(jìn)行檢測。樣品中均可檢測出姜黃素、去甲姜黃素及雙去甲姜黃素（表5）。

3?結(jié)論

本研究建立了采用超高效液相-色譜法測定各種類型調(diào)味品中姜黃素及其同系物的含量的方法。該方法回收率、準(zhǔn)確度和精密度均較好，滿足對目標(biāo)化合物的日常定性和定量檢測的要求。

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Determination on Curcuminoids in Condiment by Ultra-high Performance Liquid Chromatography

CHEN Xi，MA Yan，WANG Tong-lei，QIN Wen，WANG Jing-bo，SHEN Shi

（National Institute for Nutrition and Health Chinese Center for Disease Control and Prevention，Beijing 100050，China）

Abstract：Objective To establish a method for the determination of curcuminoids，including curcumin，normethylene curcumin，dimethylene curcumin from condiment by ultra-high performance liquid chromatography（UPLC）.Method The analysis was performed on a BEH C18 column（1.7μm，2.1mm×100mm）and eluted by the acetonitrile and 4% glacial acetic acid isometrically，quantified by the external standard method.Result The three kinds of curcuminoids were separated in five minutes，were linear in the concentration range of 5～100 μg/mL.The limit of detection for curcuminoids were in the range of 2.4～3.0mg/kg.Recoveries of curcuminoids at different levels were in the ranges of 80.2%～107.8%，with the relative standard deviations were 0.26%～8.93%（n=6）.Conclusion This method is fast，accurate and sensitive and the preprocessing is simple，which can be used for the determination of curcuminoids in condiment.

Keywords：curcuminoids;ultra-high performance liquid chromatography（UPLC）;curcumin

（責(zé)任編輯?唐建敏）1056AC8E-4657-45B7-9FE6-8DE3A5E9A0AB