尼莫地平磷脂/膽鹽復(fù)合膠束的制備

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(1 濟(jì)南大學(xué) 山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院 醫(yī)學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，山東 濟(jì)南 250200；2 山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所)

磷脂/膽鹽混合膠束體系中的膽酸鹽在制劑學(xué)中常用作促透劑[1-3]，可增加腸壁通透性，提高藥物的跨膜能力；磷脂作為藥物載體，在體內(nèi)易降解，無(wú)毒性和免疫原性，且其與生物膜結(jié)構(gòu)一致，可增加藥物的附著力，從而促進(jìn)藥物吸收[4-5]。故其作為新型的給藥系統(tǒng)為改善藥物的生物利用度和溶解度提供了有效的途徑[6]。近年來(lái)，尼莫地平為治療高血壓的首選藥物，但其溶解度差，生物利用度低，嚴(yán)重限制了其臨床應(yīng)用與研發(fā)[7]。為此，研究者們采取多種科學(xué)試驗(yàn)，其中磷脂/膽鹽混合膠束體系具有顯著的成效。此實(shí)驗(yàn)主要通過(guò)高效液相色譜法(High performance liquid chromatography，HPLC)考察尼莫地平磷脂/膽鹽混合膠束在不同情況下的包封率，以便篩選出最佳制備工藝。

1 儀器與試藥

1.1儀器 UltiMate 3000型高效液相色譜系統(tǒng)，Chromeleon 7色譜工作站[賽黙飛世爾科技(中國(guó))有限公司]；SQP電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器有限公司)；VORTEX-5漩渦混合器(海門市其林貝爾儀器制造有限公司)；KQ3200DE數(shù)控超聲波清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司)；D3024R臺(tái)式高速(冷凍型)微量離心機(jī)[大龍興創(chuàng)實(shí)驗(yàn)儀器(北京)有限公司]。

1.2試藥 脫氧膽酸鈉、尼莫地平(>98.5%，大連美侖生物技術(shù)有限公司)；蛋黃卵磷脂(德國(guó)Lipoid GmbH公司)；無(wú)水乙醇(分析純，天津市富宇精細(xì)化工有限公司)；氯化鈉注射液(0.9%，山東華魯制藥有限公司)；乙腈、甲醇(色譜純，美國(guó)賽默飛世爾公司)；水為娃哈哈純凈水。

2 方法與結(jié)果

2.1含量測(cè)定方法

2.1.1色譜條件 色譜柱：Hypersil GOLD (4.6 mm×150 mm, 5 μm)；流動(dòng)相：甲醇-乙腈-水(30∶30∶40)；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：238 nm；柱溫：27 ℃；進(jìn)樣量：10 L。在選定的色譜條件下，空白膠束對(duì)測(cè)定無(wú)干擾，尼莫地平的保留時(shí)間為8.04 min。尼莫地平特征色譜圖見(jiàn)9。

2.1.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密稱取尼莫地平對(duì)照品適量，置10 mL容量瓶中，用甲醇溶解，并定容至刻度，配制成為1.0 mg/mL的尼莫地平工作儲(chǔ)備液。再依次稀釋成750、500、250、100 g/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照2.1.1色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄5個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液對(duì)應(yīng)色譜峰的峰面積。以濃度X(g/mL)為橫坐標(biāo)，峰面積Y為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(見(jiàn)圖2)，得線性回歸方程：

Y=0.3065X+1.5465，r=0.9999

A.空白膠束

B.標(biāo)準(zhǔn)溶液

C.含藥膠束圖1 典型特征圖譜

圖2 尼莫地平標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.1.3精密度 取500 g/mL的尼莫地平標(biāo)準(zhǔn)溶液按照2.1.1色譜條件分別進(jìn)樣6次，記錄色譜圖，計(jì)算精密度為：RSD=0.55%。

2.1.4重復(fù)性 取同一體系下制備的尼莫地平磷脂/膽鹽復(fù)合膠束6份，按照2.1.1色譜條件連續(xù)進(jìn)樣，記錄色譜圖，計(jì)算重復(fù)性為RSD=0.60%。

2.2混合膠束的制備 采用共沉淀法制備混合膠束，操作方法：精密稱取尼莫地平原料藥50 mg，按比例加入膽鹽、磷脂，用無(wú)水乙醇溶解，在一定溫度下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，加入生理鹽水溶解，定容至50 mL，采用0.22 m的微孔濾膜過(guò)濾，即得藥物的混合膠束溶液。

2.3膠束制備工藝優(yōu)選 按L9(34)正交表安排試驗(yàn)，以所得混合膠束中尼莫地平的包封率為指標(biāo)，考察磷脂與膽鹽的質(zhì)量比(A)、輔料總量(B)和超聲時(shí)間(C)3個(gè)因素不同水平對(duì)制備工藝的影響，按2.2項(xiàng)下方法制備尼莫地平混合膠束，測(cè)定尼莫地平的包封率，優(yōu)選最佳制備工藝。因素水平安排及結(jié)果分布見(jiàn)表1和表2。極差分析表明，因素A、B、C對(duì)尼莫地平混合膠束增溶效果影響的先后順序是B>A>C，最佳制備工藝為A1、B3、C1。

表1 尼莫地平混合膠束制備的因素水平

表2 尼莫地平混合膠束正交試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

尼莫地平具有很好的降壓作用，但由于水溶相差，臨床應(yīng)用受到限制。膽鹽和磷脂分別為陰離子和兩性表面活性劑，二者在水中能相互結(jié)合形成核殼結(jié)構(gòu)的膠束[8]。將難溶性藥物包裹在膽鹽/磷脂混合膠束的疏水核中，可提高藥物在水性環(huán)境中的溶解度、穩(wěn)定性和在機(jī)體中的生物利用度[9]。

預(yù)試驗(yàn)中考察了單用膽鹽或卵磷脂對(duì)尼莫地平的影響，其中二者對(duì)尼莫地平的HPLC測(cè)定無(wú)影響，單用膽鹽增溶效果不佳，單用卵磷脂雖有一定的增溶效果，但膠束溶液不夠澄清。以上研究結(jié)果表明，在制備尼莫地平混合膠束的過(guò)程中，影響混合膠束增溶能力的因素主要有膽鹽和磷脂的比例、輔料總量、超聲時(shí)間等，膽鹽/磷脂混合膠束的應(yīng)用極大地改善了尼莫地平在水溶液中的溶解度。正交試驗(yàn)極差分析的結(jié)果確定尼莫地平混合膠束的最佳制備工藝為A1、B3、C1 ，此組合不在所做的9個(gè)試驗(yàn)中，但是這表明優(yōu)化結(jié)果不僅反映了試驗(yàn)信息，而且反映了全面試驗(yàn)信息。磷脂和膽鹽按照一定的比例混合后不但增溶效果增強(qiáng)，且膠束溶液澄清透明度好，為使增溶后的尼莫地平可廣泛應(yīng)用，故采用膽鹽/磷脂混合膠束作為增溶手段。

通常難溶性藥物成分的純度越高，其溶解度越低[10]。此次試驗(yàn)使用的尼莫地平純度大于98.5%，測(cè)得其溶解度極低。在正交試驗(yàn)中，所有的混合膠束中尼莫地平的溶解度都比原料藥高，說(shuō)明膽鹽/磷脂混合膠束可顯著提高尼莫地平的溶解度。

本試驗(yàn)采用HPLC技術(shù)建立了尼莫地平的含量測(cè)定方法，并采用混合膠束制備技術(shù)提高了尼莫地平在水中的溶解度。在今后試驗(yàn)中，若能證明混合膠束可以提高尼莫地平的生物利用度，則可為其進(jìn)一步開(kāi)發(fā)成口服制劑奠定基礎(chǔ)；若能證明混合膠束可以減輕尼莫地平靜脈注射時(shí)的不良反應(yīng)，則亦可用于注射劑的改良。本研究對(duì)于尼莫地平應(yīng)用的安全性和有效性具有重要意義。