動物源性食品中四環(huán)素類檢測前處理優(yōu)化及改進

□ 冉瑞玲 張 欽 重慶市萬州食品藥品檢驗所

目前，四環(huán)素類國家標準和進出口檢驗檢疫相關(guān)標準中，從需要的儀器設(shè)備、環(huán)境條件條件和檢測限及精密度要求的角度，GB/T 21317-2007中的高效液相色譜法可在基層檢驗部門得到廣泛應(yīng)用。

表1 加標回收率及精密度實驗結(jié)果

1 樣品前處理

稱取均質(zhì)后的樣品5.00g，置于50mL聚丙烯離心管中，分別用15mL、15mL、10mL 0.1moL/LEDTA-Mcllvainc緩沖溶液及5mL三氯甲烷冰水裕超聲提取三次，渦旋冷凍水平離心，合并上清液，加入三氯乙酸定容至50mL，渦旋冷凍水平離心。吸取10mL提取液以1滴/s的速度過PRIME HLB固相萃取柱，減壓抽干，用10mL30%甲醇乙酸乙酯洗脫，將洗脫液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，用30%甲醇三氟乙酸水溶液溶解殘渣，過0.45μm濾膜，供液相色譜測定。

2 結(jié)果與討論

2.1 樣品液液萃取優(yōu)化

本方法增加使用了三氯甲烷，使用高速離心機分層。GB/T21317-2007只選用了EDTA-Mcllvainc緩沖溶液，無法除去脂肪。

2.2 濃縮優(yōu)化

GB/T21317-2007中選用的是氮吹儀濃縮洗脫液，且溫度要求低于40℃。眾所周知，氮吹時的氣流會帶走一部分目標物，使得我們平時做檢品時容易無意識的放走不合格品。本方法將氮吹方式改為低壓濃縮儀進行濃縮樣品液，其目的在于減少流失量，提高回收率，盡可能地使樣品檢出量接近真值。

2.3 上機前去除蛋白質(zhì)的方法

本方法采用10000rpm/min 5min水平離心機，相對普通離心機而言，更好地使樣品分層，分別為最底層的三氯甲烷、中層樣品纖維等、上層提取液。加入5%三氯乙酸后離心，使得沉淀的蛋白質(zhì)平穩(wěn)地固定在離心管底部，使樣品液通過PRIME HLB柱更容易。

3 回收率及精密度試驗

取陰性樣品，加入水平分別為40、100、200ng/g標樣，每組水平 3次平行樣，同樣品處理，進行加標回收率實驗。實驗數(shù)據(jù)如表1所列，金霉素回收率在84%～89%、土霉素回收率在 88%～92%之間、四環(huán)素回收率在86%～88%、強力霉素回收率在85%～90%之間，重復(fù)性較好，RSD值＜3% ，因此該方法的準確度和精確度均可以滿足平時大批量樣品的測定要求。

4 結(jié)論

本實驗在GB/T 21317-2007的基礎(chǔ)上進行了改進，提取過程中加入了三氯甲烷及三氯乙酸，有效去除了樣品中的脂肪以及蛋白質(zhì)，達到很好的過柱效果。分離時采用水平離心機，更好地分離提取液及樣品。結(jié)果表明，GB/T 21317-2007經(jīng)本文改進后，操作更容易，方便平時大批量樣品的處理，回收率及精密度良好，適用于動物源性食品中四環(huán)素類殘留量的檢測。