超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定雞蛋中的四環(huán)素類藥物

□ 羅瑞漣 佛山市質(zhì)量計量監(jiān)督檢測中心

四環(huán)素類藥物是一類廣譜抗菌藥，可防治禽畜疾病和促進幼畜生長發(fā)育，但過量使用會使藥物殘留在動物組織以及所產(chǎn)的蛋和奶中，從而危害人類的健康。為此，我國制定了四環(huán)素、土霉素、金霉素和強力霉素這4種常用藥物的單個或復(fù)合物在動物源性食品中的最大殘留限量為100 μg/kg[1]。

目前，動物性食品中四環(huán)素類藥物的檢測方法主要有液相色譜-紫外檢測法[2]和超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[3]。固相萃取法和液-液萃取法是兩種常用的提取樣品中四環(huán)素類藥物的方法。在液-液萃取法的基礎(chǔ)上，加入適量的鹽，稱為鹽析液-液萃取法，該方法能促使有機萃取溶劑與水相混合物更好地分離開來。本文建立了同時檢測雞蛋中的4種四環(huán)素類藥物的鹽析液-液萃取法，并結(jié)合超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀進行檢測。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

試劑：四環(huán)素、土霉素、金霉素和強力霉素標(biāo)準(zhǔn)品；乙腈、甲醇、甲酸，均為色譜純；硫酸銨，分析純。儀器：Quattro Premier XE超高效液相色譜-三重四級桿串聯(lián)質(zhì)譜儀，水浴氮吹儀，電子天平，超聲波清洗器，振蕩器，離心機。

1.2 實驗方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

分別精確稱取2.5 mg 4種四環(huán)素類藥物標(biāo)準(zhǔn)品于25 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，配制成濃度為100 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，避光保存于-18 ℃條件下。用50%乙腈水溶液稀釋成一系列濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。

1.2.2 樣品溶液的制備

稱取2 g樣品置于50 mL離心管中，加入5 mL Na2EDTA-Mcllvaine緩沖溶液，超聲20 min。加入5 mL乙腈，置于振蕩器上振蕩混勻20 min。加入5 g硫酸銨，劇烈搖勻后4 500 r/min離心5 min，取上清液在50 ℃下N2吹干。殘渣用1 mL 50%乙腈水溶液定容，過0.22 μm PTFE濾膜，供超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定。

1.2.3 檢測條件

色譜柱，BEH C18，1.7 μm，100 mm×2.1 mm；柱溫，30 ℃；進樣體積，5 μL；流動相A為0.1%的甲酸水溶液，B為乙腈；流速，0.2 mL/min。采用梯度洗脫。

質(zhì)譜參數(shù)，電噴霧正離子模式；毛細管電壓2.5 kV；離子源溫度120 ℃；脫溶劑溫度300 ℃；錐孔氣流N2，流速50 L/h；碰撞氣Ar，流速0.12 mL/min；多反應(yīng)監(jiān)測。

2 結(jié)果

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

本實驗對混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進行測定，以各四環(huán)素類藥物定量離子的色譜峰面積為縱坐標(biāo)Y，對應(yīng)的濃度（ng/mL）為橫坐標(biāo)X，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，濃度在1～100 ng/mL，4種四環(huán)素類藥物的含量與其峰面積均呈現(xiàn)出良好的線性關(guān)系，見表1。

表1 四環(huán)素類藥物的線性關(guān)系

2.2 回收率和精密度

以不含目標(biāo)化合物的雞蛋為基質(zhì)，分別添加2、20 μg/kg的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，每個加標(biāo)水平平行測定4次。結(jié)果表明：本方法的平均回收率在75.32%～90.87%，方法的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于7%，完全能夠滿足日常檢測工作的需要。

2.3 檢出限

本實驗在陰性牛奶中添加低濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，1.2.2的方法處理，每個水平平行測定6次，計算標(biāo)準(zhǔn)偏差，以3倍標(biāo)準(zhǔn)偏差計算各個化合物的檢出限，最終選取檢出限最低的藥物所對應(yīng)的結(jié)果作為本方法的檢出限。結(jié)果顯示，本方法的檢出限為1.21 μg/kg。

3 結(jié)語

本文建立了鹽析液-液萃取法提取，超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測雞蛋中四環(huán)素類藥物。該方法下四環(huán)素、土霉素、金霉素和強力霉素最低檢出限為1.21 μg/kg；4種藥物在1～100 ng/mL濃度范圍內(nèi)線性相關(guān)性較好，相關(guān)系數(shù)均大于0.999 1；在2、20 μg/kg加標(biāo)水平下平均回收率為75.32%～90.87%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于7%，滿足雞蛋中四環(huán)素類藥物日常檢測工作的需要。本方法簡單快速，經(jīng)濟可靠，適用于雞蛋中四環(huán)素類藥物的定性定量分析。