恒古骨傷愈合劑對(duì)絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松和骨質(zhì)疏松性骨折模型樹鼩體成分的影響

袁鑫 角建林 吳超 趙宏斌 郭玉倩 鄭紅 唐薇

中圖分類號(hào) R282.5 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408（2018）18-2471-04

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2018.18.06

摘 要 目的：研究恒古骨傷愈合劑對(duì)絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松（OP）和骨質(zhì)疏松性骨折（OPF）模型樹鼩體成分的影響。方法：將50只雌性滇西亞種樹鼩隨機(jī)分為正常對(duì)照組（等體積0.9%氯化鈉溶液）、OP模型組（等體積0.9%氯化鈉溶液）、OP用藥組（3 mL/kg）、OPF模型組（等體積0.9%氯化鈉溶液）、OPF用藥組（3 mL/kg），每組10只。切除樹鼩雙側(cè)卵巢和子宮以建立OP模型；取OP模型樹鼩行右側(cè)后肢脛骨骨折術(shù)以建立OPF模型。建立OP模型180 d后/建立OPF模型成功后，灌胃相應(yīng)藥物，每2 d 1次，連續(xù)90 d。給藥90 d后以雙能X線吸收法檢測(cè)樹鼩全身及各部位的體成分。結(jié)果：與正常對(duì)照組比較，OP模型組樹鼩全身（含頭部和不含頭部）骨礦鹽含量均顯著減少，肌肉組織百分比均顯著降低，脂肪組織百分比均顯著升高；脊柱、腰椎、腰骶骨、骨盆骨面積均顯著增加，肌肉組織百分比均顯著降低，脂肪組織百分比均顯著升高；左骨盆、右骨盆肌肉組織百分比均顯著降低，脂肪組織百分比均顯著升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）。與OP模型組比較，OP用藥組樹鼩全身（含頭部）脂肪組織百分比顯著降低；全身（不含頭部）骨礦鹽含量顯著增加，脂肪組織百分比顯著降低；脊柱、腰椎、腰骶骨、骨盆骨面積均顯著減少，肌肉組織百分比均顯著升高，脂肪組織百分比均顯著降低；左骨盆、右骨盆肌肉組織百分比均顯著升高，脂肪組織百分比均顯著降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）。與正常對(duì)照組比較，OPF模型組樹鼩全身（含頭部和不含頭部）、脊柱、腰椎骨礦鹽含量均顯著減少，脂肪組織百分比均顯著升高；骨盆骨礦鹽含量顯著減少，肌肉組織百分比顯著降低，脂肪組織百分比均顯著升高；腰骶骨、左骨盆、右骨盆脂肪組織百分比均顯著升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）。與OPF模型組比較，OPF用藥組樹鼩全身（含頭部和不含頭部）、脊柱、骨盆肌肉組織百分比均顯著升高，脂肪組織百分比均顯著降低；腰椎、腰骶骨、左骨盆、右骨盆脂肪組織百分比均顯著降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）。結(jié)論：恒古骨傷愈合劑對(duì)絕經(jīng)后OP和OPF模型樹鼩的體成分有一定改善作用。

關(guān)鍵詞 恒古骨傷愈合劑；樹鼩；骨質(zhì)疏松；骨質(zhì)疏松性骨折；體成分

ABSTRACT OBJECTIVE： To study the effects of Osteoking on body composition of osteoporosis （OP） and osteoporotic fracture （OPF） model tree shrews after menopause. METHODS： Fifty western Yunnan female tree shrews were randomly divided into normal control group （constant volume of 0.9% sodium chloride solution）， OP model group （constant volume of 0.9% sodium chloride solution）， OP medication group （3 mL/kg）， OPF model group （constant volume of 0.9% sodium chloride solution）， and OPF medication group （3 mL/kg）， with 10 tree shrews in each group. OP model was induced by resecting bilateral ovaries and uterus. OPF model was induced by receiving tibial fracture of right hind limb. 180 d after inducing OP model/after inducing OPF model，those were given relevant medicine intragastrically， every 2 days， for consecutive 90 d. 90 d after inducing model， dual energy X-ray absorptiometry was used to detect body composition in the whole body and various parts of tree shrews. RESULTS： Compared with normal control group， the content of bone mineral salt and the percentage of muscle tissue in the whole body of tree shrews （including head，excluding head） decreased significantly in OP model group， while the percent of adipose tissue were increased significantly； bone area of vertebrae， lumbar vertebrae， lumbosacral， pelvis was increased significantly， the percentage of muscle tissue decreased significantly， while the percent age of adipose tissue were increased significantly； the percentage of muscle tissue in left pelvis and right pelvis decreased significantly， while the percentage of adipose tissue were incresed significantly， with statistical significance （P<0.05 or P<0.01）. Compared with OP model group， the percent age of adipose tissue in the whole body of tree shrews （including head） decreased significantly in OP medication group； the content of bone mineral salt in the whole body of tree shrews （excluding head） increased significantly， while the percent age of adipose tissue were decreased significantly； bone area of vertebrae， lumbar vertebrae， lumbosacral， pelvis was decreased significantly， the percentage of muscle tissue increased significantly， while the percent age of adipose tissue were decreased significantly； the percentage of muscle tissue in left pelvis and right pelvis increased significantly in OP medication group，while the percent age of adipose tissue were decreased significantly，with statistical significance （P<0.05 or P<0.01）. Compared with normal control group， the content of bone mineral salt in the whole body of tree shrews （including head，excluding head），vertebrae and lumbar vertebrae decreased significantly in OPF model group，while the percent age of adipose tissue were increased significantly； the content of bone salt and the percentage of muscle tissue in pelvis decreased significantly， while the percent age of adipose tissue were increased significantly； the percent age of adipose tissue in lumbosacral，left pelvis and right pelvis increased significantly， with statistical significance （P<0.05 or P<0.01）. Compared with OPF model group， the percent age of adipose tissue in the whole body of tree shrews （including head，excluding head）， vertebrae and pelvis increased significantly in OPF medication group，while the percent age of adipose tissue were increased significantly； the percent age of adipose tissue in lumbar vertebra， lumbosacral， left pelvis and right pelvis decreased significantly，with statistical significance （P<0.05 or P<0.01）. CONCLUSIONS： Osteoking can improve body composition of OP or OPF model tree shrews.

KEYWORDS Osteoking； Tree shrews； Osteoporosis； Osteoporotic fracture； Body composition

體成分是指人體中肌肉、脂肪、無機(jī)鹽等的含量及其所占百分比，在評(píng)價(jià)人體的營(yíng)養(yǎng)狀況、體質(zhì)水平、疾病治療效果，以及減肥、運(yùn)動(dòng)員體質(zhì)量控制等方面都具有十分重要的意義。體成分的測(cè)定方法有多種，其中雙能X線吸收法（DXA）應(yīng)用最普遍，具有穩(wěn)定性好、精確度高等優(yōu)點(diǎn)。彝藥恒古骨傷愈合劑源自云南南部彝族古方，由三七、杜仲和黃芪等藥材組合而成，是我國擁有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的民族藥，具有活血益氣、補(bǔ)肝腎、接骨續(xù)筋、消腫止痛、促進(jìn)骨折愈合的功效，臨床多用于新鮮骨折及陳舊骨折、股骨頭壞死、骨關(guān)節(jié)病、腰椎間盤突出等癥的治療。

樹鼩是一種較為理想的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，與傳統(tǒng)的非靈長(zhǎng)類骨質(zhì)疏松（OP）模型動(dòng)物（如大鼠、兔等）比較，其身體結(jié)構(gòu)、生長(zhǎng)發(fā)育和疾病與人類更為相似[1]。同時(shí)，樹鼩具有分布廣、易于飼養(yǎng)、成本低等優(yōu)點(diǎn)，其月經(jīng)周期為（26.5±8.3）d[2]，與人相似，更適合作為研究人類絕經(jīng)后OP及骨質(zhì)疏松性骨折（OPF）的模型動(dòng)物[3]。本研究利用樹鼩建立絕經(jīng)后OP和OPF模型，并灌胃給予恒古骨傷愈合劑，檢測(cè)樹鼩全身及各部位骨礦鹽含量、骨面積、肌肉和脂肪組織百分比，觀察該藥對(duì)其體成分的影響，為臨床合理用藥提供理論依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

Prodigy Spec型DXA骨密度儀（美國GE公司）。

1.2 藥品與試劑

恒古骨傷愈合劑[云南克雷斯天然藥物制藥有限公司，批準(zhǔn)文號(hào)：國藥準(zhǔn)字Z20025103，批號(hào)：20150406，規(guī)格：25 mL/瓶（每1 mL含生藥0.36 g）]；所用試劑均為分析純，水為蒸餾水。

1.3 動(dòng)物

滇西亞種樹鼩，雌性，體質(zhì)量110～120 g，由昆明醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)部提供，動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK（滇）2015-0002。飼養(yǎng)環(huán)境：溫度為22～25 ℃，相對(duì)濕度為45%～60%，每日光照時(shí)間為12 h。動(dòng)物均飼喂顆粒飼料，自由飲水。

2 方法

2.1 分組、造模與給藥

將50只樹鼩隨機(jī)分為正常對(duì)照組（等體積0.9%氯化鈉溶液）、OP模型組（等體積0.9%氯化鈉溶液）、OP用藥組（3 mL/kg）、OPF模型組（等體積0.9%氯化鈉溶液）、OPF用藥組（3 mL/kg），每組10只。除正常對(duì)照組外，其余各組樹鼩檢測(cè)全身骨密度后禁食12 h，腹腔注射10%水合氯醛（0.3 mL/100 g）麻醉，固定、脫毛、消毒，嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作原則，切除樹鼩雙側(cè)卵巢和子宮，術(shù)后給予3 d適量青霉素抗感染。建模180 d后，再次檢測(cè)樹鼩全身骨密度，自身對(duì)照術(shù)前、術(shù)后骨密度值，以骨密度降低大于25%為OP建模成功。對(duì)OPF模型組和OPF用藥組樹鼩行右側(cè)后肢脛骨骨折術(shù)以建立OPF模型。建立OP模型180 d后/建立OPF模型成功后，灌胃相應(yīng)藥物，每2 d 1次，連續(xù)90 d，每周稱定體質(zhì)量以調(diào)整給藥劑量。按照藥品說明書中的人體給藥劑量，以樹鼩體質(zhì)量/體表面積折算等效劑量，人類（70 kg）與樹鼩（130 g）的劑量換算系數(shù)為8.29[4]，即每100 g樹鼩給藥量為0.3 mL。

2.2 體成分的檢測(cè)

各組樹鼩于給藥90 d后禁食12 h，腹腔注射10%水合氯醛（0.3 mL/100 g）麻醉，取俯臥位于DXA骨密度儀測(cè)量平臺(tái)，檢測(cè)樹鼩全身（含頭部和不含頭部）及各部位（脊柱、腰椎、腰骶骨、骨盆、左骨盆、右骨盆）的體成分（骨礦鹽含量、骨面積、肌肉和脂肪組織百分比）。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料均以x±s表示，各組間比較采用單因素方差分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 恒古骨傷愈合劑對(duì)OP模型樹鼩體成分的影響

與正常對(duì)照組比較，OP模型組樹鼩全身（含頭部和不含頭部）骨礦鹽含量均顯著減少，肌肉組織百分比均顯著降低，脂肪組織百分比均顯著升高；脊柱、腰椎、腰骶骨、骨盆骨面積均顯著增加，肌肉組織百分比均顯著降低，脂肪組織百分比均顯著升高；左骨盆、右骨盆肌肉組織百分比均顯著降低，脂肪組織百分比均顯著升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）。與OP模型組比較，OP用藥組樹鼩全身（含頭部）脂肪組織百分比顯著降低；全身（不含頭部）骨礦鹽含量顯著增加，脂肪組織百分比顯著降低；脊柱、腰椎、腰骶骨、骨盆骨面積均顯著減少，肌肉組織百分比均顯著升高，脂肪組織百分比均顯著降低；左骨盆、右骨盆肌肉組織百分比均顯著升高，脂肪組織百分比均顯著降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或P<0.01），詳見表1。

3.2 恒古骨傷愈合劑對(duì)OPF模型樹鼩體成分的影響

與正常對(duì)照組比較，OPF模型組樹鼩全身（含頭部和不含頭部）、脊柱、腰椎骨礦鹽含量均顯著減少，脂肪組織百分比均顯著升高；骨盆骨礦鹽含量顯著減少，肌肉組織百分比顯著降低，脂肪組織百分比顯著升高；腰骶骨、左骨盆、右骨盆脂肪組織百分比均顯著升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）。與OPF模型組比較，OPF用藥組樹鼩全身（含頭部和不含頭部）、脊柱、骨盆肌肉組織百分比均顯著升高，脂肪組織百分比均顯著降低；腰椎、腰骶骨、左骨盆、右骨盆脂肪組織百分比均顯著降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或P<0.01），詳見表1。

4 討論

OP是絕經(jīng)后女性面臨的一大健康問題，是一種以骨骼結(jié)構(gòu)改變，骨脆性增加、強(qiáng)度降低為特征的代謝性骨病。OP早期往往不會(huì)引起人們的重視，主要表現(xiàn)為腰背部及四肢關(guān)節(jié)疼痛，勞累或負(fù)重后疼痛更加明顯[5]，晚期則會(huì)大大增加骨折風(fēng)險(xiǎn)。我國的OP發(fā)病率逐年增加，其中80%的患者為絕經(jīng)后女性[6]。OP易導(dǎo)致人體體成分改變，通常表現(xiàn)為脂肪組織增加，肌肉組織、骨礦鹽含量減少。脂肪組織是強(qiáng)大的內(nèi)分泌器官，影響著幾乎所有其他器官的功能[7]，參與能量代謝，并具有產(chǎn)生熱量、維持體溫、緩沖保護(hù)和支持填充等作用。脂肪組織在一定程度上能保護(hù)骨骼，但過量的脂肪組織會(huì)增加骨骼負(fù)擔(dān)[8]，對(duì)女性卵巢產(chǎn)生影響，并導(dǎo)致多種代謝異常疾病，包括血脂異常、高血糖和胰島素抵抗等[7]，而高血糖、胰島素抵抗又會(huì)進(jìn)一步加劇肥胖的進(jìn)程[9]。越來越多的研究表明肥胖和OP之間存在相關(guān)性。Chang CS等[10]在2009年7月隨機(jī)抽取了368例門診老年婦女測(cè)量骨密度，發(fā)現(xiàn)伴有肥胖的老年婦女骨密度顯著低于正常體質(zhì)量的老年婦女。Zhao LJ等[11]的研究也證實(shí)，中國人群中，肥胖與骨質(zhì)量存在著負(fù)相關(guān)性。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，恒古骨傷愈合劑的主要成分三七、杜仲和黃芪均有降低脂肪含量的功效[12-14]。本研究結(jié)果也顯示，恒古骨傷愈合劑能顯著降低OP和OPF模型樹鼩全身及各部位的脂肪組織百分比，推測(cè)該制劑可通過降低脂肪含量，提高骨質(zhì)量。

肌肉組織與骨骼同屬運(yùn)動(dòng)系統(tǒng)，我國自古就對(duì)“骨肉相連”有直觀的認(rèn)識(shí)，表明兩者關(guān)系密不可分。有文獻(xiàn)報(bào)道，肌肉組織含量與骨密度呈正相關(guān)性[15]。肌肉組織收縮時(shí)產(chǎn)生的機(jī)械刺激和重力負(fù)荷作用，有利于預(yù)防OP[16]。肌肉組織在骨骼發(fā)育、修復(fù)和重塑過程中起著重要作用。本研究發(fā)現(xiàn)，恒古骨傷愈合劑能不同程度升高OP和OPF模型樹鼩全身及各部位的肌肉組織百分比，提示該制劑可通過增加肌肉含量，提高骨質(zhì)量。

骨礦鹽含量決定骨的剛度和強(qiáng)度，臨床以脆性骨折、骨密度或骨礦鹽含量的減少為診斷 OP 的基本依據(jù)[17]。 本研究結(jié)果顯示，恒古骨傷愈合劑可顯著增加OP模型樹鼩全身（不含頭部）骨礦鹽含量，從而有利于骨質(zhì)量的改善。另外，與OP模型組比較，OP用藥組樹鼩各部位骨面積不同程度減少，此改變的意義尚不明確，仍有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，恒古骨傷愈合劑對(duì)絕經(jīng)后OP和OPF模型樹鼩的體成分有一定改善作用。

參考文獻(xiàn)

[ 1 ] 代解杰， 罕園園， 孫曉梅. 我是樹鼩，你知道我么？[J]. 中國比較醫(yī)學(xué)雜志，2015，25（11）：90-90.

[ 2 ] 吳強(qiáng)， 劉桂琛， 劉玲玲，等. 樹鼩血漿生殖激素初步研究[J]. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與比較醫(yī)學(xué)，1989，9（3）：140-141.

[ 3 ] 王運(yùn)林， 匡德宣， 馬朝霞，等. 去卵巢法骨質(zhì)疏松樹鼩模型的建立[J]. 中國實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào)，2015，23（6）：562-566.

[ 4 ] 吳婷婷， 屈會(huì)化， 胡麗娜，等. 基于樹鼩體表面積的樹鼩與人類及其它實(shí)驗(yàn)動(dòng)物等效劑量換算系數(shù)的測(cè)算[J]. 中華中醫(yī)藥雜志，2015，30（1）：203-205.

[ 5 ] 李景龍， 賈義軍， 邱功名. 結(jié)合雌激素片聯(lián)合用藥治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的臨床觀察[J]. 中國藥房，2016，27（20）：2849-2851.

[ 6 ] 高文偉， 申勇濤， 程稚玲，等. 鈣螯合膠原多肽與雌激素對(duì)去卵巢大鼠骨質(zhì)改善作用的比較[J]. 中國實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào)，2017，25（3）：256-262.

[ 7 ] RUTKOWSKI JM， STERN JH， SCHERER PE. The cell biology of fat expansion[J]. J Cell Biol，2015，208（5）：501.

[ 8 ] 尹志瓊. 肥胖癥患者運(yùn)動(dòng)步態(tài)對(duì)下肢骨骼的承壓性實(shí)驗(yàn)分析[J]. 科技通報(bào)，2015，31（6）：22-24.

[ 9 ] 丁婧，王輝，余詩灝，等. 肥胖大鼠模型的建立及其脂代謝相關(guān)分子機(jī)制研究[J]. 中國實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào)，2012，20（5）：20-24.

[10] CHANG CS， CHANG YF， WANG MW， et al. Inverse relationship between central obesity and osteoporosis in osteoporotic drug naive elderly females：the tianliao old people （TOP） study[J]. J Clin Densitom，2013，16（2）：204-211.

[11] ZHAO LJ， LIU YJ， LIU PY， et al. Relationship of obesity with osteoporosis.[J]. J Clin Endocrinol Metab，2007， 92（5）：1640.

[12] 楊昌永， 謝珍國， 程薇波，等. 三七皂苷對(duì)KK-Ay鼠的降糖減肥及腎病變保護(hù)作用[J]. 中藥材，2009，32（10）：1571-1576.

[13] 王善付. 杜仲對(duì)去勢(shì)大鼠骨代謝生化指標(biāo)及顯微、超微結(jié)構(gòu)影響的研究[D]. 南京：南京中醫(yī)藥大學(xué)，2010.

[14] 李曉， 張佳琪， 王雪，等. 黃芪對(duì)飲食誘導(dǎo)肥胖大鼠脂肪蓄積及瘦素抵抗的影響[J]. 中華中醫(yī)藥雜志，2016，31（3）：833-837.

[15] LIU JM， ZHAO HY， NING G， et al. Relationship between body composition and bone mineral density in healthy young and premenopausal Chinese women[J]. Osteoporosis Int，2004，15（3）：238-242.

[16] 王琳， 張克勤. 肥胖與骨質(zhì)疏松的關(guān)系研究進(jìn)展[J]. 藥品評(píng)價(jià)，2015（15）：34-39.

[17] 顧光煜. 骨質(zhì)疏松癥的實(shí)驗(yàn)室診斷[J]. 臨床檢驗(yàn)雜志，2012，30（10）：842-845.

（收稿日期：2017-12-01 修回日期：2018-01-26）

（編輯：張 靜）