無乳鏈球菌感染吉富品系尼羅羅非魚的病理學(xué)研究

羅偉 甘西 朱佳杰 敖秋桅 譚蕓 陳明 羅永巨

摘要：【目的】確定無乳鏈球菌侵染吉富品系尼羅羅非魚的途徑及靶器官，為羅非魚抗病育種及無乳鏈球菌病疫苗的研發(fā)提供理論依據(jù)。【方法】分別采用腹腔注射、經(jīng)口灌胃及體外浸泡3種方式對(duì)吉富品系尼羅羅非魚進(jìn)行無乳鏈球菌感染，然后采集感染羅非魚的鰓、脾臟、肝臟和小腸組織進(jìn)行病理形態(tài)學(xué)觀察，并利用家兔抗無乳鏈球菌血清進(jìn)行免疫組織化學(xué)定位，明確不同感染途徑下無乳鏈球菌在魚體內(nèi)各組織中的分布規(guī)律及其浸染的靶器官?！窘Y(jié)果】3種人工感染方式均能促使吉富品系尼羅羅非魚感染無乳鏈球菌，其中，腹腔注射和經(jīng)口灌胃在感染2 h后即出現(xiàn)病理變化，而體外浸泡感染方式出現(xiàn)病理變化的時(shí)間約在感染5 h后，且病變程度較腹腔注射和經(jīng)口灌胃的感染方式輕。免疫組織化學(xué)定位發(fā)現(xiàn)，腹腔注射組吉富品系尼羅羅非魚的病原菌信號(hào)出現(xiàn)順序?yàn)槠⑴K→肝臟和鰓→小腸，經(jīng)口灌胃組的病原菌信號(hào)出現(xiàn)順序?yàn)樾∧c→鰓和脾臟→肝臟，體外浸泡組的病原菌信號(hào)出現(xiàn)順序?yàn)轹w→脾臟→肝臟和小腸?！窘Y(jié)論】采用腹腔注射、經(jīng)口灌胃及體外浸泡3種方式均能促使吉富品系尼羅羅非魚感染無乳鏈球菌，其對(duì)應(yīng)的病原菌信號(hào)分別優(yōu)先在脾臟、腸道和鰓組織出現(xiàn)。因此，自然養(yǎng)殖條件下防止養(yǎng)殖水體和食源被無乳鏈球菌污染是防控羅非魚無乳鏈球菌病暴發(fā)的有效措施。

關(guān)鍵詞： 吉富品系尼羅羅非魚；無乳鏈球菌；致病途徑；靶器官；免疫組織化學(xué)

中圖分類號(hào)： S941.42 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：2095-1191（2018）02-0375-08

0 引言

【研究意義】無乳鏈球菌（Streptococcus agalactiae）是廣泛存在于自然界中的條件致病菌，可危害水產(chǎn)養(yǎng)殖中的不同魚類品種，包括羅非魚（Oreochromis niloticus）、卵形鯧鯵（Trachinotus ovatus）、斑點(diǎn)叉尾鮰（Ietalurus punetaus）、石斑魚（Epinephelus sp.）等（Jafar et al.，2008；Amal et al.，2012；劉溪等，2015；郭長明等，2017；張德鋒等，2017）。自2009年以來，隨著羅非魚規(guī)?；B(yǎng)殖模式的大面積推廣，其病害日趨嚴(yán)重，尤其是無乳鏈球菌病危害呈逐漸遞增趨勢。該病死亡率高，傳播速度快，但至今尚未找到完全根治的方法。因此，亟待開展羅非魚抗病品系選育研究以保障其產(chǎn)業(yè)的健康持續(xù)發(fā)展，而開展羅非魚抗無乳鏈球菌病育種的前提必須明確羅非魚對(duì)無乳鏈球菌侵染的免疫應(yīng)答機(jī)制。【前人研究進(jìn)展】目前，有關(guān)病原菌感染魚類的免疫應(yīng)答機(jī)制研究已有報(bào)道。Skirpstunas和Baldwin（2002）研究發(fā)現(xiàn)，愛德華氏菌（Edwardsiella ictaluri）通過腸道上皮細(xì)胞侵入斑點(diǎn)叉尾鮰體內(nèi)，從而引起腸道敗血癥；Co-tter等（2005）研究發(fā)現(xiàn)，海豚鏈球菌（Streptococcus iniae）最先感染羅非魚的胃腸組織，隨后通過局部擴(kuò)散作用進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)，最后進(jìn)入神經(jīng)中樞系統(tǒng)而引發(fā)腦膜炎等癥狀；Tu等（2010）研究證實(shí)，嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophila）通過腸道感染鯉魚（Cyprinus carpio），且感染5周后還能從其腸道中分離出病原菌；但郭松林等（2011）研究發(fā)現(xiàn)，嗜水氣單胞菌感染歐洲鰻鱺（Anguilla anguilla）時(shí)最先出現(xiàn)在腎臟組織，隨后通過循環(huán)系統(tǒng)擴(kuò)散至全身而引發(fā)病癥；張永華（2012）采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）感染斑馬魚（Danio rerio）前后IL-1β、IFN和TNF的mRNA轉(zhuǎn)錄水平，結(jié)果表明，3種炎性細(xì)胞因子的表達(dá)水平與感染方式密切相關(guān)，但隨著感染時(shí)間的延長均呈先升高后降低的變化趨勢；Peatmana等（2013）研究證實(shí)，柱狀黃桿菌（Flavobacterium cloumnare）感染斑點(diǎn)叉尾鮰的第一靶器官是鰓組織；季策（2017）研究表明，Notch1a在Notch信號(hào)通路中可能通過抑制irak家族及NFκB家族基因而抑制TLR通路傳導(dǎo)，在副溶血弧菌感染斑馬魚2 h時(shí)負(fù)向調(diào)節(jié)nfkbiaa、cxcl18b、cxcr3、il11r、c3a、cfb、myhb、myh11a、serpinf2a、ctss2和ctslb等基因的表達(dá)，進(jìn)而調(diào)控斑馬魚的天然免疫應(yīng)答機(jī)制?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】目前國內(nèi)有關(guān)羅非魚無乳鏈球菌病的研究主要集中在病原菌分離鑒定（柯劍等，2010；郭玉娟等，2012）、毒力因子篩選（鄧永強(qiáng)和汪開毓，2016；方偉等，2016）、藥物防治（華亞南等，2016；梁志凌等，2016）及疫苗研發(fā)（李莉萍等，2015；王瑞等，2015）等方面，而針對(duì)其致病途徑及感染后羅非魚機(jī)體內(nèi)組織的病理學(xué)研究報(bào)道甚少?！緮M解決的關(guān)鍵問題】通過腹腔注射、經(jīng)口灌胃和體外浸泡3種方式對(duì)吉富品系尼羅羅非魚進(jìn)行無乳鏈球菌感染，然后采集感染羅非魚的鰓、腸、脾臟和肝臟組織進(jìn)行病理形態(tài)學(xué)觀察，并利用家兔抗無乳鏈球菌血清進(jìn)行免疫組織化學(xué)定位，明確不同感染途徑下無乳鏈球菌在魚體內(nèi)各組織中的分布規(guī)律及其侵染的靶器官，為吉富品系尼羅羅非魚抗病育種及無乳鏈球菌病疫苗的研發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1. 1 試驗(yàn)材料

供試吉富品系尼羅羅非魚取自廣西南寧國家級(jí)羅非魚良種場，SPF級(jí)成年兔購自廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，無乳鏈球菌株（HN016）由廣西水產(chǎn)科學(xué)研究院魚病防治研究室保存提供。HN016菌株解凍后直接接種于雞血培養(yǎng)基上，30 ℃培養(yǎng)18～24 h，長出菌落后隨機(jī)挑取單個(gè)菌落進(jìn)行革蘭氏染色，檢測其是否攜帶雜菌；然后挑取單個(gè)菌落接種至200 mL胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基中，搖床上32 ℃培養(yǎng)24 h，以無菌生理鹽水稀釋至1×107 CFU/mL，4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1. 2 無乳鏈球菌感染方式

分別采用腹腔注射、經(jīng)口灌胃和體外浸泡3種方式對(duì)吉富品系尼羅羅非魚進(jìn)行無乳鏈球菌感染，感染試驗(yàn)魚置于3 m3的水體大桶中養(yǎng)殖，水溫控制在30～31 ℃，每天投喂膨化餌料2次，每隔3 d換水1次（1/2）。感染后每隔1 h觀察統(tǒng)計(jì)1次羅非魚的發(fā)病或死亡情況，并及時(shí)撈出病魚、死魚。

1. 3 病理形態(tài)學(xué)觀察

采集無乳鏈球菌感染羅非魚的肝臟、脾臟、鰓和小腸等組織，以Bouins液進(jìn)行固定，經(jīng)梯度脫水、石蠟包埋切片和HE染色后（王晶等，2011），于顯微鏡下觀察不同組織的病理變化。

1. 4 無乳鏈球菌免疫組化兔一抗血清制備

經(jīng)復(fù)壯培養(yǎng)的HN016菌液用0.08%甲醛在28 ℃振蕩器（300 r/min）上滅活過夜，以PBS將其濃度調(diào)至5×108 CFU/mL，與弗氏完全佐劑按1∶1混勻，即獲得無乳鏈球菌HN016免疫原混合液。然后選取5只SPF級(jí)成年兔，在其背部皮下分點(diǎn)注射無乳鏈球菌HN016免疫原混合液（2.0 mL/只），保證每點(diǎn)注射量0.1～0.2 mL。第1次免疫后，每隔3周加強(qiáng)免疫1次，其方法與第1次免疫相同，共免疫3次。免疫期間提供充足的飼料和水源。3次免疫結(jié)束后，于兔耳中動(dòng)脈采血，血樣先傾斜置于37 ℃培養(yǎng)箱中保存一段時(shí)間（不超過1 h），再置于4 ℃冰箱過夜處理，然后在4 ℃下3500 r/min離心30 min，其上層血清即為免疫組化兔一抗血清，-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1. 5 免疫組織化學(xué)觀察

包埋好的組織切片經(jīng)脫蠟、水化后進(jìn)行抗原修改，采用三步法DAB顯色（夏永娟等，2000；郭松林等，2011），經(jīng)梯度酒精脫水、二甲苯透明、中性樹膠封片后于顯微鏡下觀察結(jié)果。

2 結(jié)果與分析

2. 1 病理形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果

病理組織切片觀察發(fā)現(xiàn)，采用腹腔注射、經(jīng)口灌胃和體外浸泡3種感染方式均可使無乳鏈球菌侵入吉富品系尼羅羅非魚體內(nèi)。其中，腹腔注射和經(jīng)口灌胃組的羅非魚在感染2 h后即出現(xiàn)病變，而體外浸泡感染方式出現(xiàn)病變的時(shí)間約在感染5 h后，且病變程度較腹腔注射和經(jīng)口灌胃的感染方式輕。人工感染無乳鏈球菌后不同時(shí)間的吉富品系尼羅羅非魚鰓、脾臟、肝臟及小腸組織病理變化如下：

鰓：腹腔注射組和經(jīng)口灌胃組的吉富品系尼羅羅非魚在感染2 h后，其鰓組織均已出現(xiàn)明顯病理變化（圖1-A和圖1-B），主要表現(xiàn)為基部上皮細(xì)胞增生，黏液細(xì)胞分泌亢奮，有炎癥細(xì)胞浸潤，部分鰓小片增粗，其呼吸上皮細(xì)胞和柱狀支持細(xì)胞壞死、崩解，基部與鰓軟骨呈水腫性離散；感染5 h后，腹腔注射組和經(jīng)口灌胃組均有羅非魚表現(xiàn)出明顯的臨床癥狀，此時(shí)鰓組織病理變化十分嚴(yán)重，其基部上皮細(xì)胞大量增生，填滿鰓小片間的間隙，大部分鰓小片的呼吸上皮細(xì)胞和柱狀支持細(xì)胞壞死、崩解，黏液細(xì)胞分泌亢奮，有大量炎癥細(xì)胞浸潤（圖1-C和圖1-D）。體外浸泡組的吉富品系尼羅羅非魚在感染5 h后鰓組織才出現(xiàn)明顯病理變化（圖1-E和圖1-F），表現(xiàn)為部分鰓小片呼吸上皮細(xì)胞和柱狀支持細(xì)胞壞死、崩解，其基部與鰓軟骨呈水腫性離散，上皮細(xì)胞大量增生，填滿鰓小片間的間隙，鰓小片增粗。

脾臟：腹腔注射組和經(jīng)口灌胃組吉富品系尼羅羅非魚的脾臟在感染2 h后即開始出現(xiàn)病理變化，表現(xiàn)為含鐵血黃素增多，巨噬細(xì)胞呈彌漫性浸潤，血管變細(xì)；感染5 h后脾小結(jié)增多變粗，大量細(xì)胞呈空泡變性，胞核溶解消失，脾臟內(nèi)血管變窄或消失，血細(xì)胞下降（圖2-A和圖2-B）。體外浸泡組吉富品系尼羅羅非魚的脾臟在感染5 h后才出現(xiàn)輕微病理變化，至感染8 h時(shí)病變加重，表現(xiàn)為含鐵血黃素大量沉積，血管變窄變細(xì)，巨噬細(xì)胞大量增生且呈彌漫性浸潤，中央動(dòng)脈周圍有大量紅細(xì)胞浸潤（圖2-C）。

肝臟：腹腔注射組吉富品系尼羅羅非魚在感染2 h后，其肝臟呈現(xiàn)明顯病理變化，表現(xiàn)為毛細(xì)血管擴(kuò)張充血，肝細(xì)胞嚴(yán)重變形或壞死，肝細(xì)胞排列紊亂、胞核消失，甚至出現(xiàn)大面積的壞死灶（圖3-A）。經(jīng)口灌胃組吉富品系尼羅羅非魚的肝臟在感染5 h后才出現(xiàn)明顯病理變化，毛細(xì)血管明顯充血，干細(xì)胞出現(xiàn)空泡變性或壞死，部分肝細(xì)胞的胞漿和胞核淡染，或溶解消失，僅剩下細(xì)胞輪廓，有的匯集形成明顯的壞死灶（圖3-B）。體外浸泡組吉富品系尼羅羅非魚感染5 h后，其肝臟組織開始出現(xiàn)空泡變性，毛細(xì)血管充血破裂；感染8 h后肝細(xì)胞出現(xiàn)空泡，胞漿、胞核淡染（圖3-C），部分區(qū)域空泡現(xiàn)象嚴(yán)重，且肝右葉空泡明顯多于左葉，但整體的病變程度明顯輕于同時(shí)期的腹腔注射組和經(jīng)口灌胃組。

小腸：腹腔注射組和經(jīng)口灌胃組吉富品系尼羅羅非魚在感染2 h后，其小腸組織出現(xiàn)明顯病理變化，表現(xiàn)為腸絨毛斷裂，腸腔內(nèi)有脫落的上表皮細(xì)胞和均質(zhì)紅染的蛋白滲出物，杯狀細(xì)胞腫大，黏膜下層部分細(xì)胞的胞核、胞質(zhì)溶解消失；感染5 h后上皮細(xì)胞大面積脫落，紋狀緣消失，吸收細(xì)胞的胞膜溶解消失，肌層平滑肌纖維斷裂，染色不均，或發(fā)生凝固性壞死，固有層與黏膜下層間的間質(zhì)增寬，呈輕度水腫，有大量炎癥細(xì)胞浸潤（圖4-A和圖4-B）。體外浸泡組吉富品系尼羅羅非魚的小腸組織在感染8 h后出現(xiàn)少量腸絨毛斷裂現(xiàn)象（圖4-C），至感染12 h時(shí)病理變化開始加重，腸腔內(nèi)有脫落的上表皮細(xì)胞和均質(zhì)紅染的蛋白滲出物，杯狀細(xì)胞腫大，黏膜下層部分細(xì)胞的胞核、胞質(zhì)溶解消失，肌層纖維斷裂（圖4-D）。

2. 2 免疫組織化學(xué)觀察結(jié)果

免疫組織化學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，吉富品系尼羅羅非魚鰓組織的病原菌陽性信號(hào)主要出現(xiàn)在鰓小片和基部上皮細(xì)胞及周邊的毛細(xì)血管內(nèi)（圖5-A和圖5-B）。脾臟的早期陽性信號(hào)主要出現(xiàn)在吞噬了無乳鏈球菌的吞噬細(xì)胞及其破裂壞死后的周邊區(qū)域；隨著感染時(shí)間的延長，在脾動(dòng)脈血管及水腫病變的血管壁上也能觀察到明顯的陽性信號(hào)（圖5-C和圖5-D）；脾臟白髓區(qū)出現(xiàn)較強(qiáng)的陽性信號(hào)，說明迅速增殖的無乳鏈球菌已引發(fā)靶器官組織發(fā)生病理變化。肝臟陽性信號(hào)主要集中在肝血竇內(nèi)及部分吞噬細(xì)胞破裂后的周邊區(qū)域，少量陽性信號(hào)出現(xiàn)在病變壞死肝血竇周邊的肝細(xì)胞和竇壁細(xì)胞內(nèi)（圖5-E和圖5-F）。在腸道的結(jié)締組織、漿膜層及黏膜下層均能檢測到陽性信號(hào)（圖5-G和圖5-H），部分固有膜中也存在陽性信號(hào)；除此之外，陽性信號(hào)主要集中在含有吞噬細(xì)胞的毛細(xì)血管內(nèi)。

無乳鏈球菌經(jīng)腹腔注射、經(jīng)口灌胃和體外浸泡3種方式感染吉富品系尼羅羅非魚后，其在試驗(yàn)羅非魚鰓、脾臟、肝臟及小腸組織中的動(dòng)態(tài)定位分布情況見表1。由表1可知，腹腔注射組和經(jīng)口灌胃組吉富品系尼羅羅非魚的4個(gè)組織器官在感染2 h后均能檢測到病原菌陽性信號(hào)，其中，腹腔注射組以脾臟的陽性信號(hào)最強(qiáng)，經(jīng)口灌胃組以小腸組織的陽性信號(hào)最強(qiáng)。體外浸泡組吉富品系尼羅羅非魚在感染5 h后僅在鰓組織和脾臟中檢測到陽性信號(hào)，且以鰓組織的陽性信號(hào)較強(qiáng)。根據(jù)病原菌陽性信號(hào)出現(xiàn)的時(shí)間順序及其強(qiáng)弱分析可知，腹腔注射組吉富品系尼羅羅非魚的陽性信號(hào)出現(xiàn)順序?yàn)槠⑴K→肝臟和鰓→小腸，經(jīng)口灌胃組的陽性信號(hào)出現(xiàn)順序?yàn)樾∧c→鰓和脾臟→肝臟，體外浸泡組的陽性信號(hào)出現(xiàn)順序?yàn)轹w→脾臟→肝臟和小腸。

3 討論

3. 1 吉富品系尼羅羅非魚感染無乳鏈球菌后機(jī)體組織器官的病理變化特征

無乳鏈球菌是羅非魚養(yǎng)殖過程中的主要致病菌，具有傳染快、致死率高、治療困難等特點(diǎn)，但目前尚未明確無乳鏈球菌是通過何種途徑從哪個(gè)靶器官侵入羅非魚體內(nèi)。本研究采用腹腔注射、經(jīng)口灌胃和體外浸泡3種方式對(duì)吉富品系尼羅羅非魚進(jìn)行人工感染無乳鏈球菌，通過觀察鰓、脾臟、肝臟和小腸組織的病理變化，發(fā)現(xiàn)感染無乳鏈球菌的吉富品系尼羅羅非魚全身組織器官呈廣泛性充血和出血。鰓作為魚體血液內(nèi)循環(huán)與外界環(huán)境進(jìn)行氣體交換的主要場所（黃錦爐，2012），其病理變化主要是鰓小片上皮和基部細(xì)胞大量增生，且伴有變性甚至壞死脫落，大部分鰓小片增粗并黏連成棒狀，阻礙其攜氧能力，造成魚體血液內(nèi)循環(huán)氧氣利用效率嚴(yán)重減弱甚至喪失，引發(fā)全身組織器官出現(xiàn)缺氧性的功能紊亂，進(jìn)而加速病魚死亡（Azad et al.，2012）。吉富品系尼羅羅非魚感染無乳鏈球菌后，其脾臟腫大出血，且有大量含鐵血黃素沉積，表明脾臟血管內(nèi)的大量紅細(xì)胞已遭到破壞（Chen et al.，2007；祝璟琳等，2014a），溶血現(xiàn)象嚴(yán)重，其造血功能受阻；同時(shí)魚體的免疫抵抗力降低，進(jìn)而加速病原菌在魚體內(nèi)的增殖。肝臟是魚類的重要消化器官，在蛋白合成、機(jī)體血糖平衡維持和脂肪代謝調(diào)控方面發(fā)揮積極作用，還具有解毒和防御功能（祝璟琳等，2014b）。本研究發(fā)現(xiàn)感染無乳鏈球菌后的吉富品系尼羅羅非魚肝細(xì)胞變性壞死、排列紊亂，說明肝臟代謝功能發(fā)生障礙，導(dǎo)致機(jī)體能量供應(yīng)不足，進(jìn)而影響其免疫機(jī)能。腸道是魚類消化系統(tǒng)的重要組成部分。本研究發(fā)現(xiàn)感染無乳鏈球菌后的吉富品系尼羅羅非魚小腸內(nèi)容物已排空，腸道內(nèi)大量積水，病理組織切片觀察發(fā)現(xiàn)大部分上皮細(xì)胞變性壞死，說明魚體的消化吸收功能受損，導(dǎo)致其攝食能力降低，嚴(yán)重者甚至停止進(jìn)食，從而導(dǎo)致機(jī)體能量供應(yīng)不足。

3. 2 無乳鏈球菌在感染吉富品系尼羅羅非魚機(jī)體組織中的動(dòng)態(tài)分布情況

目前，已有采用免疫組織化學(xué)技術(shù)研究病原菌侵入機(jī)體后在各組織器官分布規(guī)律的文獻(xiàn)報(bào)道。夏永娟等（2000）利用免疫組織化學(xué)ABC法對(duì)鰻弧菌人工感染后的牙鲆肝臟和胃腸道組織進(jìn)行致病菌定位研究；郭松林等（2011）利用免疫組織化學(xué)定位技術(shù)對(duì)感染后不同階段嗜水氣單胞菌在歐洲鰻鱺肝臟、腎臟和腸道內(nèi)的分布規(guī)律進(jìn)行研究。本研究利用免疫組織化學(xué)技術(shù)對(duì)吉富品系尼羅羅非魚感染無乳鏈球菌后不同時(shí)間點(diǎn)的鰓、肝臟、脾臟及小腸組織進(jìn)行病原菌信號(hào)檢測，并根據(jù)其陽性信號(hào)出現(xiàn)的時(shí)間順序及其強(qiáng)弱分析3種感染方式的侵襲過程，結(jié)果發(fā)現(xiàn)腹腔注射組吉富品系尼羅羅非魚的病原菌信號(hào)出現(xiàn)順序?yàn)槠⑴K→肝臟和鰓→小腸，經(jīng)口灌胃組的病原菌信號(hào)出現(xiàn)順序?yàn)樾∧c→鰓和脾臟→肝臟，體外浸泡組的病原菌信號(hào)出現(xiàn)順序?yàn)轹w→脾臟→肝臟和小腸。此外，本研究的預(yù)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)以高濃度的無乳鏈球菌體外浸泡感染吉富品系尼羅羅非魚，其病原菌雖然可以侵入羅非魚機(jī)體內(nèi)，但并未表現(xiàn)出明顯的發(fā)病癥狀和死亡現(xiàn)象。由此推測，自然養(yǎng)殖條件下羅非魚感染無乳鏈球菌的最先靶器官是鰓組織，但其致病途徑主要是攝食了攜帶有無乳鏈球菌的食物。

4 結(jié)論

采用腹腔注射、經(jīng)口灌胃和體外浸泡3種方式均能促使吉富品系尼羅羅非魚感染無乳鏈球菌，其對(duì)應(yīng)的病原菌信號(hào)分別優(yōu)先在脾臟、腸道和鰓組織出現(xiàn)。因此，自然養(yǎng)殖條件下防止養(yǎng)殖水體和食源被無乳鏈球菌污染是防控羅非魚無乳鏈球菌病暴發(fā)的有效措施。

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（責(zé)任編輯 蘭宗寶）