RhoE/Rnd3在子宮內(nèi)膜樣腺癌中的表達(dá)及其臨床意義

楊云玲+鄭秀

[摘要] 目的 分析 RhoE/Rnd3在子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中的表達(dá)情況，以探討RhoE/Rnd3在子宮內(nèi)膜樣腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用及及其臨床意義。方法 采用免疫組化PV-9000法檢測(cè)2008年1月—2016年12月在福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院收住院診治的患者118例正常子宮內(nèi)膜、非典型增生子宮內(nèi)膜及子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中RhoE/Rnd3蛋白的表達(dá)情況，并分析其表達(dá)情況與臨床病理特征的相關(guān)性。結(jié)果 ①RhoE/Rnd3在正常子宮內(nèi)膜（陽(yáng)性率76.0%）、非典型增生子宮內(nèi)膜（陽(yáng)性率60.0%）、子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中（陽(yáng)性率42.6%）的表達(dá)陽(yáng)性率呈逐漸降低趨勢(shì)，三者之間陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。②在子宮內(nèi)膜樣腺癌中，RhoE/Rnd3的表達(dá)陽(yáng)性率與年齡、組織學(xué)分級(jí)及肌層浸潤(rùn)深度相關(guān)，與手術(shù)病理分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均未見相關(guān)性。結(jié)論 RhoE/Rnd3的低表達(dá)（陽(yáng)性率12.5%）與子宮內(nèi)膜樣腺癌病變的進(jìn)展和不良預(yù)后有關(guān)，對(duì)這種基因進(jìn)行監(jiān)測(cè)，有助于判斷子宮內(nèi)膜樣腺癌的惡性程度及預(yù)后，從而為子宮內(nèi)膜樣腺癌尋找有參考意義的預(yù)測(cè)指標(biāo)。

[關(guān)鍵詞] 子宮內(nèi)膜樣腺癌；RhoE/Rnd3；免疫組織化學(xué)

[中圖分類號(hào)] R737 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-0742（2017）10（c）-0011-04

Expression of RhoE/Rnd3 in Endometrial Adenocarcinoma and Its Clinical Significance

YANG Yun-ling1，2， ZHENG Xiu2

1.Department of Gynaecology and Obstetrics， Fujian Provincial Hospital， South Branch （Fujian Provincial Jinshan Hospital）， Fuzhou， Fujian Province， 350001 China； 2.Clinical School of Fujian Medical University， Fuzhou， Fujian Province， 350001 China

[Abstract] Objective This paper tries to analyze the expressions of RhoE/Rnd in endometrial adenocarcinoma and clinical significance in the development of endometrial adenocarcinoma. Methods From January 2008 to December 2016， 118 patients were admitted to the First Affiliated Hospital of Fujian Medical University， the expression of RhoE/Rnd3 was detected in normal endometria， endometrial atypical hyperplasias and endometrial adenocarcinoma with the method of imunohistochemistry （PV-9000）. And the relationships between their expression and the clinicopathological features in endometrial adenocarcinoma were analyzed. Results ①The positive expression of RhoE/Rnd3 was reduced gradually in the normal endometrium （positive rate was 76.0%）， the endometrial atypical hyperplasias （positive rate was 60.0%） and endometrial adenocarcinoma （positive rate was 42.6%）. The difference of postive rate between the three was statistically significant（P<0.05）；②The expression of RhoE/Rnd3 in endometrial adenocarcinoma was of great difference compared with that in the normal endometrial and the endometrial atypical hyperplasias. In endometrial adenocarcinoma， the positive expression of RhoE/Rnd3 was significantly assoeiated with age， histological grade and depth of myometrial invasion， but not with surgical stage and lymph node metastasis. Conclusion The low expression of RhoE/Rnd3 （positive rate of 12.5%） may contribute to progression and malignant behavior of endometrial adenocarcinoma cells. Joint detection of the expression of RhoE/Rnd3 can provide a reference for predicting the prognosis of endometrial adenocarcinoma patients.endprint

[Key words] Endometrial adenocarcinoma； RhoE/Rnd3； Immunohistochemistry

子宮內(nèi)膜癌（Endometrial Carcinoma）是發(fā)生于子宮內(nèi)膜的一組上皮性惡性腫瘤，占女性全身惡性腫瘤7%，占女性生殖道惡性腫瘤20%～30%[1]。其發(fā)病率在各地區(qū)有差異，在北美和歐洲其發(fā)生率高居女性生殖系統(tǒng)癌癥的首位，在美國(guó)每年就有40 880例新發(fā)病例，其中7 310例死于子宮內(nèi)膜癌。在我國(guó)，隨著社會(huì)的發(fā)展和經(jīng)濟(jì)條件的改善，子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率目前己接近甚至超過宮頸癌的發(fā)病率。但其發(fā)病機(jī)制仍不明確，該研究主要是對(duì)2008年1月—2016年12月期間收治的118例患者中RhoE/Rnd3蛋白表達(dá)在子宮內(nèi)膜樣腺癌發(fā)生、發(fā)展過程中的作用及其臨床意義進(jìn)行探論，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

方便收集在福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院收住院診治的臨床資料和病理資料完整的病例共118例。病理診斷正常子宮內(nèi)膜（增生期15例，分泌期10例）共25例，平均年齡45.7歲。非典型增生子宮內(nèi)膜 25例，平均年齡 46.9歲。子宮內(nèi)膜樣腺癌68例 ，根據(jù)FIGO 2009手術(shù)-病理分期標(biāo)準(zhǔn)，I期44例，Ⅱ期16例，Ⅲ期8例；組織學(xué)分級(jí)：高分化24例，中分化31例，低分化13例；肌層浸潤(rùn)<1/2者49例，肌層浸潤(rùn)1/2者19例；淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移者65例，有轉(zhuǎn)移者3例；<50歲者16例，50歲者52例，年齡36～80歲，平均55.1歲。所有研究對(duì)象術(shù)前均未接受化療、放療和激素治療，除外合并妊娠、子宮內(nèi)膜異位癥或腺肌病，其它婦科惡性腫瘤，且所有的病理診斷均經(jīng)病理科專家復(fù)核。

1.2 方法及試劑

標(biāo)本經(jīng)10%的甲醛固定，石蠟包埋，厚度4m厚度切片，常規(guī) HE染色。所有病例均按照 WHO標(biāo)準(zhǔn)確定病理診斷。免疫組化染色采用 Pv-9000法，兔抗人RHOE/RND3多克隆抗體原液（克隆號(hào)bs-6095R）購(gòu)自北京博奧森生物技術(shù)有限公司，PV-9000二步法免疫組化檢測(cè)試劑盒、DAB酶底物顯色劑等均購(gòu)自北京中杉金橋生物公司，以已知蛋白表達(dá)陽(yáng)性的組織作為陽(yáng)性對(duì)照。用PBS緩沖液代替一抗作陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)

RhoE/Rnd3陽(yáng)性染色為出現(xiàn)淡黃色至棕褐色顆粒，RhoE/Rnd3定位于細(xì)胞漿及細(xì)胞膜上。結(jié)合半定量積分法判斷蛋白表達(dá)結(jié)果，首先按染色強(qiáng)度打分：0分為無色，1分為淡黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色。鏡下選擇10個(gè)高倍視野，分別計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，根據(jù)平均陽(yáng)性細(xì)胞的百分率分為5個(gè)等級(jí)：無陽(yáng)性細(xì)胞為0分，陽(yáng)性細(xì)胞≤10%為1分，10%～50%為2分，50%～75%為3分，>75%為4分。染色強(qiáng)度與平均陽(yáng)性細(xì)胞百分比的乘積>3，定為免疫反應(yīng)陽(yáng)性。最后用雙盲法進(jìn)行資料統(tǒng)計(jì)。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

應(yīng)用 SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。組間陽(yáng)性率的比較用 χ2檢驗(yàn)，用[n（%）]表示，P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

RhoE/Rnd3蛋白在正常子宮內(nèi)膜、不典型增生子宮內(nèi)膜及子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中的表達(dá)RhoE/Rnd3在正常子宮內(nèi)膜（包括增生期和分泌期）、不典型增生子宮內(nèi)膜及子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中的表達(dá)陽(yáng)性率分別為76.0%、60.0%、42.6%，呈逐漸降低趨勢(shì)，3者之間陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見圖1～5。RhoE/Rnd3蛋白在子宮內(nèi)膜樣腺癌中的表達(dá)陽(yáng)性率與年齡、組織學(xué)分級(jí)及肌層浸潤(rùn)深度顯著相關(guān)。年齡50歲患者RhoE/Rnd3蛋白陽(yáng)性率（60.2%）明顯高于年齡50歲（25.0%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.002）； 組織學(xué)分級(jí)G3期患者RhoE/Rnd3蛋白陽(yáng)性率（15.4%）明顯低于G1期（58.3%）、G2期（41.9%）患者，且RhoE/Rnd3蛋白在子宮內(nèi)膜樣腺癌中的表達(dá)陽(yáng)性率按組織學(xué)分級(jí)G1、G2、G3呈依次遞減趨勢(shì)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.041）；肌層浸潤(rùn)深度無或<1/2肌層患者RhoE/Rnd3蛋白陽(yáng)性率 （53.1%）明顯高于肌層浸潤(rùn)深度≥1/2肌層（15.8%）患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.005）。RhoE/Rnd3蛋白表達(dá)與手術(shù)病理分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均未見相關(guān)性（P>0.05），但手術(shù)病理分期Ⅲ期患者RhoE/Rnd3蛋白陽(yáng)性率（12.5%）明顯低于Ⅰ期（52.3%）患者，且在手術(shù)病理分期為Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期中的表達(dá)呈遞減趨勢(shì)。見表1。

3 討論

RhoE是Rho家族比較獨(dú)特的一個(gè)分子，Rho家族成員與腫瘤的關(guān)系是近年來腫瘤研究的熱點(diǎn)。Rho蛋白家族在細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中起著信號(hào)轉(zhuǎn)換器或分子開關(guān)的作用，通過對(duì)細(xì)胞骨架的重組，控制著細(xì)胞遷移、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移，還可通過對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)周期的調(diào)控與細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化相聯(lián)系。RhoE是在1996年被Rosemary Foster等[2]應(yīng)用p190RhoGAP的cDNA為探針，從HeLa細(xì)胞cDNA文庫(kù)中克隆了一個(gè)編碼245個(gè)氨基酸，分子量為27kD的Ras家族蛋白，依照發(fā)現(xiàn)的順序?qū)⒃摶蚨麨镽hoE，又稱為Rnd3。RhoE/Rnd3的生物學(xué)功能主要表現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：①誘導(dǎo)細(xì)胞形態(tài)改變，增加細(xì)胞遷移能力；②抑制細(xì)胞的增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；③調(diào)節(jié)細(xì)胞分化；④參與信號(hào)傳導(dǎo)；⑤參與細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)；⑥與腫瘤細(xì)胞的耐藥性有關(guān)。

近來多項(xiàng)研究揭示RhoE/Rnd3在多種腫瘤細(xì)中表達(dá)降低或缺失，如胃癌[3]、結(jié)腸癌[4-5]、原發(fā)性肝癌[6]、前列腺癌、乳腺癌、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、食管癌等，因此RhoE/Rnd3被認(rèn)為可能是腫瘤抑制基因之一。朱亞杰等[7]采用免疫組化的方法分析胃癌 74例、結(jié)腸癌 32例及相應(yīng)癌旁組織中RhoE/Rnd3的表達(dá)水平，分析結(jié)果表明RhoE/Rnd3在胃腸道正常組織中普遍表達(dá)， 但在癌組織中低表達(dá)或缺失，在癌組織中的染色平均值為（1.99±0.28），在相應(yīng)癌旁組織中為（8.64±0.39），并隨腫瘤組織分化程度的降低染色強(qiáng)度有下降的趨勢(shì)（P<0.005）。從而表明RhoE很可能是抑癌基因。劉印欽等[8]研究結(jié)果顯示，RhoE在乳腺癌組織中表達(dá)率為46.48%，在癌旁組織中表達(dá)率為84.5l%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），RhoE表達(dá)水平與乳腺癌TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P<0.05），因此 RhoE/Rnd3在肝細(xì)胞肝癌發(fā)生發(fā)展過程中起著負(fù)性調(diào)控作用，表明RhoE/Rnd3可能在肝細(xì)胞肝癌中代表1個(gè)腫瘤抑制基因。endprint

該研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，低分化（陽(yáng)性率15.4%）、伴有肌層浸潤(rùn)深度≥1/2肌層（陽(yáng)性率15.8%）的子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中RhoE/Rnd3蛋白的表達(dá)是下調(diào)或缺失的，提示子宮內(nèi)膜樣腺癌細(xì)胞通過RhoE/Rnd3的表達(dá)下調(diào)或缺失，使癌細(xì)胞分化異常，從而促進(jìn)癌細(xì)胞的增殖、粘附、侵襲和遷移，近年來，幾項(xiàng)研究對(duì)子宮內(nèi)膜癌預(yù)后因素進(jìn)行多因素分析，手術(shù)-病理分期、組織學(xué)分級(jí)作為最重要的兩個(gè)獨(dú)立預(yù)后影響因素己達(dá)成共識(shí)[9]。該研究中手術(shù)病理分期Ⅲ期患者RhoE/Rnd3蛋白陽(yáng)性率（12.5%）明顯低于Ⅱ期（陽(yáng)性率31.3%）、Ⅰ期（陽(yáng)性率52.3%）。由此可見，RhoE/Rnd3蛋白在子宮內(nèi)膜樣腺癌中的表達(dá)陽(yáng)性率與年齡、組織學(xué)分級(jí)及肌層浸潤(rùn)深度顯著相關(guān)。隨著RhoE/Rnd3蛋白含量的減少或缺失，正常細(xì)胞向癌細(xì)胞轉(zhuǎn)化速度加快，其預(yù)后不良，提示RhoE/Rnd3蛋白低表達(dá)或表達(dá)缺失是正常子宮內(nèi)膜向子宮內(nèi)膜樣腺癌組織轉(zhuǎn)化的一種趨勢(shì)。因此，RhoE/Rnd3可以作為子宮內(nèi)膜樣腺癌患者預(yù)后良好的有用指標(biāo)。RhoE/Rnd3在多種腫瘤細(xì)胞中呈現(xiàn)低表達(dá)或缺失，并能夠通過多種途徑來抑制細(xì)胞增殖，從而參與調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的凋亡，因此被認(rèn)為可能是腫瘤抑制基因之一。深入了解RhoE/Rnd3、的真正作用，有助于了解子宮內(nèi)膜樣腺癌的發(fā)生發(fā)展機(jī)制，對(duì)于子宮內(nèi)膜癌的預(yù)防、診斷、治療及預(yù)后可發(fā)揮重大作用。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 曹澤毅.中華婦產(chǎn)科學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1999：1844.

[2] Foster R，Hu K Q，Lu Y，et a1.Identification of a novel human Rho protein with unusual properties：GTPase deficiency and in vivo famesylation.Mol Cell Biol，1996；16：2689-2699.

[3] Liang Chang，F(xiàn)engjie Guo，Yudong Wang，et al.MicroRNA-200c regulates the sensitivity of chemotherapy of gastric cancer SGC7901/DDP cells by directly targeting RhoE.[J].Pathology oncology research： POR，2014，20（1）：93-98.

[4] 徐元成，俞曉菲，周杏元. Jagged1和CD147在大腸癌的表達(dá)及其臨床意義[J].中華實(shí)驗(yàn)外科雜志 2015，32（6）：1413-1414.

[5] Chen GT， Dong WG. Targeting of RhoE inhibits epithelial-mesenchymal transition during colorectal cancer cell migration[J].Oncol and Transl Med. 2016（2）：119-126.

[6] 張超，李杰，張洪濤，等.RhoE/Rnd3在肝癌組織中的表達(dá)及臨床意義[J].科學(xué)技術(shù)與工程，2009（9）：3980-4005.

[7] 朱亞杰，石芳， 張思源，等.RhoE 在胃腸道腫瘤組織中的表達(dá)及其臨床意義[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2008（16）：989-992.

[8] 劉印欽，馮慶箐，李永林，等.CD147和RhoE在乳腺癌組織中的表達(dá)及其生物學(xué)意義[J].中華實(shí)驗(yàn)外科雜志，2014，31（2）：411-412.

[9] 吳鳴，沈鏗，郎景和，等.子宮內(nèi)膜癌206例臨床分析[J].中華婦產(chǎn)科雜志，2002，37（10）：620-621.

（收稿日期：2017-07-23）endprint