牛皮杜鵑種子萌發(fā)和組織培養(yǎng)初探

李永德

（延邊大學農學院，吉林延吉 133002）

牛皮杜鵑（拉丁學名：Rhododendron aureum Georgi）：常綠矮小灌木，花期 5～6 月，果期 7～9 月。具有較高的經(jīng)濟價值。牛皮杜鵑葉大花美，是東北稀有的常綠觀賞植物。它生于高山凍原和石質山坡上，有利于水土保持，在維持生態(tài)平衡方面起著重要的作用。此外，它還是育種的種質資源，是三級國家保護植物。

牛皮杜鵑的有性繁殖即種子繁殖出苗率低，植株生長較慢，不易培育。本研究對牛皮杜鵑種子進行了溫度、貯存方法、溫水浸種處理等的萌發(fā)試驗，以達到為該種稀有植物的種質保存和開發(fā)利用提供科學依據(jù)。

1 材料

供試材料是牛皮杜鵑種子，試驗時間是2017年4～6月。

2 方法

2.1 種子采收

牛皮杜鵑的果實在9～10月份充分成熟便可采集果實，放置于實驗室晾曬并攤開，一定不要太陽曝曬。并抖出種子，再用細篩將種子篩出，并裝入袋子，放在室內干燥的地方，以備用。

2.2 種子處理

先將種子消毒，留些未消毒種子做對照試驗；為了縮短種子在土中的吸水時間，加快出苗，可用冷水或40℃以下溫水浸泡24h或者48h。

2.3 種子的發(fā)芽試驗

將種子計數(shù)放入內放有濾紙的培養(yǎng)皿中，每皿中放入100粒種子，分別放置于不同溫度的恒溫培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)，并在15～20℃和25～30℃條件下光照12h，在不同浸種時間、不同水溫、不同培養(yǎng)濃度和不同貯存方法下研究牛皮杜鵑種子的萌發(fā)情況并予以記錄，全部設7次重復，以避免偶然性和實驗誤差的出現(xiàn)。種子的萌發(fā)以培根突破種皮為標準，萌發(fā)后繼續(xù)用配置的營養(yǎng)液在溫室內培養(yǎng)，注意種子含水率的均衡，記錄發(fā)芽情況。

2.4 組織培養(yǎng)

組織培養(yǎng)用野生牛皮杜鵑莖尖、莖段和無菌苗的莖尖、莖段葉片、根作為外植體，重點研究培養(yǎng)需要的最適合培養(yǎng)基種類和培養(yǎng)程序，還有培養(yǎng)過程中要防止污染并且減少褐變的方式，制造出牛皮杜鵑組織培養(yǎng)程序和快速繁殖體系。

2.4.1 外植體選取。用幼嫩的無菌苗作為接種材料時，帶芽莖段作為外植體的成活率和增值率較高；但是以野生牛皮杜鵑植株作為外植體時，枝條中部及下部腋芽作為外植體，對減輕污染有較好的效果，外植體采集時間最佳為3月中旬～4月上旬，切取莖尖時較大的組織效果較好。

2.4.2 外植體消毒。牛皮杜鵑種子萌發(fā)的幼苗，采取0.1%升汞和吐溫2～3滴溶液進行深層的消毒，時間為15min，野生牛皮杜鵑種子的莖尖，應先用70%的酒精表面消毒20s，再用0.1%升汞和吐溫2～3滴溶液深層消毒10min，野生牛皮杜鵑種子的莖段，需要先用70%酒精表面消毒30s，然后用0.1%升汞+吐溫2～3滴溶液深層消毒15min。

3 結果與分析

3.1 不同溫度對牛皮杜鵑種子萌發(fā)的影響

牛皮杜鵑種子萌發(fā)所需天數(shù)隨溫度升高而減少，15～20℃時需要 28～29d，25～30℃時為 19～20d，但在30℃時，許多種子開始萌動。萌發(fā)速率在30℃時表現(xiàn)為最高，種子發(fā)芽率可以達到95%，25℃時為80%，表明牛皮杜鵑發(fā)芽適合溫度大約是25℃，這就和張長芹對云南杜鵑花的試驗結果十分相近。15～20℃變溫這一組雖略慢于25～30℃這一組，但萌發(fā)率較高，這應該是由于杜鵑花在自然環(huán)境下適應日夜溫差導致的，這一特點可用于在春秋季節(jié)露天育苗。在一定較低變溫的溫度環(huán)境下可以提高種子發(fā)芽率，有利于水分和氧氣進入種子，可促進酶的活動，從而利于種子的發(fā)芽。

3.2 不同的貯存方法對牛皮杜鵑種子發(fā)芽的影響

將風干脫粒的種子放在-30℃低溫保存、脫粒室溫貯存、不脫粒室溫貯存3種種子在20℃恒溫箱里面進行培養(yǎng)。發(fā)現(xiàn)風干脫粒組是最好的，萌發(fā)率可以到達68%，很明顯比脫粒室溫貯存組61%和不脫粒貯存組的52%高，且萌發(fā)速率也較快了，提高了出苗的整齊度，脫粒室溫貯存嚴重影響了種子的萌發(fā)率，這可能因為杜鵑種子細小，所含營養(yǎng)物質很少，再加上無休眠期，由于室溫下消耗養(yǎng)分更多所致。但是低溫貯存可以延長種子的壽命。在果實中貯藏的種子，干燥度不夠，種子呼吸強度又高，養(yǎng)分消耗就更高，因而影響了種子的活力保持。

3.3 不同浸種時間對子發(fā)芽率的影響

浸種24h的種子發(fā)芽率最低，為55%，隨著浸種時間的變長至48h，發(fā)芽率提高到73%，而且發(fā)芽速率也加快，增強了出苗的整齊程度。對照干播種子發(fā)芽率只有53%；而用20℃水浸種的發(fā)芽率比干播種子發(fā)芽率高一些?？梢钥闯?，浸種時間的長短和水溫高低是影響發(fā)芽的重要原因。