• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    激光解吸/激光后電離質(zhì)譜法快速檢測黃酒中酪胺

    2018-01-18 03:07:59冷宜昕王彤彤殷志斌
    質(zhì)譜學(xué)報(bào) 2018年1期
    關(guān)鍵詞:酪胺分子離子電離

    冷宜昕,王彤彤,殷志斌,劉 蓉,杭 緯

    (廈門大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院,譜學(xué)分析與儀器教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,福建 廈門 361005)

    黃酒是中國特有的酒類,由谷米低度釀造而成。酒曲中的菌種含有蛋白酶,可分解蛋白質(zhì)產(chǎn)生多種人體必需的氨基酸,故被稱為“液體面包”。在黃酒發(fā)酵過程中,酒曲中的微生物所產(chǎn)生的氨基酸脫羧酶可使氨基酸發(fā)生脫羧作用產(chǎn)生生物胺(biogenic amine, BA)[1]。生物胺是一類具有生物活性的含氮有機(jī)物,屬于生命機(jī)體的生理物質(zhì),但生物胺含量過高會對人體的神經(jīng)系統(tǒng)造成損傷[2]。酪胺是黃酒發(fā)酵過程中產(chǎn)生的一種重要生物胺,其前體多巴胺由酪氨酸脫羧酶和單胺羥化酶的催化作用產(chǎn)生。當(dāng)人體攝入過量的酪胺時,會導(dǎo)致神經(jīng)系統(tǒng)紊亂、亢奮、血壓升高以及偏頭痛,即產(chǎn)生所謂的“奶酪效應(yīng)”[3]。中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)委員會制定了包含酒類、肉類等五大類食品中生物胺含量的分析方法[4]。

    由于實(shí)際樣品體系的復(fù)雜性與生物胺在樣品體系中的低含量,對于酪胺、組胺等生物胺的檢測常常需要預(yù)處理,將體系中的組分預(yù)先進(jìn)行分離、提純、富集再檢測。最常見的分析手段是高效液相色譜法,其具有靈敏度高與準(zhǔn)確性好的特點(diǎn),但常常需要復(fù)雜的樣品預(yù)處理和衍生化[5],而預(yù)處理過程使黃酒中生物胺的監(jiān)控十分不便,因此本課題組提出了一種無需樣品預(yù)處理即可對黃酒樣品直接上樣快速分析的質(zhì)譜法。

    激光解吸/激光后電離質(zhì)譜法(laser desorption/laser postionization mass spectrometry, L2MS)是一種應(yīng)用廣泛的質(zhì)譜分析手段,該方法使用兩束激光對待測物進(jìn)行分析,第一束激光使待測物在分解前迅速從樣品表面解吸出來,第二束激光將氣化的待測物分子電離形成分子離子進(jìn)入質(zhì)譜分析區(qū)。在實(shí)驗(yàn)過程中,使用第二束激光使氣化分子電離服從雙光子共振電離機(jī)理(resonant two-photon ionization, R2PI),其原理示于圖1。待測物分子在吸收一個光子能量后到達(dá)馳豫時間較長的穩(wěn)定激發(fā)態(tài),再通過吸收第二個光子使其發(fā)生電離[6]。激光解吸/激光后電離質(zhì)譜法對酪胺的研究可以追溯到19世紀(jì)80年代,Tembreull和Lubman課題組使用L2MS結(jié)合R2PI技術(shù)對兒茶酚胺類物質(zhì)及其衍生物進(jìn)行分析,在低能量的后電離激光下得到了清晰的酪胺純樣譜圖[7]。對于實(shí)際樣品體系,由于其復(fù)雜性,直接進(jìn)行質(zhì)譜分析十分困難,常常需要使用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(HPLC-MS)進(jìn)行分析,實(shí)驗(yàn)過程復(fù)雜、耗時長。

    圖1 雙光子共振電離原理示意圖Fig.1 Schematic diagram of resonant two-photon ionization

    本研究將著眼于R2PI對芳香體系的選擇性[8],以有效地減少黃酒體系中復(fù)雜基體對酪胺檢測的干擾。使用自行搭建的質(zhì)譜裝置在不進(jìn)行任何樣品預(yù)處理的前提下,對黃酒實(shí)際樣品進(jìn)行直接快速的分析,希望通過使用簡單的標(biāo)準(zhǔn)加入法即可測定實(shí)際樣品中的酪胺含量。

    1 實(shí)驗(yàn)部分

    1.1 裝置與儀器

    本課題組自行組裝了一臺激光解吸/激光

    后電離質(zhì)譜儀,裝置圖示于圖2。Nd:YAG納秒激光器(Minilite-Ⅱ):美國Continuum公司產(chǎn)品,激光頻率10 Hz,激光脈寬5 ns,解吸和后電離激光波長分別為532 nm和266 nm;WaveSurfer 44Xs示波器:美國LeCroy公司產(chǎn)品;microTOF-QⅡ四極桿串聯(lián)飛行時間質(zhì)譜儀:美國Bruker公司產(chǎn)品。

    1.2 主要材料與試劑

    酪胺純樣(純度98%):上海源葉生物科技有限公司產(chǎn)品;黃酒樣品:浙江紹興縣唐宋酒業(yè)有限公司產(chǎn)品;乙腈(分析純):美國Sigma公司產(chǎn)品。

    1.3 質(zhì)譜條件

    1.3.1純樣實(shí)驗(yàn) 解吸激光(532 nm)能量21 μJ,后電離激光(266 nm)能量400 μJ,延遲時間6 800 ns。

    1.3.2激光解吸對比實(shí)驗(yàn) 激光解吸質(zhì)譜(LDI-MS)解吸激光(532 nm)能量 120 μJ,延遲時間6 800 ns。

    1.3.3黃酒樣品實(shí)驗(yàn) 解吸激光(532 nm)能量117 μJ,后電離激光(266 nm)能量1.38 mJ,延遲時間6 800 ns。

    1.3.4ESI-MS對比實(shí)驗(yàn) 電噴霧離子源正離子模式,流速180 μL/h,毛細(xì)管電壓4 kV。

    2 結(jié)果與討論

    2.1 酪胺純樣分析

    酪胺屬于生物樣品,故選擇乙腈-水溶液(1∶1,V/V)作為溶劑對酪胺純樣進(jìn)行分析。

    圖2 自行搭建的激光解吸/激光后電離質(zhì)譜儀示意圖Fig.2 Schematic diagram of the in-house-built L2MS setup

    將酪胺純樣溶于乙腈-水溶液中,配制成1 mL酪胺混合溶液,其濃度梯度為0.5、1、10、50、100 mg/L,取2 μL混合溶液滴于潔凈的樣品靶上(不銹鋼靶),樣品靶與進(jìn)樣桿上的二維移動平臺直接相連,將樣品置于高真空下。酪胺分子的電離能為(8.41±0.12) eV,本實(shí)驗(yàn)的后電離激光波長為266 nm(hν=4.67 eV),雙光子能量(9.34 eV)大于酪胺分子的電離能,符合R2PI機(jī)理。在不開啟后電離激光時,通過優(yōu)化解吸激光(532 nm)至激光能量為21 μJ時,分子離子峰恰好不在質(zhì)譜圖中顯示;此時再開啟后電離激光(266 nm)并優(yōu)化至激光能量為400 μJ時,可獲得較強(qiáng)的分子離子峰信號,優(yōu)化后的延遲時間為6 800 ns,通過譜圖發(fā)現(xiàn),在酪胺濃度很低時仍可以得到較好的分子離子峰及特征峰。

    如果使用其他質(zhì)譜分析手段對酪胺進(jìn)行分析,所得的譜圖遠(yuǎn)不如使用L2MS法得到的譜圖清晰。如對高濃度(1 000 mg/L)酪胺純樣進(jìn)行激光解吸質(zhì)譜分析(LDI-MS,解吸激光波長為532 nm),酪胺分子幾乎完全被擊碎,得到的質(zhì)譜圖示于圖3b。優(yōu)化后的解吸激光(532 nm)能量為120 μJ,但無法通過調(diào)節(jié)激光能量獲取酪胺分子的分子離子峰及特征碎片峰,且雜質(zhì)峰增加。通過譜圖對比發(fā)現(xiàn),即使將酪胺純樣的濃度升高2個數(shù)量級也無法在直接解吸電離下獲得明顯的分子離子峰。

    實(shí)驗(yàn)通過將不同濃度的酪胺純樣進(jìn)行單點(diǎn)完全解吸,對所得譜圖進(jìn)行疊加,將酪胺分子的分子離子峰峰高與酪胺分子濃度的線性關(guān)系進(jìn)行外推,計(jì)算L2MS法對酪胺純樣的檢出限。將濃度梯度為0.5、1、10、50、100 mg/L的酪胺純樣進(jìn)行L2MS分析,多次重復(fù)實(shí)驗(yàn)后所得的譜圖示于圖4??梢钥闯觯词?jié)舛冉抵?.5 mg/L,譜圖依然清晰簡潔,便于解析。其中,為了更好地進(jìn)行濃度梯度比較,0.5 mg/L和1 mg/L譜圖放大了20倍,將譜圖中分子離子峰(m/z137)峰高與酪胺濃度進(jìn)行線性回歸,得到的線性關(guān)系示于圖5。對譜圖空白處信號進(jìn)行統(tǒng)計(jì),獲得背景噪音的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差,結(jié)合線性關(guān)系斜率,并根據(jù)公式LOD=3σ/k,得到L2MS法檢測酪胺純樣的檢出限為32 μg/L。

    圖3 解吸激光能量為21 μJ,后電離激光能量為400 μJ時,酪胺濃度為10 mg/L的L2MS圖(a);解吸激光能量為120 μJ時,酪胺濃度為1 000 mg/L的LDI-MS圖(b)Fig.3 L2MS of tyramine at the concentration of 10 mg/L obtained as the function of laser energy: Edesorption=21 μJ and Eionization= 400 μJ (a); LDI-MS of tyramine at the concentration of 1 000 mg/L obtained at the desorption laser energy of 120 μJ (b)

    注:為清晰的表示酪胺濃度為1 mg/L與0.5 mg/L時譜圖,將其信號放大了20倍圖4 解吸激光能量為21 μJ,后電離激光能量為400 μJ時,梯度濃度的酪胺純樣L2MS圖Fig.4 L2MS of gradient concentrations of tyramine solutions obtained as the function of Edesorption=21 μJ and Eionization=400 μJ

    公式中σ為譜圖中背景噪音的標(biāo)準(zhǔn)偏差,k為標(biāo)準(zhǔn)曲線的擬合斜率。

    圖5 L2MS法獲得的酪胺純樣中酪胺分子離子峰信號強(qiáng)度與濃度的線性關(guān)系Fig.5 Intensity-concentration curve of pure tyramine sample by L2MS

    2.2 黃酒實(shí)際樣品分析

    取2 μL黃酒實(shí)際樣品滴在潔凈的不銹鋼靶上,進(jìn)行質(zhì)譜分析。當(dāng)解吸激光(532 nm)能量為117 μJ,后電離激光(266 nm)能量為1.38 mJ時,信噪比最高,分子離子峰較強(qiáng)且碎片較少,便于譜圖解析,得到的L2MS圖示于圖6a??梢园l(fā)現(xiàn),酪胺分子的分子離子峰(m/z137)與特征峰(m/z107)信號較強(qiáng)。黃酒的主要成分是乙醇、水及糖類,并含有少量的有機(jī)酸、蛋白質(zhì)、維生素以及礦物質(zhì)。在實(shí)驗(yàn)過程中,糖類、有機(jī)酸等分子質(zhì)量較大的有機(jī)物無法被R2PI電離。食品中的生物胺包括酪胺、組胺、色胺、尸胺、精胺、亞精胺、腐胺、苯乙胺[10-11]。在譜圖中只有酪胺有較強(qiáng)的信號產(chǎn)生,這是因?yàn)槔野返姆枷阈越Y(jié)構(gòu)使其能夠通過R2PI方法進(jìn)行電離,266 nm激光的后電離可以對其高效電離。由于實(shí)際樣品分析中的激光功率較高,在譜圖上可以發(fā)現(xiàn)較多的有機(jī)物碎片,這是由部分小分子的糖類和有機(jī)酸裂解造成的,同時還有環(huán)境中的鈉鉀污染,以及不銹鋼靶所含有的金屬元素,質(zhì)譜圖示于圖6b。從整張譜圖上看,酪胺分子的信號強(qiáng)度較強(qiáng),說明該方法對酪胺的檢測具有較高的選擇性。

    如果不進(jìn)行預(yù)處理,直接使用電噴霧飛行時間質(zhì)譜(ESI-MS)對黃酒實(shí)際樣品進(jìn)行分析,由于ESI-MS的質(zhì)量歧視問題,在譜圖中無法獲得小分子質(zhì)量的碎片峰,同時,由于黃酒體系的復(fù)雜性,酪胺分子無法在基體中獲得競爭電離,譜圖解析困難。與之相比,L2MS法體現(xiàn)了高選擇性檢測的優(yōu)勢,酪胺可以在復(fù)雜基體中通過R2PI電離機(jī)理被選擇性電離,產(chǎn)生較強(qiáng)的信號,使檢測過程簡單便捷。

    圖6 解吸激光能量為117 μJ,后電離激光能量為1.38 mJ時,黃酒實(shí)際樣品的L2MS圖(a);黃酒實(shí)際樣品L2MS局部放大譜圖(m/z 0~100)(b)Fig.6 L2MS of yellow rice wine obtained at Edesorption=117 μJ and Eionization=1.38 mJ (a); the enlarged mass spectrum of (a) at m/z 0-100 (b)

    2.3 標(biāo)準(zhǔn)加入法測定黃酒中酪胺含量

    黃酒中生物胺的含量與其原料產(chǎn)地、釀造工藝、原材料品種及添加劑有較大關(guān)系。不同的米種本身所含的生物胺差異較大,同時在釀造過程中使用不同的發(fā)酵劑也會使生物胺含量發(fā)生變化[12-13]。除此之外,黃酒中酪胺含量測定也與使用的分析手段有關(guān),從文獻(xiàn)[2,13-16]報(bào)道可知,黃酒中酪胺含量最低處于100 μg/L量級,最高約100 mg/L。

    實(shí)驗(yàn)采用標(biāo)準(zhǔn)加入法測定黃酒樣品中酪胺含量,向100 μL黃酒樣品中分別加入900 μL的10、20、50、80、100 mg/L酪胺的乙腈-水溶液(1∶1,V/V),制備5組平行溶液,混勻后分別取2 μL不同濃度的混合液進(jìn)行L2MS分析。為了保證在樣品中仍能獲得最優(yōu)化的酪胺分子離子峰,實(shí)驗(yàn)延續(xù)使用對于黃酒樣品的優(yōu)化實(shí)驗(yàn)參數(shù)。在進(jìn)行多組重復(fù)實(shí)驗(yàn)后,通過酪胺分子離子峰信號強(qiáng)度與加入不同酪胺濃度的線性關(guān)系對黃酒中的酪胺含量進(jìn)行估算,示于圖7。得到的黃酒實(shí)際樣品中含有約68 mg/L酪胺,處于文獻(xiàn)值[2]范圍內(nèi),符合實(shí)際情況,可知該黃酒中的酪胺未達(dá)到對人體產(chǎn)生危害的含量(100 mg/L)。

    圖7 黃酒樣品中酪胺分子離子峰信號強(qiáng)度與濃度的線性關(guān)系Fig.7 Intensity-concentration curve of tyramine in yellow rice wine sample

    3 結(jié)論

    建立了一種黃酒中酪胺的快速、高靈敏度的質(zhì)譜檢測方法,采用激光解吸/激光后電離質(zhì)譜法結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)加入法選擇性檢測復(fù)雜黃酒體系中的酪胺成分,該方法對酪胺的檢出限可達(dá)32 μg/L,酪胺的分子離子峰信號強(qiáng)度與濃度具有良好的線性關(guān)系。結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)加入法可以估算黃酒樣品中酪胺含量約為68 mg/L,在安全食用范圍內(nèi),不會對人體造成危害。

    L2MS法具有高效、便捷的特點(diǎn),在無需任何樣品前處理的情況下,仍能對復(fù)雜體系中的關(guān)鍵組分進(jìn)行高選擇性檢測,提高了分析效率,同時具備取樣量少的特點(diǎn)。L2MS法也可以快速分析白酒、葡萄酒、醬油等含有生物胺的食品中酪胺含量,還可以用于食品中酪胺形成規(guī)律的探索,在食品安全領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用前景。

    [1] 汪建國. 黃酒中色、香、味、體的構(gòu)成和來源淺析[J]. 中國釀造,2004,(4):6-10.

    WANG Jianguo. Analysis of composition and source of color, aroma, taste, type in rice wine[J]. China Brewing, 2004, (4): 6-10(in Chinese).

    [2] 宋穎,董全. 黃酒中生物胺的形成與控制研究進(jìn)展[J]. 食品工業(yè)科技,2016,37(8):387-391.

    SONG Ying, DONG Quan. Research progress in formation and control of the biogenic amine in Chinese rice wine[J]. Science and Technology of Food Industry, 2016, 37(8): 387-391(in Chinese).

    [3] RIO B D, REDRUELLO B, LINARES D M, et al. The dietary biogenic amines tyramine and histamine show synergistic toxicity towards intestinal cells in culture[J]. Food Chemistry, 2017, (218): 249-255.

    [4] 中華人民共和國衛(wèi)生部,中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會. GB/T 5009208—2008 食品中生物胺含量的測定[S]. 北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2008.

    [5] 曹利瑞,朱松,俞劍燊,等. 黃酒中9種生物胺的高效液相色譜分析法[J]. 食品科學(xué),2016,37(4):103-107.

    CAO Lirui, ZHU Song, YU Jianshen, et al. Development of an analytical method for nine biogenic amines in Chinese yellow wine by HPLC[J]. Food Science, 2016, 37(4): 103-107(in Chinese).

    [6] JAMES W H, WALLACE S C. Two-laser photoionization supersonic jet mass spectrometry of aromatic molecules[J]. Anal Chem, 1988, (60): 5-10.

    [7] TEMBREULL R, LUBMAN D M. Pulsed laser desorption of biological molecules in supersonic beam mass spectrometry with resonant two-photon ionization detection[J]. Anal Chem, 1987, 59(8): 1 082-1 088.

    [8] REILLY J P, KOMPA K L. Laser induced multiphoton ionization mass spectrum of benzene[J]. The Journal of Chemical Physics, 1980, 73(11): 5 468-5 476.

    [9] NING Y C. Interpretation of organic spectra[M]. Singapore: John Wiley & Sons (Asia) Pte Ltd, 2011: 105-106.

    [10] GOSETTI F, MAZZUCCO E, GIANOTTI V, et al. High performance liquid chromatography/tandem mass spectrometry determination of biogenic amines in typical Piedmont cheeses[J]. Journal of Chromatography A, 2007, 1 149(2): 151-157.

    [11] 胡鵬,羅凱,陳光靜,等. 食品中生物胺的研究進(jìn)展[J]. 食品與發(fā)酵工業(yè),2012,38(12):124-128.

    HU Peng, LUO Kai, CHEN Guangjing, et al. Progress in research on biogenic amines in foods[J]. Food and Fermentation Industries, 2012, 38(12): 124-128(in Chinese).

    [12] 張鳳杰,薛潔,王異靜,等. 黃酒中生物胺的形成及其影響因素[J]. 食品與發(fā)酵工業(yè),2013,39(2):62-68.

    ZHANG Fengjie, XUE Jie, WANG Yijing, et al. The formation of biogenic amines in yellow rice wine and its influencing factors[J]. Food and Fermentation Industries, 2013, 39(2): 62-68(in Chinese).

    [13] 張無疾,夏小樂,張斌,等. 黃酒前酵中生物胺生成規(guī)律的研究[J]. 現(xiàn)代食品科技,2015,(10):269-274.

    ZHANG Wuji, XIA Xiaole, ZHANG Bin, et al. Patterns in the formation of biogenic amines in Chinese rice wine during primary fermentation process[J]. Modern Food Science and Technology, 2015, (10): 269-274(in Chinese).

    [14] 彭金龍,胡健,張鳳杰,等. 黃酒中生物胺的檢測方法改進(jìn)[J].中國釀造,2015,34(3):141-144.

    PENG Jinlong, HU Jian, ZHANG Fengjie, et al. Improvement of biogenic amine detection method in Chinese rice wine[J]. China Brewing, 2015, 34(3): 141-144(in Chinese).

    [15] 陸永梅,董明盛,呂欣,等. 高效液相色譜法測定黃酒中生物胺的含量[J]. 食品科學(xué),2006,27(1):196-199.

    LU Yongmei, DONG Mingsheng, LV Xin, et al. Biogenic amines contents in rice wine by HPLC[J]. Food Science, 2006, 27(1): 196-199(in Chinese).

    [16] 華永有,周芬霞,林宏琳,等. HPLC-FLD法檢測黃酒中9種生物胺[J]. 中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2014,(6):761-764.

    HUA Yongyou, ZHOU Fenxia, LIN Honglin, et al. HPLC-FLD method for determination of 9 biogenic amines in rice wine[J]. Chinese Journal of Health Laboratory Technology, 2014, (6): 761-764(in Chinese).

    猜你喜歡
    酪胺分子離子電離
    發(fā)酵肉制品中酪胺形成途徑與控制方法的研究進(jìn)展
    電離與離子反應(yīng)高考探源
    發(fā)酵劑抑制發(fā)酵肉制品中酪胺形成機(jī)制及效果的研究進(jìn)展
    基于HPLC-HESI-HRMS 的水冬瓜根皮化學(xué)成分分析
    PF+分子離子激發(fā)態(tài)的理論研究
    肉制品中酪胺檢測方法及其控制技術(shù)的研究進(jìn)展
    水的電離平衡問題解析
    92種工業(yè)染料在四極桿/靜電場軌道阱高分辨質(zhì)譜中的離子化規(guī)律
    計(jì)算氫分子離子鍵能的一種新方法
    山東化工(2018年16期)2018-09-12 09:43:38
    六類食物擾亂藥效
    国产亚洲精品综合一区在线观看| 一级a爱片免费观看的视频| 亚洲av美国av| 亚洲va在线va天堂va国产| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 国产伦人伦偷精品视频| 精品欧美国产一区二区三| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 91狼人影院| 麻豆久久精品国产亚洲av| 国内揄拍国产精品人妻在线| 日本a在线网址| 在线免费观看不下载黄p国产 | 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 欧美黑人欧美精品刺激| 麻豆成人午夜福利视频| 国产精品电影一区二区三区| 一区二区三区高清视频在线| 一a级毛片在线观看| 美女黄网站色视频| 国产高清激情床上av| 国国产精品蜜臀av免费| 欧美zozozo另类| 亚洲最大成人手机在线| 嫁个100分男人电影在线观看| 日本 欧美在线| 丝袜美腿在线中文| 最近中文字幕高清免费大全6 | 99热这里只有精品一区| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 日韩在线高清观看一区二区三区 | 亚洲综合色惰| 亚洲精品影视一区二区三区av| 精品午夜福利视频在线观看一区| h日本视频在线播放| 精华霜和精华液先用哪个| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 欧美成人性av电影在线观看| 久久6这里有精品| 制服丝袜大香蕉在线| 日韩av在线大香蕉| 精品免费久久久久久久清纯| а√天堂www在线а√下载| 99riav亚洲国产免费| 午夜激情福利司机影院| 日本在线视频免费播放| 中文字幕高清在线视频| .国产精品久久| 国产一区二区三区av在线 | 欧美高清成人免费视频www| 一区二区三区激情视频| 国产精品av视频在线免费观看| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 最近在线观看免费完整版| 麻豆av噜噜一区二区三区| 亚洲av不卡在线观看| 欧美极品一区二区三区四区| 久久久久久久久久久丰满 | 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 欧美丝袜亚洲另类 | 国产高清视频在线观看网站| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 乱系列少妇在线播放| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 99久久九九国产精品国产免费| 成人国产一区最新在线观看| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 欧美性感艳星| av女优亚洲男人天堂| 国产高清三级在线| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 久久欧美精品欧美久久欧美| 久久中文看片网| 欧美日韩乱码在线| 国产真实乱freesex| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 日本熟妇午夜| 欧美日本亚洲视频在线播放| 亚洲自偷自拍三级| 亚洲七黄色美女视频| 桃色一区二区三区在线观看| 亚洲精华国产精华液的使用体验 | 色视频www国产| 少妇的逼水好多| 身体一侧抽搐| 日本 av在线| 亚洲精品国产成人久久av| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 日日夜夜操网爽| 欧美三级亚洲精品| 国内揄拍国产精品人妻在线| 国产精品女同一区二区软件 | av福利片在线观看| 麻豆久久精品国产亚洲av| 美女大奶头视频| 日韩强制内射视频| 亚洲av免费高清在线观看| 黄色丝袜av网址大全| 中文字幕高清在线视频| 国产精品98久久久久久宅男小说| 国产三级在线视频| 一进一出好大好爽视频| 综合色av麻豆| 久久6这里有精品| 在线看三级毛片| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 免费观看在线日韩| 大型黄色视频在线免费观看| 亚洲av美国av| a级毛片免费高清观看在线播放| 国产伦人伦偷精品视频| 成人特级av手机在线观看| 岛国在线免费视频观看| 桃红色精品国产亚洲av| 久久久色成人| 欧美极品一区二区三区四区| 欧美日韩国产亚洲二区| 91午夜精品亚洲一区二区三区 | 可以在线观看的亚洲视频| 又爽又黄无遮挡网站| 国产在线男女| 不卡一级毛片| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 99久久无色码亚洲精品果冻| 免费看日本二区| 免费一级毛片在线播放高清视频| 国语自产精品视频在线第100页| 最好的美女福利视频网| 亚洲熟妇熟女久久| 免费人成视频x8x8入口观看| 很黄的视频免费| 亚洲中文日韩欧美视频| 亚洲精品在线观看二区| 在线免费观看的www视频| 日韩高清综合在线| 久久久国产成人精品二区| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 国产极品精品免费视频能看的| 无遮挡黄片免费观看| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 久久九九热精品免费| 国产色爽女视频免费观看| av天堂中文字幕网| 午夜a级毛片| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 可以在线观看的亚洲视频| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 日本成人三级电影网站| 午夜a级毛片| 国产精品女同一区二区软件 | 欧美日韩综合久久久久久 | 亚洲av第一区精品v没综合| 国产淫片久久久久久久久| av黄色大香蕉| 久久久久免费精品人妻一区二区| 中文字幕av成人在线电影| 久久精品影院6| 免费观看的影片在线观看| 直男gayav资源| 成年版毛片免费区| 色在线成人网| 3wmmmm亚洲av在线观看| 亚洲中文字幕日韩| www日本黄色视频网| 深爱激情五月婷婷| 国产人妻一区二区三区在| 99热这里只有是精品50| 又紧又爽又黄一区二区| 热99在线观看视频| 日日干狠狠操夜夜爽| 免费在线观看成人毛片| 赤兔流量卡办理| 欧美一区二区精品小视频在线| 国产精品一区二区三区四区久久| 亚洲欧美清纯卡通| 级片在线观看| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 久久久久久久午夜电影| 国产美女午夜福利| 精品久久久噜噜| 成年女人看的毛片在线观看| 免费电影在线观看免费观看| 一区二区三区免费毛片| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 免费在线观看日本一区| 国语自产精品视频在线第100页| 一区福利在线观看| 99国产精品一区二区蜜桃av| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 午夜免费成人在线视频| 美女cb高潮喷水在线观看| 在线播放无遮挡| 精品国产三级普通话版| 国产精品一区www在线观看 | 无人区码免费观看不卡| 欧美三级亚洲精品| 亚洲av熟女| 中文字幕久久专区| 一区福利在线观看| 国产人妻一区二区三区在| 欧美激情久久久久久爽电影| 欧美性猛交黑人性爽| 亚洲av电影不卡..在线观看| 大型黄色视频在线免费观看| 国产精品久久久久久av不卡| 中国美白少妇内射xxxbb| 精品乱码久久久久久99久播| 国内精品久久久久久久电影| 999久久久精品免费观看国产| 日本免费a在线| 亚洲av成人精品一区久久| av中文乱码字幕在线| 97热精品久久久久久| av专区在线播放| 精品久久久久久,| 美女cb高潮喷水在线观看| 亚洲,欧美,日韩| 十八禁网站免费在线| 99久国产av精品| 免费在线观看影片大全网站| 国模一区二区三区四区视频| 色5月婷婷丁香| 在线免费观看的www视频| 一级av片app| 亚洲成人久久性| 69av精品久久久久久| 淫妇啪啪啪对白视频| 成人三级黄色视频| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 精品不卡国产一区二区三区| 18禁在线播放成人免费| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 亚洲精品日韩av片在线观看| 亚洲人成伊人成综合网2020| 三级国产精品欧美在线观看| 成人无遮挡网站| 中国美白少妇内射xxxbb| 欧美黑人欧美精品刺激| 久久久久精品国产欧美久久久| 欧美三级亚洲精品| 极品教师在线免费播放| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 国产私拍福利视频在线观看| 亚洲久久久久久中文字幕| 国产三级中文精品| 亚洲国产色片| 国产精品久久久久久久电影| 男女视频在线观看网站免费| 欧美精品啪啪一区二区三区| 18禁在线播放成人免费| 日韩欧美在线乱码| 国产一区二区在线av高清观看| 免费黄网站久久成人精品| 亚洲精品亚洲一区二区| av女优亚洲男人天堂| 波野结衣二区三区在线| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 午夜视频国产福利| 天堂动漫精品| 九色国产91popny在线| 日本色播在线视频| 桃色一区二区三区在线观看| 欧美又色又爽又黄视频| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 成人特级黄色片久久久久久久| а√天堂www在线а√下载| 国产激情偷乱视频一区二区| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 亚洲男人的天堂狠狠| 亚洲真实伦在线观看| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 窝窝影院91人妻| 免费电影在线观看免费观看| 又爽又黄a免费视频| 亚洲国产精品sss在线观看| 99精品久久久久人妻精品| 亚洲专区国产一区二区| 欧美成人性av电影在线观看| 亚洲午夜理论影院| 哪里可以看免费的av片| 精品人妻一区二区三区麻豆 | 精品一区二区免费观看| 成年女人毛片免费观看观看9| 成人av一区二区三区在线看| 一边摸一边抽搐一进一小说| 欧美精品啪啪一区二区三区| 日本爱情动作片www.在线观看 | 波多野结衣高清无吗| 禁无遮挡网站| 亚洲中文字幕日韩| 色精品久久人妻99蜜桃| 老司机深夜福利视频在线观看| 少妇的逼好多水| 一本精品99久久精品77| 久久久久久久久大av| 91麻豆av在线| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 三级毛片av免费| 国产免费一级a男人的天堂| www.www免费av| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 亚洲性夜色夜夜综合| 联通29元200g的流量卡| 亚洲内射少妇av| 十八禁国产超污无遮挡网站| 久久这里只有精品中国| 日本在线视频免费播放| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 91精品国产九色| 久久人人精品亚洲av| 日韩 亚洲 欧美在线| 动漫黄色视频在线观看| 久久九九热精品免费| 小说图片视频综合网站| 一区二区三区免费毛片| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 国产精品99久久久久久久久| 99九九线精品视频在线观看视频| 亚洲性久久影院| 欧美一区二区国产精品久久精品| 亚洲av电影不卡..在线观看| 三级国产精品欧美在线观看| 黄色女人牲交| 神马国产精品三级电影在线观看| 色播亚洲综合网| 亚洲av成人精品一区久久| 久久人人精品亚洲av| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 欧美激情国产日韩精品一区| 国产男人的电影天堂91| 美女高潮的动态| 欧美日韩综合久久久久久 | 午夜亚洲福利在线播放| 十八禁国产超污无遮挡网站| 亚洲精品成人久久久久久| 日本 欧美在线| 免费观看精品视频网站| 色在线成人网| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 在线国产一区二区在线| 日韩精品有码人妻一区| 51国产日韩欧美| 在线天堂最新版资源| 听说在线观看完整版免费高清| 老司机午夜福利在线观看视频| 免费观看在线日韩| 91久久精品国产一区二区三区| 亚洲人与动物交配视频| 国产精品乱码一区二三区的特点| 亚洲av.av天堂| 亚洲人与动物交配视频| 国产亚洲精品久久久久久毛片| АⅤ资源中文在线天堂| 天堂网av新在线| 在线免费观看的www视频| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 99久久精品热视频| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 一a级毛片在线观看| 极品教师在线视频| avwww免费| 国产精品伦人一区二区| 亚洲成人精品中文字幕电影| 成年免费大片在线观看| 男女啪啪激烈高潮av片| 亚洲av免费高清在线观看| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | av中文乱码字幕在线| 精品人妻熟女av久视频| 亚洲精品在线观看二区| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 波多野结衣高清无吗| 成人性生交大片免费视频hd| 老熟妇仑乱视频hdxx| 99在线视频只有这里精品首页| 麻豆久久精品国产亚洲av| 1024手机看黄色片| 午夜福利高清视频| 超碰av人人做人人爽久久| 欧美人与善性xxx| 一个人免费在线观看电影| 在线观看舔阴道视频| 听说在线观看完整版免费高清| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 日本爱情动作片www.在线观看 | www日本黄色视频网| 老司机午夜福利在线观看视频| 精品人妻视频免费看| 欧美中文日本在线观看视频| 一a级毛片在线观看| 九九爱精品视频在线观看| 亚洲成人中文字幕在线播放| 午夜免费激情av| 男人的好看免费观看在线视频| 校园人妻丝袜中文字幕| 观看免费一级毛片| 亚洲乱码一区二区免费版| 午夜免费激情av| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 日日撸夜夜添| 精品日产1卡2卡| 午夜福利18| 久久久久国内视频| 给我免费播放毛片高清在线观看| 免费观看精品视频网站| 一区福利在线观看| 成人亚洲精品av一区二区| 精品人妻1区二区| 国产成人av教育| 国产免费一级a男人的天堂| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 国产午夜精品论理片| 成人综合一区亚洲| 日日啪夜夜撸| 亚洲欧美清纯卡通| 欧美潮喷喷水| АⅤ资源中文在线天堂| 亚洲在线自拍视频| 国产成年人精品一区二区| 中文在线观看免费www的网站| 深夜a级毛片| 桃色一区二区三区在线观看| 嫩草影视91久久| 日韩 亚洲 欧美在线| 日本-黄色视频高清免费观看| 久久久久久久精品吃奶| 国产在线男女| 婷婷六月久久综合丁香| 两人在一起打扑克的视频| 国内精品久久久久久久电影| 国产精品国产高清国产av| 国产精品精品国产色婷婷| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 久久久成人免费电影| 久久久国产成人免费| 国产精品98久久久久久宅男小说| 中文字幕熟女人妻在线| 欧美国产日韩亚洲一区| 日韩欧美 国产精品| 国模一区二区三区四区视频| 午夜日韩欧美国产| 精品午夜福利在线看| 高清在线国产一区| 3wmmmm亚洲av在线观看| aaaaa片日本免费| 一本一本综合久久| 18禁在线播放成人免费| 国产v大片淫在线免费观看| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 国产精品永久免费网站| 亚洲成人精品中文字幕电影| 99热这里只有是精品在线观看| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 99久久成人亚洲精品观看| 波多野结衣高清作品| 亚洲中文日韩欧美视频| 久久6这里有精品| 久久香蕉精品热| 最近在线观看免费完整版| 国产av在哪里看| 精品久久久久久成人av| 国产男人的电影天堂91| 亚洲成av人片在线播放无| 岛国在线免费视频观看| 999久久久精品免费观看国产| 三级毛片av免费| 婷婷色综合大香蕉| 国产高清三级在线| 嫩草影院精品99| 亚洲av五月六月丁香网| 午夜福利视频1000在线观看| 日本五十路高清| 国产v大片淫在线免费观看| 高清日韩中文字幕在线| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 免费看美女性在线毛片视频| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 99在线视频只有这里精品首页| 久久人人精品亚洲av| 亚洲图色成人| 床上黄色一级片| 老司机深夜福利视频在线观看| 亚洲精品久久国产高清桃花| 国产三级中文精品| 桃色一区二区三区在线观看| 黄片wwwwww| 观看免费一级毛片| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 国产真实乱freesex| 亚洲成人精品中文字幕电影| 九色国产91popny在线| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 亚洲av二区三区四区| 国产精品一区www在线观看 | 成人av在线播放网站| 国产三级在线视频| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 欧美性猛交黑人性爽| 婷婷亚洲欧美| av女优亚洲男人天堂| 国产真实伦视频高清在线观看 | 亚洲无线在线观看| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 成年人黄色毛片网站| 此物有八面人人有两片| 日本三级黄在线观看| 变态另类丝袜制服| 久久久久久久久久成人| 国产精华一区二区三区| 村上凉子中文字幕在线| 又爽又黄a免费视频| a级毛片a级免费在线| 一个人看的www免费观看视频| 最近在线观看免费完整版| 国产一区二区三区av在线 | 亚洲美女搞黄在线观看 | 亚洲成人久久爱视频| 五月伊人婷婷丁香| 免费人成在线观看视频色| 精品久久久久久久久av| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 午夜精品久久久久久毛片777| 搡老岳熟女国产| 最近最新中文字幕大全电影3| 99九九线精品视频在线观看视频| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 久久这里只有精品中国| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 国产精品久久视频播放| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 级片在线观看| 99九九线精品视频在线观看视频| 动漫黄色视频在线观看| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 国产亚洲91精品色在线| 国产精品国产高清国产av| 亚洲成人久久爱视频| 国产主播在线观看一区二区| 赤兔流量卡办理| 精品久久久久久久末码| 亚洲av中文av极速乱 | 久久久久久久午夜电影| 欧美最新免费一区二区三区| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 他把我摸到了高潮在线观看| 日韩欧美在线乱码| 久久久久九九精品影院| 色在线成人网| 成人综合一区亚洲| 91久久精品国产一区二区成人| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 久久久久久久亚洲中文字幕| 免费看美女性在线毛片视频| 久久精品91蜜桃| 如何舔出高潮| 久久久久久国产a免费观看| 亚洲av二区三区四区| aaaaa片日本免费| 亚洲av免费在线观看| 不卡视频在线观看欧美| 高清毛片免费观看视频网站| 欧美又色又爽又黄视频| 国产精品一区二区免费欧美| 亚洲av熟女| 国产乱人视频| 久久精品国产鲁丝片午夜精品 | 精品福利观看| 美女 人体艺术 gogo| 午夜福利欧美成人| 看黄色毛片网站| 桃红色精品国产亚洲av| 日本色播在线视频| 联通29元200g的流量卡| 日本 欧美在线| 22中文网久久字幕| 99热这里只有精品一区| 色综合站精品国产| 亚洲中文字幕日韩| 成熟少妇高潮喷水视频| 亚洲无线在线观看| 成年女人看的毛片在线观看| 国产精品伦人一区二区| 国产精品三级大全| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 国产精品伦人一区二区| 国国产精品蜜臀av免费| 熟女电影av网| 特大巨黑吊av在线直播| 国产精品,欧美在线| 国产伦在线观看视频一区| 久久九九热精品免费| 亚洲真实伦在线观看| 久久久久免费精品人妻一区二区| 欧美激情在线99| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 国产在线精品亚洲第一网站| 一区二区三区四区激情视频 | 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 男人狂女人下面高潮的视频| 精品久久国产蜜桃| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 特大巨黑吊av在线直播| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 亚洲第一区二区三区不卡| 亚洲久久久久久中文字幕| 免费看美女性在线毛片视频|