基于HPLC-HESI-HRMS 的水冬瓜根皮化學(xué)成分分析

韓忠耀，胡恩明，鄧先擴，李 燕，張林甦，曹 芳，陳建宇，周福軍

（1.黔南民族醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，貴州都勻 558000；2.貴州省中國科學(xué)院天然產(chǎn)物化學(xué)重點實驗室，貴州貴陽 550014；3.南開大學(xué)農(nóng)藥國家工程研究中心，天津 300071；4.天津藥物研究院，天津 300301）

水冬瓜根皮來源于山茱萸科植物有齒鞘柄木Toricellia AngulataOliv.var.intermedia（ Harms）Hu 的干燥根皮[1]，別名大接骨丹。中華本草（苗藥卷）記載山茱萸科植物有齒鞘柄木Toricellia AngulataOliv.var.intermedia（Harms） Hu 來源于根、根皮、樹皮和葉[2]，以根皮入藥[1,3]，該藥材同時被諸多本草所收載[4?6]。相關(guān)研究表明，大接骨丹藥材中主要含有β-谷甾醇[7?8]、7-羥基-3-乙基苯酚[7]、3β-甲氧基-豆甾-7-烯[7]、谷甾烷[7]、（E）-對甲基苯丙烯醛[7?8]、豆 甾-7-烯-3-醇[7]、鄰,對-二 甲 氧 基 苯 甲酸[7?8]、β-胡蘿卜苷[7?9]、熊果酸[7]、正十八烷酸[7]、二十二烷酸[7]、7-羥基-6-甲氧基香豆素[8]、硬脂酸[8?9]、軟脂酸[7?9]、 syringo ylglycerol[8]、 2H-1-benzopyr-an-2-one[8]、3,5-二甲氧基苯甲醛[8]、9H-pyrano[2, 3-f]-1,4-benzodio xin-9-one[8]、7-羰 基-β-胡 蘿 卜 苷[8]、10-griselinosidic acid[8,10]、丁香樹脂酚[9]、豆甾醇[9]、3,4,5,7-四羥基-苯乙酸[9]、豆甾-5,11-二烯-3β-醇[9]、22,23-二 氫 豆 甾 醇[9]、 26,27-dinor-4,4-dimethylcholesta-8,14-dien-3-ol[9]、4-羥基-3,5-二甲氧基苯甲醛[9]、Griselinoside[10]、紫 丁 香 苷[10]、Coniferin[10]、Quercetin-3-O-glucoside[10]、Astragalin[10]、Phytol[10]、金絲桃苷[11]、異槲皮苷[11]等。

液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)[12?14]，在快速鑒別或推斷中藥、民族藥化學(xué)成分具有快速、科學(xué)、可靠、綠色等優(yōu)點，同時，也被廣泛應(yīng)用于食品中農(nóng)殘快速檢測[15?17]、水產(chǎn)品安全監(jiān)測[18]、保健功能食品活性成分快速分析[19?20]等。當(dāng)前，針對貴州特色民族藥水冬瓜根皮相關(guān)研究，除上述化學(xué)成分外，主要集中在生物活性[21?23]、工藝優(yōu)化[24]、近紅外快速檢測[25]、質(zhì)量分析[26]及指紋圖譜[27]等，尚未針對水冬瓜根皮藥材化學(xué)成分HPLC-HRMS 相關(guān)研究，因此，本試驗擬以水冬瓜根皮藥材為研究樣本，采用HPLC-HESIHRMS 技術(shù)，對水冬瓜根皮藥材甲醇提取物中的主要化學(xué)成分進行推斷分析，為闡明水冬瓜根皮的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

乙腈 色譜純，西隴化工股份有限公司；甲酸AR，天津市恒興化學(xué)試劑制造有限公司；甲醇 AR，重慶江川化工（集團）有限公司；水 為超純水，自制；其他試劑 均為分析純；水冬瓜根皮藥材 自采于貴州省都勻市杉木湖溝渠（經(jīng)度：26°15′46.16″N；緯度：107°30′52.33″E，海拔807 m），藥材經(jīng)韓忠耀副教授鑒定為山茱萸科植物有齒鞘柄木Toricellia AngulataOliv.var.intermedia（Harms） Hu 的根皮。

Thermo Scientific Q Exactive Focus 高分辨Orbitrap 質(zhì)譜儀、Dionex Ultimate 3000 RSLC 液相儀 Thermo Fisher Scientific；Sartorius BT25S 電子天平 十萬分之一，德國塞多利斯公司；101-3AB 型烘箱 天津市泰斯特；雙列六孔水浴鍋 常州中捷實驗儀器制造有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 供試品溶液的制備 自采藥材烘箱60 ℃下烘干，粉碎機粉碎后過65 目篩（篩孔平均內(nèi)徑（250±9.9）μm），混勻，備用。稱取藥材粉末約0.5 g，精密稱定，置100 mL 圓底燒瓶中，精密加入甲醇100 mL，回流提取1 h，放冷，過濾于100 mL 量瓶中，用甲醇補足濾液至刻度，搖勻。濾液用0.45 μm微孔濾膜過濾，即得。

1.2.2 液相檢測條件 色譜柱：ThermoFisher Hypersil GOLD aQ C18色譜柱（100 mm×2.1 mm,1.9 μm），流速：0.3 mL/min，柱溫：40 °C，進樣量：5 μL，采用梯度洗脫，流動相B 為0.1%甲酸水溶液，C 相為乙腈（0.1%甲酸），具體洗脫條件：0～2 min：95%B；2～42 min：95%～5% B；42～47 min：5% B；47～47.1 min：5%～95% B；47.1～50 min：95% B。

1.2.3 HRMS 質(zhì)譜條件 采用熱電噴霧離子源（HESI）；掃描模式：正負(fù)離子模式同時采集Full MSddms2；質(zhì)量掃描范圍m/z ：100～1500 Da；頻譜數(shù)據(jù)類型（Spectrum data type）：Profile；數(shù)據(jù)分辨率（Resolution）：Full MS: 70000；MS/MS: 17500；自動增益控制數(shù)量（AGC target）：Full MS:1e6，MS/MS:2e5；最小注入時間（Maximum IT）：100 ms（Full MS）， 50 ms（MS/MS）；循環(huán)計數(shù)（Loop count）：3；MSX 計數(shù)（MSX count）：1；隔離寬度（Isolation width）：1.5 m/z；NCE（階梯NCE）：20、40、60；最小AGC 目標(biāo)（Minimum AGC target）：8e3；強度閾值（Intensity Threshold）：1.6e5；噴霧電壓：正離子3.0 kV；負(fù)離子2.5 kV；鞘氣（sheath gas flow rate）:35；輔助氣（aux gas flow rate）:10；吹掃氣（sweep gas flow rate）:0；離子傳輸管溫度（capillary temp）: 320 ℃。

1.3 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)采集通過賽默飛世爾U3000UPL 液相色譜串聯(lián)Q Exactive Focus Orbitrap 高分辨質(zhì)譜儀，并采用Thermofish Scientific 公司化合物分析軟件Compound Discoverer 3.0 進行定性分析，通過軟件內(nèi)中藥材數(shù)據(jù)庫及mZcloud 數(shù)據(jù)庫匹配可推測化合物的類型。

2 結(jié)果與分析

2.1 LC-MS 成分檢測

采用HPLC-HESI-HRMS 對水冬瓜根皮中的化學(xué)成分進行定性分析，（+）HESI-MS 和（?）HESIMS 的質(zhì)譜總離子圖（TIC），見圖1。

圖1 水冬瓜根皮中正離子（A）和負(fù)離子（B）模式的總離子圖Fig.1 Total ion current chromatogram in positive （A） and negative （B） ion mode of Toricellia Angulata （Harms） Hu

2.2 水冬瓜根皮甲醇提取物化學(xué)成分分析

通過HPLC-HESI-HRMS 檢測得到水冬瓜根皮中各化學(xué)成分的保留時間和HRMS 信息，并結(jié)合離子總圖、Compound Discoverer 3.0 數(shù)據(jù)庫及相關(guān)文獻數(shù)據(jù)對比進行化學(xué)成分推斷，水冬瓜根皮藥材中化學(xué)成分推斷結(jié)果見表1。

表1 水冬瓜根皮化學(xué)成分分析Table 1 Analysis on chemical compositions of Toricellia Angulata （Harms） Hu

2.3 化學(xué)成分的質(zhì)譜解析

續(xù)表 1

2.3.1 有機酸類化合物 從水冬瓜根皮甲醇提取物中共推斷出10 個有機酸類化合物，其中化合物1、2、3、4、5、6、7、8、9、10 分別為DL-馬來酸、檸檬酸、右旋奎寧酸、1-咖啡?？鼘幩帷惥G原酸A、壬二酸、鄰苯二甲酸單丁酯、（15Z）-9,12,13-三羥基-15-十八烯酸、十二碳二元酸、十二烷二酸2,2'-亞甲基雙（4-甲基-6-叔丁基苯酚），這10 個化合物結(jié)構(gòu)相似，含有酚羥基或羧基等，為有機酸類化合物。分析此類化合物的裂解規(guī)律時發(fā)現(xiàn)，化合物1 在負(fù)離子模式下，一級質(zhì)譜中準(zhǔn)分子離子峰為m/z[M-H]-為133.01329，在二級質(zhì)譜中，其準(zhǔn)分子離子峰丟失一分子CO2形成特征碎片離子m/z89.02328[M-CO2-H]-；化合物2 在負(fù)離子模式下，一級質(zhì)譜中準(zhǔn)分子離子峰為m/z[M-H]-為191.01930，在二級質(zhì)譜中，其準(zhǔn)分子離子峰丟失兩分子H2O 與一分子CO2形成特征碎片離子m/z111.00770[M-CO2-2H2O]-，這與文獻[28]報道檸檬酸MS/MS 裂解規(guī)律一致；化合物3 在負(fù)離子模式下，一級質(zhì)譜中準(zhǔn)分子離子峰為m/z[M-H]-為191.05556，在二級質(zhì)譜中，其準(zhǔn)分子離子峰脫去一分子 H2O 形成特征碎片離子m/z173.04520 [M-H2O-H]-；化合物4 在負(fù)離子模式下，一級質(zhì)譜中準(zhǔn)分子離子峰為m/z[M-H]-為353.08820，在二級質(zhì)譜中，其準(zhǔn)分子離子峰酯基斷開脫去結(jié)構(gòu)中右側(cè)一分子鄰二酚部分C9H6O3形成特征碎片離子m/z191.05562 [M-C9H6O3-H]-，又脫去一分子H2O 或脫去一分子HCHO 分別形成特征碎片 離 子m/z173.04503 [M-C9H6O3-H2O-H]-、m/z161.02371 [M-C9H6O3-HCHO-H]-；化合物5 在負(fù)離子模式下，一級質(zhì)譜中準(zhǔn)分子離子峰為m/z[M-H]-為515.12006，在二級質(zhì)譜中，其準(zhǔn)分子離子峰酯基斷開脫去結(jié)構(gòu)中右側(cè)一分子鄰二酚部分C9H6O3形成特征碎片離子m/z353.08835 [M-C9H6O3-H]-，其準(zhǔn)分子離子峰酯基斷開脫去結(jié)構(gòu)中左側(cè)與右側(cè)共兩分子鄰二酚部分C9H6O3形成特征碎片離子m/z191.05562 [M-2C9H6O3-H]-，這與文獻[29]報道異綠原酸A MS/MS 裂解規(guī)律一致；化合物6 在負(fù)離子模式下，一級質(zhì)譜中準(zhǔn)分子離子峰為m/z[M-H]-為187.09709，在二級質(zhì)譜中，其準(zhǔn)分子離子脫去一分子H2O 與一分子CO2或脫去一分子CO2或脫去一分子分別形成特征碎片離子m/z125.09621 [M-H2OCO2-H]-、m/z143.10704 [M-CO2-H]-、m/z159.87854[M-CO-H]-；化合物7 在負(fù)離子模式下，一級質(zhì)譜中準(zhǔn)分子離子峰為m/z[M-H]-為221.08171，在二級質(zhì)譜中，其準(zhǔn)分子離子脫去一分子CO2或脫去一分子CO 或脫去一分子HCOOH 或脫去一分子CH3（CH2）3COOH 分別形成特征碎片離子m/z177.09152 [MCO2-H]-、m/z193.08603 [M-CO-H]-、m/z175.07671[M-HCOOH-H]-、m/z121.02848 [M-CH3（ CH2）3COOH]-；化合物8 在負(fù)離子模式下，一級質(zhì)譜中準(zhǔn)分子離子峰為m/z[M-H]-為329.23376，在二級質(zhì)譜中，其準(zhǔn)分子離子脫去一分子CH3CH2CH=CHCH2CH2OH 或脫去一分子CH3（CH2）7COOH 分別形成特征碎片離子m/z229.14424 [M-CH3CH2CH=CH CH2CH2OH-H]-、m/z171.10197 [M-CH3（ CH2）7COOH-H]-；化合物9 在負(fù)離子模式下，一級質(zhì)譜中準(zhǔn)分子離子峰為m/z[M-H]-為229.14442，在二級質(zhì)譜中，其準(zhǔn)分子離子脫去一分子H2O 或脫去一分子H2O 與一分子CO2分別形成特征碎片離子m/z211.13370 [M-H2O-H]-、m/z167.14343 [M-H2OCO2-H]-；化合物10 在負(fù)離子模式下，一級質(zhì)譜中準(zhǔn)分子離子峰為m/z[M-H]-為339.23337，在二級質(zhì)譜中，其準(zhǔn)分子離子從兩個苯環(huán)連接處（C11H15O-CH2-C11H15O）裂解成相同的兩分子C12H18O，形成特征碎片離子m/z163.11212 [M-C12H18O]-。

2.3.2 生物堿類化合物 從水冬瓜根皮甲醇提取物中共推斷出4 個生物堿類化合物，其中化合物11、12、13、14 分別為腺苷、環(huán)（苯丙?；?脯氨酰）、N-[5-（4-氧代-3，4-二氫二嗪-1-基）-1H-苯并[d]咪唑-2-基]氨基甲酸甲酯、二甲十三烷嗎啉，這4 個化合物結(jié)構(gòu)相似，均為生物堿類化合物。分析此類化合物的裂解規(guī)律時發(fā)現(xiàn)，化合物11 在正離子模式下，一級質(zhì)譜中準(zhǔn)分子離子峰為m/z[M+H]+為268.10437，在二級質(zhì)譜中，其準(zhǔn)分子離子峰脫去糖鏈（C5H10O4）形成特征碎片離子m/z136.06204 [M-C5H10O4]+，符合腺苷的裂解規(guī)律；化合物12 在正離子模式下，一級質(zhì)譜中準(zhǔn)分子離子峰為m/z[M+H]+為245.12880，在二級質(zhì)譜中，其準(zhǔn)分子離子峰脫去一分子NH3或脫去一分子CO2分別形成特征碎片離子m/z227.11772[M-NH3]+或m/z203.11798 [M-CO2+H]+；化 合 物13 在正離子模式下，一級質(zhì)譜中準(zhǔn)分子離子峰為m/z[M+H]+為336.10820，在二級質(zhì)譜中，其準(zhǔn)分子離子峰脫去一分子CO2或脫去一分子CH3COONH2分別形成特征碎片離子m/z292.09766 [M-CO2+H]+、m/z260.09247 [M-CH3COONH2]+；化合物14 在正離子模式下，一級質(zhì)譜中準(zhǔn)分子離子峰為m/z[M+H]+為298.31061，在二級質(zhì)譜中，其準(zhǔn)分子離子峰脫去一分子CH3（CH2）11CH3后，N 環(huán)形成特征碎片離子m/z115.09944 [M-CH3（CH2）11CH3]+。

2.3.3 氨基酸類化合物 從水冬瓜根皮甲醇提取物中共推斷出1 個氨基酸類化合物，化合物15 為L-亮氨酸。分析此類化合物的裂解規(guī)律時發(fā)現(xiàn)，化合物15 在正離子模式下，一級質(zhì)譜中準(zhǔn)分子離子峰為m/z[M+H]+為132.10223，在二級質(zhì)譜中，其準(zhǔn)分子離子峰脫去一分子CO2形成特征碎片離子m/z86.09720[M-CO2+H]+，與文獻[30]報道L-亮氨酸的特征碎片離子m/z86.2 一致，符合L-亮氨酸的裂解規(guī)律。

2.3.4 苯丙素類化合物 從水冬瓜根皮甲醇提取物中共推斷出2 個苯丙素類化合物，其中化合物16、17 分別為甘油酸甲酯、肉桂醛，這2 個化合物結(jié)構(gòu)相似，均為苯丙素類化合物。分析此類化合物的裂解規(guī)律時發(fā)現(xiàn)，化合物16 在正離子模式下，一級質(zhì)譜中準(zhǔn)分子離子峰為m/z[M+H]+為193.08610，在二級質(zhì)譜中，其準(zhǔn)分子離子峰脫去一分子H2O 與一分子CO2形成特征碎片離子m/z131.04926 [M-CO2-H2O+H]+；化合物17 在正離子模式下，一級質(zhì)譜中準(zhǔn)分子離子峰為m/z[M+H]+為133.06503，在二級質(zhì)譜中，其準(zhǔn)分子離子峰脫去一分子CO 或脫去一分子甲醛形成特征碎片離子m/z105.07033 [M-CO+H]+、m/z103.05461 [M-HCHO+H]+。

2.3.5 酯類化合物 從水冬瓜根皮甲醇提取物中共推斷出2 個酯類化合物，其中化合物18、19 分別為三甲基三烯酸酯、己二酸二（2-乙基己基）酯，這2 個化合物結(jié)構(gòu)相似，均為酯類化合物。分析此類化合物的裂解規(guī)律時發(fā)現(xiàn)，化合物18 在正離子模式下，一級質(zhì)譜中準(zhǔn)分子離子峰為m/z[M+H]+為253.07085，在二級質(zhì)譜中，其準(zhǔn)分子離子峰脫去一分子H2O 與一分子CO 或脫去一分子乙酸或脫去兩分子乙酸分別形成特征碎片離子m/z207.02899 [M-COH2O+H]+、m/z193.04967 [M-CH3COOH+H]+、m/z133.02855 [M-2CH3COOH+H]+；化合物19 在正離子模式下，一級質(zhì)譜中準(zhǔn)分子離子峰為m/z[M+H]+為371.31570，在二級質(zhì)譜中，其準(zhǔn)分子離子峰脫去一分子CH3（CH2）3CH（CH2CH3）CH2OH 或脫去兩分子CH3（CH2）3CH（CH2CH3）CH2OH 分別形成特征碎片離子m/z241.18062 [M-CH3（CH2）3CH（ CH2CH3） CH2OH+H]+、m/z111.04444 [M-2CH3（CH2）3CH（CH2CH3）CH2OH+H]+。

2.3.6 萜類化合物 從水冬瓜根皮甲醇提取物中共推斷出2 個萜類化合物，其中化合物20、21 分別為斷氧化馬錢苷、馬兜鈴?fù)?，這2 個化合物結(jié)構(gòu)相似，均為萜類化合物。分析此類化合物的裂解規(guī)律時發(fā)現(xiàn)，化合物20 在負(fù)離子模式下，一級質(zhì)譜中準(zhǔn)分子離子峰為m/z[M-H]-為403.12503，在二級質(zhì)譜中，其準(zhǔn)分子離子峰脫去一分子CH3OH 形成特征碎片離子m/z371.09811 [M-CH3OH-H]-，其準(zhǔn)分子離子峰脫去醚鍵左側(cè)一分子C6H11O5形成特征碎片離子m/z241.07170 [M-C6H11O5]-，又失去一分子H2O 形成特征碎片離子m/z223.06068 [M-C6H11O5-H2O]-，接著又失去一分子CO2或一分子CH3OH，分別形成特征碎片離子m/z179.07065 [M-C6H11O5-CO2]-或m/z191.03514 [M-C6H11O5-CH3OH]-；化合物21 在正離子模式下，一級質(zhì)譜中準(zhǔn)分子離子峰為m/z[M+H]+為219.17458，在二級質(zhì)譜中，MS/MS 特征碎片離子m/z203.14403、m/z91.05507 與文獻[31]報道的m/z203、m/z91 相符，化合物21 為馬兜鈴?fù)?/p>

2.3.7 芳香含氧衍生物類化合物 從水冬瓜根皮甲醇提取物中共推斷出2 個芳香含氧衍生物類化合物，其中化合物22、23 分別為3,5-二叔丁基-4-羥基苯甲醛、二異丁基酞酸鹽，這2 個化合物結(jié)構(gòu)相似，均為芳香含氧衍生物類化合物。分析此類化合物的裂解規(guī)律時發(fā)現(xiàn)，化合物22 在正離子模式下，一級質(zhì)譜中準(zhǔn)分子離子峰為m/z[M+H]+為235.16948，在二級質(zhì)譜中，其準(zhǔn)分子離子峰脫去一分子H2O 或脫去一分子H2O 與一分子CO 或脫去兩分子CO 分別形成特征碎片離子m/z217.12384 [M-H2O+H]+、m/z189.03033 [M-H2O-CO+H]+、m/z179.10675 [M-2CO+H]+；化合物23 在正離子模式下，一級質(zhì)譜中準(zhǔn)分子離子峰為m/z[M+H]+為279.15936，在二級質(zhì)譜中，其準(zhǔn)分子離子峰脫去一分子CH（CH3）2CH2OH或脫去一分子CH（CH3）2CH2OH 與一分子CO 分別形成特征碎片離子m/z205.08472 [M-CH（CH3）2CH2OH+H]+、m/z149.02345 [M-CH（CH3）2CH2OHCO+H]+。

2.3.8 酰胺類化合物 從水冬瓜根皮甲醇提取物中共推斷出4 個酰胺類化合物，其中化合物24、25、26、27 分別為棕櫚基單乙醇酰胺、十六碳酰胺、硬脂酰胺、油酸乙酰胺，這4 個化合物結(jié)構(gòu)相似，均為酰胺類化合物。分析此類化合物的裂解規(guī)律時發(fā)現(xiàn)，化合物24 在正離子模式下，一級質(zhì)譜中準(zhǔn)分子離子峰為m/z[M+H]+為300.28992，在二級質(zhì)譜中，其準(zhǔn)分子離子峰脫去一分子H2O 或脫去一分子H2O 與一分子CO2分別形成特征碎片離子m/z282.27850[M-H2O+H]+、m/z238.06746 [M-H2O-CO2+H]+；化合物25 在正離子模式下，一級質(zhì)譜中準(zhǔn)分子離子峰為m/z[M+H]+為256.26370，在二級質(zhì)譜中，其準(zhǔn)分子離子峰脫去一分子CO 或脫去一分子H2O 與一分子CO 或脫去一分子CH3（CH2）5CH3或脫去一分子CH3（CH2）9CH3或脫去一分子CH3（CH2）11CH3分別形成特征碎片離子m/z228.13831 [M-CO+H]+、m/z210.03716 [M-H2O-CO+H]+、m/z155.05942 [MCH3（CH2）5CH3]+、m/z100.07642 [M-CH3（CH2）9CH3+H]+、m/z71.08627 [M-CH3（CH2）11CH3]+；化合物26 在正離子模式下，一級質(zhì)譜中準(zhǔn)分子離子峰為m/z[M+H]+為284.29514，在二級質(zhì)譜中，其準(zhǔn)分子離子峰脫去一分子CH3（CH2）12CH3或脫去一分子CH3（CH2）13CH3或脫去一分子CH3（CH2）14CH3分別形成特征碎片離子m/z85.10201 [M-CH3（CH2）12CH3]+、m/z72.04524 [M- CH3（CH2）13CH3+H]+、m/z57.07080 [M-CH3（CH2）14CH3]+；化合物27 在正離子模式下，一級質(zhì)譜中準(zhǔn)分子離子峰為m/z[M+H]+為310.31052，在二級質(zhì)譜中，其準(zhǔn)分子離子峰脫去一分子CH3（CH2）7CH=CHCH2CH3或脫去一分子CH3（ CH2）7CH=CH（ CH2）2CH3或 脫 去 一 分 子CH3（ CH2）7CH=CH（ CH2）5CH3或 脫 去 一 分 子CH3（CH2）7CH=CH（CH2）6CH3分別形成特征碎片離子m/z142.12238 [M-CH3（CH2）7CH=CHCH2CH3+H]+、m/z128.10721 [M-CH3（CH2）7CH=CH（CH2）2CH3+H]+、m/z85.05311 [M-CH3（CH2）7CH=CH（CH2）5CH3+H]+、m/z72.08159 [M-CH3（CH2）7CH=CH（CH2）6CH3+H]+。

2.3.9 其他類化合物 從水冬瓜根皮甲醇提取物中共推斷出9 個其他類化合物，其中化合物28、29、30、31、32、33、34、35、36 分別為十二烷基硫酸酯、十二烷基苯磺酸、Myristyl sulfate、磷酸三苯酯、磷酸三（2-丁氧基）乙酯、甘油磷酸-N-棕櫚酰乙醇胺、Citroflex A-4、Citroflex 4、1,2-環(huán)己烷二羧酸二異壬酯。分析此類化合物的裂解規(guī)律時發(fā)現(xiàn)，化合物28 在負(fù)離子模式下，一級質(zhì)譜中準(zhǔn)分子離子峰為m/z[M-H]-為265.14810，在二級質(zhì)譜中，其準(zhǔn)分子離子峰烴與氧斷開，脫去一分子H3C（CH2）10CH3形成特征碎片離子m/z96.95894 [M-H3C（CH2）10CH3]-；化合物29 在負(fù)離子模式下，一級質(zhì)譜中準(zhǔn)分子離子峰為m/z[M-H]-為325.18460，在二級質(zhì)譜中，其準(zhǔn)分子離子峰烴脫去一分子H3C（CH2）8CH3形成特征碎片離子m/z183.01149 [M-H3C（CH2）8CH3-H]-；化合物30 在負(fù)離子模式下，一級質(zhì)譜中準(zhǔn)分子離子峰為m/z[M-H]-為293.17953，在二級質(zhì)譜中，其準(zhǔn)分子離子峰烴脫去一分子H3C（CH2）12CH3形成特征碎片離子m/z96.95892 [M-H3C（CH2）12CH3-H]-；化合物31 在正離子模式下，一級質(zhì)譜中準(zhǔn)分子離子峰為m/z[M+H]+為327.07849，在二級質(zhì)譜中，其準(zhǔn)分子離子峰烴脫去一分子C6H5OH 形成特征碎片離子m/z233.03616 [M-C6H5OH+H]+；化合物32 在正離子模式下，一級質(zhì)譜中準(zhǔn)分子離子峰為m/z[M+H]+為399.25095，在二級質(zhì)譜中，其準(zhǔn)分子離子峰烴脫去三分子CH3（CH2）2CH3或脫去一分子CH3（CH2）2OCH2CH3或脫去兩分子CH3（CH2）2OCH2CH3分別形成特征碎片離子m/z225.08896 [M-3CH3（CH2）2CH3+H]+、m/z299.16177 [M-CH3（CH2）2OCH2CH3+H]+、m/z199.07320 [M-2CH3（CH2）2OCH2CH3+H]+；化合物33 在正離子模式下，一級質(zhì)譜中準(zhǔn)分子離子峰為m/z[M+H]+為454.29321，在二級質(zhì)譜中，其準(zhǔn)分子離子峰烴脫去一分子H2O 形成特征碎片離子m/z436.28110 [M-H2O+H]+；化合物34 在正離子模式下，一級質(zhì)譜中準(zhǔn)分子離子峰為m/z[M+H]+為403.23337，在二級質(zhì)譜中，其準(zhǔn)分子離子峰脫去一分子O（CH2）3CH3與丟失一分子（CH2）3CH3縮合成含二酮的五元環(huán)醚，形成特征碎片離子m/z273.09760[M-O（CH2）3CH3-（CH2）3CH3+H]+，其準(zhǔn)分子離子峰脫去兩分子丁基及氧O（CH2）3CH3形成特征碎片離子m/z259.15393 [M-2O（CH2）3CH3+H]+，其準(zhǔn)分子離子峰脫去三分子O（CH2）3CH3并補H 形成特征碎片離子m/z185.08092 [M-3O（CH2）3CH3+H]+；化合物35 在正離子模式下，一級質(zhì)譜中準(zhǔn)分子離子峰為m/z[M+H]+為361.22223，在二級質(zhì)譜中，其準(zhǔn)分子離子峰脫去兩分子丁基及O（CH2）3CH3形成特征碎片離子m/z213.07573 [M-2C4H10O+H]+，其準(zhǔn)分子離子峰脫去三分子丁基及O（CH2）3CH3形成特征碎片離子m/z139.00267 [M-3C4H10O+H]+；化合物36 在正離子模式下，一級質(zhì)譜中準(zhǔn)分子離子峰為m/z[M+H]+為425.36270，在二級質(zhì)譜中，其準(zhǔn)分子離子峰脫去一分子CH3CH（CH3）（CH2）6OH 形成特征碎片 離 子m/z281.21057 [M-CH3CH（CH3）（CH2）6OH+H]+。

3 結(jié)論與討論

預(yù)實驗過程中，比較正、負(fù)離子模式下總離子圖時，發(fā)現(xiàn)水冬瓜根皮中化學(xué)成分在正、負(fù)離子模式下均有較好的響應(yīng)值，可能與Toricellia AngulataOliv.var.intermedia（Harms） Hu 所含化學(xué)成分類型豐富相關(guān)，化學(xué)成分種類推斷結(jié)果表明其含有機酸類、生物堿類、氨基酸類、苯丙素類、酯類化、萜類、芳香含氧衍生物、酰胺及其他類化合物，研究結(jié)果證實了預(yù)實驗水冬瓜根皮中化學(xué)成分在正、負(fù)離子模式下均有較好的響應(yīng)值的原因。

課題組建立了水冬瓜根皮甲醇提取物的HPLCHESI-HRMS 快速分析方法，結(jié)合Thermofish Scientific公司化合物分析軟件Compound Discoverer 3.0，通過軟件內(nèi)中藥材數(shù)據(jù)庫及mZcloud 數(shù)據(jù)庫匹配及相關(guān)文獻數(shù)據(jù)，推測化合物的類型，初步推斷出水冬瓜根皮甲醇提取物中36 個化學(xué)成分，包括10 個有機酸類化合物，4 個生物堿類化合物，1 個氨基酸類化合物，2 個苯丙素類化合物，2 個酯類化合物，2 個萜類化合物，2 個芳香含氧衍生物類化合物，4 個酰胺類化合物，9 個其他類化合物。

本實驗采用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對黔產(chǎn)水冬瓜根皮中化學(xué)成分進行快速鑒別研究時，發(fā)現(xiàn)黔產(chǎn)水冬瓜根皮與文獻[7?10]湖北恩施自治州、云南麗江等大接骨丹藥材中成分呈現(xiàn)顯著性地域差異特征。Toricellia AngulataOliv.var.intermedia（Harms） Hu 化學(xué)成分的差異可能與植物生長的地理位置、土壤、溫度、水分、海拔高度等密切相關(guān)，導(dǎo)致Toricellia AngulataOliv.var.intermedia（Harms） Hu 植物體二次代謝產(chǎn)物差異性較大，相關(guān)研究有待進一步深入。