免疫組織化學(xué)和聚合酶鏈反應(yīng)檢測乳腺癌易患基因研究

高洪麗　張蓓　任永強(qiáng)

[摘要] 目的 研究免疫組織化學(xué)和聚合酶鏈反應(yīng)檢測乳腺癌易患基因。方法 方便選取該院2015年4月—2017年4月收治的40例乳腺癌患者的臨床資料進(jìn)行統(tǒng)計分析。結(jié)果 乳腺癌組患者的乳腺癌易患基因1表達(dá)顯著低于良性乳腺疾病組、健康對照組（F=31.027，P<0.05），Her2（F=27.012）、CK5/6（F=150.452）、EGFR（F=188.347）表達(dá)均顯著高于良性乳腺疾病組、健康對照組（P<0.05）；聚合酶鏈反應(yīng)檢測乳腺癌組患者乳腺癌易患基因1、CK5/6、EGFR陽性表達(dá)率87.5%（35/40）、42.5%（17/40）、45.0%（18/40）均顯著高于免疫組織化學(xué)檢測57.5%（23/40）、17.5%（7/40）、22.5%（9/40）（χ2=5.02，7.38，9.35，P<0.05），靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度均顯著高于免疫組織化學(xué)檢測（P<0.05）。結(jié)論 聚合酶鏈反應(yīng)檢測乳腺癌易患基因的效果較免疫組織化學(xué)好。

[關(guān)鍵詞] 免疫組織化學(xué)；聚合酶鏈反應(yīng)；乳腺癌易患基因

[中圖分類號] R737 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-0742（2017）08（a）-0012-03

[Abstracts] Objective This paper tries to study the immunohistochemistry and polymerase chain reaction in the detection of breast cancer susceptibility genes. Methods Convenient selection the clinical data of 40 cases of patients with breast cancer treated in this hospital from April 2015 to April 2017 were analyzed statistically. Results The breast cancer susceptibility gene 1 expression of the breast cancer group was significantly lower than the benign breast cancer group and healthy control group （F=31.027，P<0.05）； the Her2（F=27.012），CK5/6（F=150.452）， EGFR（F=188.347）expressions were significantly higher than the benign breast disease group and healthy control group （P<0.05）； The positive expression rates of breast cancer susceptibility gene 1， CK5/6， EGFR was 87.5% （35/40）， 42.5% （17/40）， 45.0% （18/40） respectively of the breast cancer group of the polymerase chain reaction detection， significantly higher than the immunohistochemistry detection of 57.5% （23/40）， 17.5% （7/40）， 22.5% （9/40） （χ2=5.02，7.38，9.35，P<0.05）， the sensitivity， specificity， accuracy were significantly higher than the immunohistochemistry detection （P<0.05）. Conclusion The effect of polymerase chain reaction in the detection of breast cancer susceptibility genes is better than immunohistochemistry.

[Key words] Immunohistochemistry； Polymerase chain reaction； Breast cancer susceptibility genes

乳腺癌屬于一種女性惡性腫瘤，在臨床極為常見，發(fā)病率較高，對患者的預(yù)后狀況造成了直接的影響。近年來，臨床日益關(guān)注和重視了乳腺癌易患基因1、人表皮生長因子受體2 （Her2）、細(xì)胞角蛋白5 /6（CK5/6）、表皮生長因子受體（EGFR），其將重要的科學(xué)依據(jù)提供給了臨床治療乳腺癌患者及判斷其預(yù)后的工作?，F(xiàn)階段，臨床采用了很多方法對乳腺癌易患基因進(jìn)行檢測，其中較為常用的為聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）和免疫組織化學(xué)檢測。為了將科學(xué)依據(jù)提供給乳腺癌患者的治療及預(yù)后，該研究對該院2015年4月—2017年4月收治的40例乳腺癌患者的臨床資料進(jìn)行了統(tǒng)計分析，比較了免疫組織化學(xué)和聚合酶鏈反應(yīng)檢測乳腺癌易患基因的效果，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

方便選取該院收治的40例乳腺癌患者，納入標(biāo)準(zhǔn)：所有患者均經(jīng)臨床表現(xiàn)、病理組織學(xué)檢查等確診為乳腺癌，均符合《中國常見惡性腫瘤診治規(guī)范》中乳腺癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)[1]；排除標(biāo)準(zhǔn)：將有精神疾病、免疫性疾病、器質(zhì)性疾病等患者排除在外。患者年齡27～62歲，平均（41.5±5.0）歲；體質(zhì)量39～72 kg，平均（49.1±3.8）kg。將這些患者作為乳腺癌組，另選取該院同期收治的40例良性乳腺疾病患者作為良性乳腺疾病組，患者年齡25～63歲，平均（40.8±5.4）歲；體質(zhì)量38～74 kg，平均（49.0±3.3）kg。另選取該院同期接收的40名健康體檢人員為健康對照組，年齡24～65歲，平均（41.1±5.5）歲；體質(zhì)量40～71 kg，平均（49.0±3.5）kg。3組人員的一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。endprint

1.2 方法

1.2.1 免疫組織化學(xué)檢測 取病理標(biāo)本將其固定下來，在此過程中將4%甲醛充分利用起來，組織脫水，石蠟包埋，染色過程中將蘇木精及彈力纖維充分利用起來，最后進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色。光學(xué)顯微鏡下觀察乳腺癌易患基因1、人表皮因子受體2（Her2）、細(xì)胞角蛋白5/6（CK5/6）、表皮生長因子受體（EGFR）等標(biāo)志物，抗體在細(xì)胞膜、細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)表達(dá)，陽性細(xì)胞評定標(biāo)準(zhǔn)為有黃色或棕黃色顆粒出現(xiàn)[2]，結(jié)果陽性的評定標(biāo)準(zhǔn)為同一切片內(nèi)陽性細(xì)胞數(shù)/同類細(xì)胞數(shù)×100%>10%[3]。

1.2.2 聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）檢測 將組織RNA提取出來，在液氮中放置組織，研磨成粉后在1 mL Trizol中放置50 g組織裂解，室溫下進(jìn)行5 min的靜置，將200 μL氯仿加入，進(jìn)行15 s的劇烈震蕩，充分混合，室溫下進(jìn)行5 min的靜置，4℃下以12 cm的半徑、12 000 r/min的轉(zhuǎn)速進(jìn)行15 min的離心，分離心后混合物為3組，向1.5 mL離心管中移動上層水相，將異丙酚加入，其和Trizol的比例為0.5 mL：1 mL，充分混勻，室溫下進(jìn)行10 min的靜置，4℃下以12 000 r/min的轉(zhuǎn)速進(jìn)行10 min的離心。在離心管側(cè)面及底部，RNA會有白色沉淀形成，將上清棄去，將75%乙醇加入其中，比例為1：1，成分混勻，4℃下以10 600 r/min的轉(zhuǎn)速進(jìn)行5 min的離心，將上清棄去，室溫下進(jìn)行10 min的靜置，干燥RNA沉淀，將焦炭酸二乙酯加入水溶解，在波長為260 nm處對核酸濃度進(jìn)行測定，在波長為280 nm處對蛋白質(zhì)濃度進(jìn)行測定，RNA提取成功的標(biāo)準(zhǔn)為核酸/蛋白質(zhì)在1.8～2.1之間，逆轉(zhuǎn)錄其為單鏈DNA。

1.3 統(tǒng)計方法

統(tǒng)計分析所得數(shù)據(jù)時采用SPSS 16.0統(tǒng)計學(xué)軟件，用（x±s）表示計量資料，用單因素方差分析多組計量資料，用SNK-q檢驗兩兩組間比較，用χ2檢驗計數(shù)資料比較，檢驗水準(zhǔn)α=0.05，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3組人員的乳腺癌易患基因1、Her2、CK5/6、EGFR表達(dá)比較

乳腺癌組患者的乳腺癌易患基因1表達(dá)顯著低于良性乳腺疾病組、健康對照組（P<0.05），Her2、CK5/6、EGFR表達(dá)均顯著高于良性乳腺疾病組、健康對照組（P<0.05），但良性乳腺疾病組和健康對照組人員的乳腺癌易患基因1、Her2、CK5/6、EGFR表達(dá)之間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），見表1。

2.2 兩種方法檢測乳腺癌組患者乳腺癌易患基因的陽性表達(dá)比較

聚合酶鏈反應(yīng)檢測乳腺癌組患者乳腺癌易患基因1、CK5/6、EGFR陽性表達(dá)率87.5%（35/40）、42.5%（17/40）、45.0%（18/40）均顯著高于免疫組織化學(xué)檢測57.5%（23/40）、17.5%（7/40）、22.5%（9/40）（P<0.05），但兩種方法檢測Her2陽性表達(dá)率52.5%（21/40）、47.5%（19/40）之間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），見表2。

2.3 兩種方法檢測乳腺癌組患者乳腺癌易患基因靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度比較

聚合酶鏈反應(yīng)檢測乳腺癌組患者乳腺癌易患基因1、CK5/6、EGFR的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度均顯著高于免疫組織化學(xué)檢測（P<0.05），但兩種方法檢測Her2的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度之間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），見表3。

3 討論

乳腺癌屬于一種女性惡性腫瘤，在臨床極為常見，7%～10%的全身各種惡性腫瘤為乳腺癌[4]，在婦女惡性腫瘤中位居第二位，僅次于子宮癌，對婦女健康造成了嚴(yán)重威脅。目前，臨床還沒有完全弄清楚乳腺癌的病因，但是患者有乳腺癌易患基因1、Her2、CK5 /6、EGFR存在，在疾病的進(jìn)展過程中發(fā)生了變化[4]?，F(xiàn)階段，臨床采用了很多方法對乳腺癌易患基因進(jìn)行檢測，其中較為常用的為PCR與免疫組織化學(xué)檢測。

免疫組織化學(xué)將免疫學(xué)基本原理抗原抗體反應(yīng)充分利用了起來，即抗原特異性結(jié)合抗體的原理，通過化學(xué)反應(yīng)顯色對抗體進(jìn)行標(biāo)記的顯色劑，如熒光素、金屬離子等，來將組織細(xì)胞內(nèi)抗原確定下來，如蛋白質(zhì)、多肽等，從而對其進(jìn)行定位、定量、定性，又稱免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)或免疫組織化學(xué)技術(shù)。免疫組織化學(xué)具有較為簡便的操作、較高的可行性、較為方便的結(jié)果讀取、較短的耗時、較低的費(fèi)用，在臨床大批量檢測中適用，但是觀察者主觀判斷及組織標(biāo)本處理極易對其造成影響，從而促進(jìn)結(jié)果偏差的產(chǎn)生[5-8]。PCR是一種體外酶促合成特異DNA片段方法，又稱特異性DNA序列體外引物定向酶促擴(kuò)增技術(shù)或無細(xì)胞分子克隆技術(shù)，一個周期的組成成分為高溫變性、適溫延伸等，循環(huán)進(jìn)行，以較快的速度擴(kuò)增目的DNA，具有較強(qiáng)的特異性、較高的靈敏度、較為簡便的操作、較短的耗時等優(yōu)勢[9-10]。

相關(guān)醫(yī)學(xué)對40例乳腺癌患者的臨床資料進(jìn)行了統(tǒng)計分析，結(jié)果表明，在乳腺癌易患基因的檢測中，免疫組織化學(xué)檢測的陽性表達(dá)率低于聚合酶連反應(yīng)檢測。該研究結(jié)果表明，乳腺癌組患者的乳腺癌易患基因1表達(dá)顯著低于良性乳腺疾病組、健康對照組（F=31.027，P<0.05），Her2（F=27.012）、CK5/6（F=150.452）、EGFR（F=188.347）表達(dá)均顯著高于良性乳腺疾病組、健康對照組（P<0.05）；聚合酶鏈反應(yīng)檢測乳腺癌組患者乳腺癌易患基因1、CK5/6、EGFR陽性表達(dá)率87.5%（35/40）、42.5%（17/40）、45.0%（18/40）均顯著高于免疫組織化學(xué)檢測57.5%（23/40）、17.5%（7/40）、22.5%（9/40）（χ2=5.02，7.38，9.35，P<0.05），靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度均顯著高于免疫組織化學(xué)檢測（P<0.05），和上述相關(guān)醫(yī)學(xué)研究結(jié)果一致。

綜上所述，聚合酶鏈反應(yīng)檢測乳腺癌易患基因的效果較免疫組織化學(xué)好，值得推廣。

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（收稿日期：2017-05-07）endprint