復(fù)方枸櫞酸噴托維林顆粒中薄荷腦和麝香草酚的定性鑒別和含量測(cè)定

王發(fā)++李繼++劉芳

[摘要] 目的 建立復(fù)方枸櫞酸噴托維林顆粒中薄荷腦和麝香草酚的定性鑒別和含量測(cè)定方法。方法 采用薄層色譜法對(duì)薄荷腦和麝香草酚進(jìn)行定性鑒別，采用GC色譜法對(duì)薄荷腦和麝香草酚進(jìn)行含量測(cè)定。色譜條件：使用DB-WAX（30 m×0.32 mm×0.25 μm）毛細(xì)柱，F(xiàn)ID檢測(cè)器，進(jìn)樣口溫度230℃，檢測(cè)器溫度250℃。結(jié)果 薄層鑒別斑點(diǎn)清晰，陰性對(duì)照無干擾。在選定的色譜條件下，兩種物質(zhì)分離良好，薄荷腦的回歸方程為y = 2681.10x-10.81（r = 1.00），平均回收率為98.0%（n=6，RSD=2.3%），線性范圍為：0.016～1.55 g/L；麝香草酚的回歸方程為y =2762.00x-6.64（r = 1.00），平均回收率為100.4%（n=6，RSD=1.5%），線性范圍為：0.010～1.00 g/L。三批樣品中兩種組分的含量分別為0.13 mg/g和0.096 mg/g。結(jié)論 該方法簡(jiǎn)單準(zhǔn)確，可用于該制劑中的薄荷腦和麝香草酚的定性鑒別和含量測(cè)定。

[關(guān)鍵詞] 復(fù)方枸櫞酸噴托維林顆粒；薄荷腦；麝香草酚；薄層色譜法；氣相色譜法

[中圖分類號(hào)] R92 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2017）04（c）-0134-04

[Abstract] Objective To establish a method of qualitative identification and content determination of menthol and thymol in Compound Pentoxyverine Citrate Granules. Methods TLC was applied for qualitative of menthol and thymol； GC was used for quantitative determination of menthol and thymol. A DB-WAX column （30 m×0.32 mm×0.25 μm） was used. The inlet temperature was 230℃ and the FID detector temperature was 250℃. Results TLC spots were clear and well separated， there was no interference for negative sample. A good resolution was obtained by this method between the peaks of menthol and thymol. The linearity equation of menthol was y =2681.10x -10.81 （r = 1.00）， the average recovery was 98.0% （n=6， RSD =2.3%）， and the linear range was 0.016-1.55 g/L. The linearity equation of thymol was y = 2762.00x-6.64 （r =1.00）， the average recovery was 100.4% （n=6， RSD =1.5%）， and the linear range was 0.010-1.00 g/L. The average contents of 3 batches of samples were 0.13 mg/g and 0.096 mg/g. Conclusion The method was simple and accurate， which can be used for qualitative identification and content determination of menthol and thymol in Compound Pentoxyverine Citrate Granules.

[Key words] Compound Pentoxyverine Citrate Granules； Menthol； Thymol； TLC； GC

復(fù)方枸櫞酸噴托維林顆粒是由枸櫞酸噴托維林、鹽酸麻黃堿、枸櫞酸、薄荷腦（0.15 mg/g）、麝香草酚（0.10 mg/g）和一些輔料組成的復(fù)方制劑。臨床用于上呼吸道感染等引起的咳嗽、咯痰。方中薄荷腦為薄荷油中提取的一種飽和環(huán)狀醇，具有芳香性，主要用于皮膚或黏膜產(chǎn)生清涼感，以減輕不適及疼痛。麝香草酚具有殺菌作用，能促進(jìn)氣管纖毛運(yùn)動(dòng)，有利于氣管黏液的分泌，易起祛痰作用?，F(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)[1]202-203采用容量法只對(duì)制劑中枸櫞酸噴托維林的量進(jìn)行了控制，并未對(duì)薄荷腦和麝香草酚進(jìn)行控制。本文參考相關(guān)文獻(xiàn)[2-20]，采用TLC法對(duì)制劑中薄荷腦和麝香草酚進(jìn)行定性鑒別，采用GC法進(jìn)行定量分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，可用于該品種的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

6890N型氣相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司），AE-240型電子分析天平（瑞士梅特勒公司）。復(fù)方枸櫞酸噴托維林顆粒（陜西興邦藥業(yè)有限公司，批號(hào)：140401，140402，140403）；薄荷腦和麝香草酚對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110728-200506和100508-200902），無水乙醇，環(huán)己烷，乙酸乙酯，香草醛，硫酸均為分析純，水為高純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄荷腦和麝香草酚鑒別

取本品20 g，加水200 mL，照揮發(fā)油測(cè)定法試驗(yàn)（《中國(guó)藥典》2015年版四部通則2204） ，自測(cè)定器上端加水使充滿刻度部分，并溢流入燒瓶為止，加環(huán)己烷3 mL，連接回流冷凝管，加熱保持微沸1 h，放冷，取環(huán)己烷層作為供試品溶液。另取薄荷腦和麝香草酚對(duì)照品適量，用無水乙醇制成每1 mL含薄荷腦1 mg、麝香草酚0.6 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。吸取上述溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯（17︰3）為展開劑，展開，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品溶液與對(duì)照品溶液在相同位置顯示顏色一致的斑點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示該方法分離效果良好，斑點(diǎn)清晰，陰性樣品無干擾，結(jié)果見圖1。

2.2 薄荷腦和麝香草酚含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件

采用Aglient DB-WAX毛細(xì)管色譜柱（30 m×0.32 mm×0.25 μm），程序升溫：起始溫度160℃，維持5 min，再以每分鐘30℃的速率升溫至220℃，維持10 min。進(jìn)樣口溫度230℃，檢測(cè)器溫度250℃，分流比5︰1，進(jìn)樣量1 μL。

2.2.2 溶液的制備

2.2.2.1 對(duì)照品溶液制備 精密稱取薄荷腦對(duì)照品77.52 mg、麝香草酚50.24 mg同置50 mL量瓶中，用環(huán)己烷溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備液。再精密量取對(duì)照品貯備液5 mL，置50 mL量瓶中，用環(huán)己烷稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.2.2 供試品溶液制備 取供試品10 g，置500 mL燒瓶中，加水200 mL，照揮發(fā)油測(cè)定法（《中國(guó)藥典》2015年版四部通則2204），自測(cè)定器上端加水使充滿刻度部分，并溢流入燒瓶為止，加環(huán)己烷5 mL，連接回流冷凝管，加熱保持微沸1 h，放冷，置鋪有無水硫酸鈉的濾紙濾過，以適量環(huán)己烷分次洗滌揮發(fā)油測(cè)定器及濾器，洗滌液并入同一10 mL量瓶中，加環(huán)己烷稀釋至刻度，搖勻，即得。同法制備不含薄荷腦和麝香草酚的陰性對(duì)照品溶液。

2.2.3 專屬性試驗(yàn)

分別精密量取上述3種溶液各1 μL，照“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄色譜圖。結(jié)果顯示在此條件下，薄荷腦和麝香草酚分離良好，方中其他組分和輔料無干擾。見圖2。

2.2.4 線性及范圍

精密量取對(duì)照品貯備液適量，用環(huán)己烷逐級(jí)稀釋，得薄荷腦濃度分別為0.015 50、0.031 01、0.1550、0.3101、1.5504 g/L；麝香草酚濃度分別為：0.010 05、0.020 10、0.1005、0.2010、1.0048 g/L的混合對(duì)照品溶液。照“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，以峰面積y對(duì)質(zhì)量濃度x作線性回歸，薄荷腦和麝香草酚線性方程分別為：

y = 2681.10x-10.81（r =1.00），線性范圍為0.016～1.55 g/L。

y = 2762.00x-6.64（r =1.00），線性范圍為0.010～1.00 g/L。

2.2.5 精密度試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液，照“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件，重復(fù)進(jìn)樣6次，結(jié)果薄荷腦峰面積RSD為0.81%，麝香草酚峰面積RSD為1.18%。

2.2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取批號(hào)140403的供試品，按“2.2.2.2”項(xiàng)下方法制備6份供試品溶液，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。薄荷腦含量均值為0.14 mg/g，RSD為1.7%；麝香草酚含量均值為0.098 mg/g，RSD為1.1%。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一份供試品溶液，分別于0、1、4、8、10 h，照“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件下進(jìn)樣分析，結(jié)果表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.8 回收率試驗(yàn)

稱取陰性樣品約10 g，置500 mL燒瓶中，加水200 mL，再精密加入對(duì)照品貯備液1 mL，按“2.2.2.2”項(xiàng)下方法制備加樣回收溶液，同法制備6份，依法測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1和表2。

2.2.9 樣品測(cè)定

取本品約10 g，精密稱定，照“2.2.2.2”項(xiàng)下方法制備測(cè)定薄荷腦和麝香草酚的量。結(jié)果見表3。

3 討論

3.1 TLC鑒別條件優(yōu)化

供試品溶液提取方法考察了用石油醚（30～60℃）超聲提取和用揮發(fā)油提取器提取2種方法，結(jié)果表明，用揮發(fā)油提取器制備的供試品溶液，無其他組分斑點(diǎn)干擾，斑點(diǎn)清晰，分離效果好，同時(shí)具有使用的有機(jī)溶劑少，對(duì)操作人員和環(huán)境影響小的優(yōu)點(diǎn)。

3.2 GC色譜條件的優(yōu)化

在實(shí)驗(yàn)中，比較了不同極性的色譜柱。如中等極性的DB-624和強(qiáng)極性的DB-WAX柱，結(jié)果DB-WAX柱分離效果最好。通過調(diào)整柱溫，首先在較低的柱溫160℃保持5 min，使薄荷腦和樣品中未知物達(dá)到基線分離，然后以較高的升溫速率使柱溫達(dá)到220℃并保持10 min，使麝香草酚和其他物質(zhì)盡快流出，縮短進(jìn)樣分析時(shí)間，以提高工作效率。

3.3 樣品測(cè)定結(jié)果分析

從3批樣品檢測(cè)結(jié)果看，麝香草酚的含量在標(biāo)示量的95%～98%之間，薄荷腦的含量在標(biāo)示量的85%～91%之間。分析原因可能為：本品的生產(chǎn)工藝為將其他組分制粒后，再將薄荷腦與麝香草酚的乙醇溶液噴灑于上述顆粒上，混勻，分裝，因薄荷腦和麝香草酚具有較強(qiáng)的揮發(fā)性，在此過程中有損失。目前現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)未對(duì)薄荷腦與麝香草酚進(jìn)行控制，因此有必要對(duì)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行提高。

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（收稿日期：2017-01-14 本文編輯：王 麗）