頂空氣相色譜法同時(shí)測(cè)定甲苯磺酸妥舒沙星原料藥中6種有機(jī)溶劑的殘留量

章 為，李文波，李曉燕，王偉姣，譚桂山（.湖南省藥品檢驗(yàn)研究院，長(zhǎng)沙 4000；.中南大學(xué)湘雅藥學(xué)院，長(zhǎng)沙 400；.中南大學(xué)湘雅三醫(yī)院，長(zhǎng)沙 400）

頂空氣相色譜法同時(shí)測(cè)定甲苯磺酸妥舒沙星原料藥中6種有機(jī)溶劑的殘留量

章 為1，2＊，李文波3，李曉燕1，王偉姣1，譚桂山2（1.湖南省藥品檢驗(yàn)研究院，長(zhǎng)沙 410001；2.中南大學(xué)湘雅藥學(xué)院，長(zhǎng)沙 410013；3.中南大學(xué)湘雅三醫(yī)院，長(zhǎng)沙 410013）

目的：建立同時(shí)測(cè)定甲苯磺酸妥舒沙星原料藥中甲醇、乙醇、二氯甲烷、正己烷、四氫呋喃和苯等有機(jī)溶劑殘留量的方法。方法：采用頂空氣相色譜法。色譜柱為以6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷（DB-624）為固定液的毛細(xì)管柱，程序升溫，進(jìn)樣口溫度為180℃，檢測(cè)器為氫火焰離子化檢測(cè)器，溫度為300℃，載氣為高純氮?dú)?，載氣流速為1.5 mL/min，分流比為10∶1，頂空平衡溫度為100℃，平衡時(shí)間為40 min，頂空瓶裝樣量為10 mL，頂空進(jìn)樣量為1 mL。結(jié)果：甲醇、乙醇、二氯甲烷、正己烷、四氫呋喃和苯檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍分別為178.3～1 782.7 μg/mL（r＝0.999 1）、301.2～3 012.1 μg/mL（r＝0.999 7）、33.81～338.10 μg/mL（r＝0.999 3）、18.02～180.22 μg/mL（r＝0.999 1）、43.26～432.58 μg/mL（r＝0.999 1）、0.126 8～1.268 1 μg/mL（r＝0.999 1）；定量限分別為0.31、3.00、0.67、0.02、0.005、0.10μg/mL，檢測(cè)限分別為0.15、1.51、0.22、0.01、0.001、0.05μg/mL；精密度試驗(yàn)的RSD≤3.1%；穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗(yàn)中甲醇、正己烷的RSD≤5%；加樣回收率分別為93.72%～102.20%（RSD＝3.1%，n＝9）、90.10%～101.79%（RSD＝4.0%，n＝9）、97.07%～103.11%（RSD＝2.0%，n＝9）、92.38%～103.83%（RSD＝3.9%，n＝9）、95.44%～103.62%（RSD＝2.8%，n＝9）、94.00%～104.73%（RSD＝4.1%，n＝9）。結(jié)論：該方法快速、靈敏、準(zhǔn)確，適用于甲苯磺酸妥舒沙星原料藥中甲醇、乙醇、二氯甲烷、正己烷、四氫呋喃和苯等有機(jī)溶劑殘留量的同時(shí)測(cè)定。

甲苯磺酸妥舒沙星原料藥；氣相色譜法；頂空進(jìn)樣；有機(jī)溶劑；殘留量

1 材料

1.1 儀器

GC-2010 PLUS型氣相色譜儀，包括AOC-5000型自動(dòng)頂空進(jìn)樣器、氫火焰離子化檢測(cè)器（日本Shimadzu公司）；XS205DU型十萬(wàn)分之一電子分析天平（瑞士Mettler-Toledo公司）；CSR-1-05型實(shí)驗(yàn)室超純水機(jī)（北京愛(ài)思泰爾技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司）。

1.2 藥品與試劑

甲苯磺酸妥舒沙星原料藥（湖南天地恒一制藥有限公司，批號(hào)：141201、141202、141203）；甲醇對(duì)照品（美國(guó)Burdick＆Jackson公司，批號(hào)：Q6CG1H，純度：99.9%）；四氫呋喃對(duì)照品（批號(hào)：I773601 515，純度：99.9%）、正己烷對(duì)照品（批號(hào)：K44699691 329，純度：98.0%）均購(gòu)自美國(guó)Merk公司；乙醇對(duì)照品（批號(hào)：20140823，純度：99.7%）、二氯甲烷對(duì)照品（批號(hào)：20140617，純度：99.5%）、苯對(duì)照品（批號(hào)：20120516，純度：99.5%）均購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；N，N-二甲基甲酰胺（DMF）為色譜純，其余試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：以6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷（DB-624）為固定液的毛細(xì)管柱（30 m×0.54 mm，3.0 μm）；程序升溫：初始溫度60℃，保持10 min，以50℃/min升溫至250℃，保持15 min；進(jìn)樣口溫度：180℃；檢測(cè)器：氫火焰離子化檢測(cè)器；溫度：300℃；載氣：高純氮?dú)猓惠d氣流速：1.5 mL/min；分流比：10∶1；頂空平衡溫度：100℃；平衡時(shí)間：40 min；頂空瓶裝樣量：10 mL；頂空進(jìn)樣量：1 mL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 混合對(duì)照品溶液 精密稱取甲醇、乙醇、二氯甲烷、正己烷、四氫呋喃和苯對(duì)照品各適量，置于100 mL量瓶中，加DMF溶解并定容，搖勻，制成每1 mL約含甲醇900 μg、乙醇1 500 μg、二氯甲烷180 μg、正己烷87 μg、四氫呋喃216 μg、苯0.6 μg的混合對(duì)照品溶液。精密量取上述溶液10 mL，置于頂空瓶中，密封。

2.2.2 供試品溶液 取本品適量，精密稱定，加DMF溶解并定容，搖勻，制成每1 mL含0.3 g的供試品溶液。精密量取上述溶液10 mL，置于頂空瓶中，密封。

2.2.3 空白對(duì)照溶液 精密量取DMF 10 mL作為空白對(duì)照溶液，置于頂空瓶中，密封。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

取“2.2”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液、供試品溶液、空白對(duì)照溶液各適量，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜，詳見(jiàn)圖1。由圖1可知，在該色譜條件下，各成分均能達(dá)到基線分離，分離度＞1.5，理論板數(shù)以甲醇峰計(jì)≥10 000，保留時(shí)間為2.66 min。結(jié)果表明，其他成分對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。

圖1 氣相色譜圖Fig 1 GC chromatograms

2.4 線性關(guān)系考察

取“2.2.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液適量，加DMF稀釋制備甲醇的質(zhì)量濃度分別為178.3、534.8、891.4、1 247.9、1 782.7μg/mL，乙醇的質(zhì)量濃度分別為301.2、903.6、1 506.1、2 108.5、3 012.1μg/mL，二氯甲烷的質(zhì)量濃度分別為33.81、101.43、169.05、236.67、338.10μg/mL，正己烷質(zhì)量濃度分別為18.02、54.06、90.10、126.14、180.22 μg/mL，四氫呋喃質(zhì)量濃度分別43.26、129.78、216.30、302.82、432.58μg/mL，苯質(zhì)量濃度分別為0.126 8、0.380 4、0.634 0、0.887 6、1.268 1μg/mL的系列混合對(duì)照品溶液。取上述混合對(duì)照品溶液適量，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以待測(cè)成分質(zhì)量濃度（x，μg/mL）為橫坐標(biāo)、峰面積（y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，各殘留溶劑的回歸方程與線性范圍見(jiàn)表1。

表1 回歸方程與線性范圍Tab 1 Regressive equations and linear ranges

2.5 定量限與檢測(cè)限考察

取“2.2.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液適量，倍比稀釋，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，記錄峰面積。當(dāng)信噪比為10∶1時(shí)，得定量限（LOQ）；當(dāng)信噪比為3∶1時(shí)，得檢測(cè)限（LOD）。結(jié)果，甲醇、乙醇、二氯甲烷、正己烷、四氫呋喃、苯的LOQ分別為0.31、3.00、0.67、0.02、0.005、0.10μg/mL（n＝6）；LOD分別為0.15、1.51、0.22、0.01、0.001、0.05μg/mL（n＝6）。

2.6 精密度試驗(yàn)

取“2.2.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液適量，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果，甲醇、乙醇、二氯甲烷、正己烷、四氫呋喃和苯峰面積的RSD分別為1.0%、1.2%、1.8%、2.0%、1.9%、3.1%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液（批號(hào)：141201）適量，分別于室溫下放置0、1、2、4、6、8 h時(shí)按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果，樣品中僅有微量甲醇和正己烷殘留（≤0.14%），其他成分均未檢出；甲醇峰面積的RSD＝2.8%（n＝6），正己烷峰面積的RSD＝2.9%（n＝6），表明供試品溶液在室溫下放置8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

取樣品（批號(hào)：141201）適量，共6份，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算平均含量。結(jié)果，樣品中僅有微量甲醇和正己烷殘留（≤0.14%），其他成分均未檢出；甲醇峰面積的RSD＝4.5%（n＝6），正己烷峰面積的RSD＝5.0%（n＝6），表明本方法重復(fù)性良好。

2.9 加樣回收率試驗(yàn)

取樣品（批號(hào)：141201）適量，共9份，精密稱定，各置于20 mL量瓶中，分別加入一定質(zhì)量的甲醇、乙醇、二氯甲烷、正己烷、四氫呋喃和苯對(duì)照品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算加樣回收率[10]，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）Tab 2 Results of recovery test（n＝9）

續(xù)表2Continued tab 2

2.10 樣品有機(jī)溶劑殘留量測(cè)定

取3批樣品（批號(hào)：141201、141202、141203）各適量，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并以外標(biāo)法計(jì)算甲醇、乙醇、二氯甲烷、正己烷、四氫呋喃和苯的殘留量，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 樣品有機(jī)溶劑殘留量測(cè)定結(jié)果（n＝4，%）Tab 4 Results of residual determination of samples（n＝4，%）

3 討論

3.1 色譜柱的選擇

本試驗(yàn)分別考察了PEG-20M（30 m×0.32 mm，0.25 μm）、DB-624（30 m×0.54 mm，3.0 μm）、HP-5（30 m× 0.32 mm，0.25 μm）3種氣相色譜柱。結(jié)果，采用PEG-20M氣相色譜柱進(jìn)行測(cè)定時(shí)，乙醇、二氯甲烷與正己烷色譜峰無(wú)法達(dá)到基線分離；采用HP-5氣相色譜柱進(jìn)行測(cè)定時(shí)，二氯甲烷與正己烷色譜峰的分離度無(wú)法達(dá)到要求；采用DB-624氣相色譜柱進(jìn)行測(cè)定時(shí)，各有機(jī)溶劑均能達(dá)到有效分離。因此，選擇DB-624為本試驗(yàn)的氣相色譜柱。

3.2 溶劑的選擇

甲苯磺酸妥舒沙星易溶于DMF，微溶于甲醇，極微溶解于乙酸乙酯、乙醇、丙酮、水，幾乎不溶于氯仿或乙醚[1]，且頂空氣相色譜法常用溶劑為水、DMF、二甲基亞砜，故選擇DMF作為本試驗(yàn)的溶劑。

3.3 殘留溶劑限度的確定

參考2015年版《中國(guó)藥典》（四部）“通則0861”和人用藥品注冊(cè)技術(shù)要求國(guó)際協(xié)調(diào)會(huì)有關(guān)規(guī)定，建議制訂各溶劑的檢測(cè)限為：甲醇≤0.3%、乙醇≤0.5%、二氯甲烷≤0.06%、正己烷≤0.029%、四氫呋喃≤0.072‰、苯≤0.002‰。本試驗(yàn)中的方法檢測(cè)限都遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于上述限度，3批樣品檢驗(yàn)結(jié)果均符合要求。

綜上所述，本方法快速、靈敏、準(zhǔn)確，適用于甲苯磺酸妥舒沙星原料藥中甲醇、乙醇、二氯甲烷、正己烷、四氫呋喃和苯等有機(jī)溶劑殘留量的同時(shí)測(cè)定。

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（編輯：劉 柳）

Simultaneous Determination of 6 Organic Solvents in Tosufloxacin Tosylate by Headspace GC

ZHANG Wei1，2，LI Wenbo3，LI Xiaoyan1，WANG Weijiao1，TAN Guishan2（1.Hunan Institute for Drug Control，Changsha 410001，China；2.Xiangya School of Pharmaceutical Sciences，Central South University，Changsha 410013，China；3.Third Xiangya Hospital，Central South University，Changsha 410013，China）

OBJECTIVE：To establish a method for the residual simultaneous determination of methanol，alcohol，dichloromethane，n-hexane，tetrahydrofuran and benzene in tosufloxacin tosylat.METHODS：Headspace GC was performed on the capillary column with 6%cyanopropylphenyl-94%dimethylpolysiloxane（DB-624）as fixative lipid，temperature programmed，the inlet temperature was 180℃，detector was flame ionization detector with temperature of 300℃，carrier gas was high purity N2at a flow rate of 1.5 mL/min，split ratio was 10∶1，headspace equilibrium temperature was 100℃，equilibrium time was 40 min，headspace sample volume was 10 mL，and the headspace sample volume was 1 mL.RESULTS：The linear range was 178.3-1 782.7 μg/mL for methanol（r＝0.999 1），301.2-3 012.1 μg/mL for alcohol（r＝0.999 7），33.81-338.10 μg/mL for dichloromethane（r＝0.999 3），18.02-180.22 μg/mL for n-hexane（r＝0.999 1），43.26-432.58 μg/mL for tetrahydrofuran（r＝0.999 1）and 0.126 8-1.268 1 μg/mL for benzene（r＝0.999 1）；limits of quantification were 0.31，3.00，0.67，0.02，0.005，0.10μg/mL，limits of detection were 0.15，1.51，0.22，0.01，0.001，0.05μg/mL；RSD of precision test was no higher than 3.1%；RSDs of methanol and n-hexane in stabili-ty and reproducibility tests were no higher than 5%；recoveries were 93.72%-102.20%（RSD＝3.1%，n＝9），90.10%-101.79%（RSD＝4.0%，n＝9），97.07%-103.11%（RSD＝2.0%，n＝9），92.38%-103.83%（RSD＝3.9%，n＝9），95.44%-103.62%（RSD＝2.8%，n＝9），and 94.00%-104.73%（RSD＝4.1%，n＝9）.CONCLUSIONS：The method is rapid，sensitive，accurate，and suitable for the residual determination of methanol，alcohol，dichloromethane，n-hexane，tetrahydrofuran and benzene in tosufloxacin tosylat.

Tosufloxacin tosylate；Gas chromatography；Headspace sampling；Organic solvent；Residual甲苯磺酸妥舒沙星（Tosufloxacin tosylate）原料藥是日本富山化學(xué)工業(yè)株式會(huì)社于1990年開(kāi)發(fā)上市的氟喹諾酮類抗菌藥，對(duì)革蘭氏陰性菌、革蘭氏陽(yáng)性菌和厭氧菌均有很好的抗菌作用。臨床常用于呼吸道、尿路、膽道、皮膚軟組織、五官科感染的治療[1-4]。該藥在生產(chǎn)過(guò)程中采用了甲醇、乙醇、二氯甲烷、正己烷、四氫呋喃和苯等有機(jī)溶劑。已有文獻(xiàn)報(bào)道了甲苯磺酸妥舒沙星制劑中相關(guān)含量的測(cè)定[5-9]，但尚未見(jiàn)有關(guān)甲苯磺酸妥舒沙星原料藥中有機(jī)溶劑殘留量檢測(cè)的報(bào)道。為了更好地控制該制劑的質(zhì)量，筆者根據(jù)2015年版《中國(guó)藥典》（四部）中殘留溶劑測(cè)定法[10]以及人用藥品注冊(cè)技術(shù)要求國(guó)際協(xié)調(diào)會(huì)有關(guān)規(guī)定[11]，首次采用頂空氣相色譜法測(cè)定甲苯磺酸妥舒沙星原料藥中甲醇、乙醇、二氯甲烷、正己烷、四氫呋喃和苯等有機(jī)溶劑的殘留量。

R927.2

A

1001-0408（2017）06-0847-04

2016-06-26

2016-12-11）

＊副主任藥師，博士研究生。研究方向：藥品檢驗(yàn)。E-mail：Zw5890@qq.com

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.06.35