HPLC法測定洛索洛芬銀乳膏中洛索洛芬銀的含量

沈一唯，鄢 寒，黃月英，石曉晴，卞 ?。?.解放軍第411醫(yī)院藥學科，上海 200434；2.江西中醫(yī)藥大學藥學院，南昌 330004）

HPLC法測定洛索洛芬銀乳膏中洛索洛芬銀的含量

沈一唯1，2＊，鄢 寒1，2，黃月英1，2，石曉晴1，2，卞 俊1#（1.解放軍第411醫(yī)院藥學科，上海 200434；2.江西中醫(yī)藥大學藥學院，南昌 330004）

目的：建立測定洛索洛芬銀乳膏中洛索洛芬銀含量的方法，為該制劑的質量控制提供參考。方法：采用高效液相色譜法。色譜柱為Diamonsil C18，流動相為甲醇-水-冰醋酸-三乙胺（55∶45∶0.1∶0.1，V/V/V/V），流速為1.0 mL/min，檢測波長為223 nm，柱溫為30℃，進樣量為20 μL。結果：洛索洛芬銀檢測質量濃度線性范圍為6.53～130.7 μg/mL（r＝0.999 9）；定量限為0.253 μg/mL，檢測限為0.076 μg/mL；精密度、穩(wěn)定性、重復性試驗的RSD＜2%；加樣回收率為96.79%～103.68%（RSD＝2.23%，n＝9）。結論：該方法操作方便、結果準確、重復性好，可用于洛索洛芬銀乳膏中洛索洛芬銀的含量測定。

洛索洛芬銀乳膏；洛索洛芬銀；高效液相色譜法；含量測定

燒傷是戰(zhàn)時及日常生活中常見的機體損傷，是由于物理、化學、放射性等因素造成的復雜的外傷性疾患[1]。目前，外用藥在燒傷中占有十分突出的作用，臨床上常用磺胺嘧啶銀霜治療燒傷患者[2-4]，具有良好的抗菌消炎作用，但該藥品的收斂作用較弱，更沒有止痛作用[5-6]。解放軍第411醫(yī)院（以下簡稱“我院”）自制的洛索洛芬銀乳膏，具有洛索洛芬的鎮(zhèn)痛、消炎、解熱作用[7-8]和銀離子的抗菌消炎、收斂、減少滲出液的作用[9-11]；在控制燒傷感染的同時，又能消炎、鎮(zhèn)痛、解熱，控制燒傷患者創(chuàng)傷的惡化，達到更有效治療燒傷的目的。鑒于目前該制劑還未建立其含量測定方法，為更好地控制該制劑的質量，達到用藥有效、安全的目的，筆者參照《日本藥典》[12]中洛索洛芬鈉及相關文獻[13-14]中洛索洛芬鈉制劑的測定方法，建立了高效液相色譜法（HPLC）測定該制劑中洛索洛芬銀含量的方法，以期為該制劑的質量控制提供參考。

1 材料

1.1 儀器

1525型HPLC儀，包括2487型紫外檢測器、Breeze色譜工作站（美國Waters公司）；AB104-N型電子分析天平（瑞士Mettler-Toledo公司）；SE-3001F型電子天平（美國Ohaus公司）；HWS-12型電熱恒溫水浴鍋（上海一恒科學儀器有限公司）。

1.2 藥品與試劑

洛索洛芬銀乳膏（解放軍第411醫(yī)院自制，批號：20160629、20160630、20160701，規(guī)格：1%）；洛索洛芬鈉對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：100638-200401，純度：100%）；甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Diamonsil C18（150 mm×6.0 mm，5 μm）；流動相：甲醇-水-冰醋酸-三乙胺（55∶45∶0.1∶0.1，V/V/V/ V）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：223 nm；柱溫：30℃；進樣量：20 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液 取干燥至恒重的洛索洛芬鈉對照品約10 mg，精密稱定，置于100 mL量瓶中，加5 mL 5%的氨水振搖，使溶解，加甲醇定容，搖勻，作為對照品貯備液。取上述對照品貯備液2.0 mL，置于10 mL量瓶中，加甲醇定容，搖勻，即得質量濃度為20 μg/mL的對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液 取樣品約1.0 g，精密稱定，置于100 mL量瓶中，加甲醇約20 mL，在60℃下水浴加熱10 min，趁熱加入5 mL 5%的氨水，振搖使樣品完全溶解，加甲醇定容，搖勻，置于冰?。胁粩嗉颖┲欣鋮s4 h，取出，放至室溫（25℃），作為供試品貯備液。精密量取上述貯備液5 mL，置于25 mL量瓶中，加甲醇定容，搖勻，經0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性對照溶液 按樣品的制備工藝和處方比例制備不含洛索洛芬銀的陰性樣品，再按“2.2.2”項下方法制備陰性對照溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗

精密量取“2.2”項下對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各適量，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜，詳見圖1。由圖1可知，洛索洛芬銀能達到基線分離（分離度＞1.5）；理論板數以洛索洛芬銀計≥3 000，保留時間為12.5 min。結果表明，其他成分對測定無干擾。

圖1 高效液相色譜圖Fig 1 HPLC chromatograms

2.4 線性關系考察

精密量取“2.2.1”項下對照品貯備液適量，加甲醇制成洛索洛芬鈉質量濃度分別為5、10、20、40、60、80、100 μg/mL的系列對照品溶液。取上述對照品溶液各20 μL，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。以質量濃度（x，μg/mL）為橫坐標、峰面積（y）為縱坐標進行線性回歸，得洛索洛芬鈉的回歸方程為y＝38 190x－6 343（r＝0.999 9），洛索洛芬鈉檢測質量濃度線性范圍為4.96～99.2 μg/mL。通過洛索洛芬銀與洛索洛芬鈉的相對分子質量比[Mr（Ag）∶Mr（Na）＝353∶268]，換算得洛索洛芬銀的回歸方程為y＝28 994x－6 343（r＝0.999 9），洛索洛芬銀檢測質量濃度線性范圍為6.53～130.7 μg/mL。

2.5 定量限與檢測限考察

取“2.2.1”項下對照品溶液適量，倍比稀釋，按“2.1”項下色譜條件連續(xù)進樣測定6次，記錄峰面積。當信噪比為10∶1時，得定量限（LOQ）；當信噪比為3∶1時，得檢測限（LOD）。結果，經換算，洛索洛芬銀的LOQ為0.253 μg/mL，LOD為0.076 μg/mL。

2.6 精密度試驗

取“2.2.1”項下對照品溶液適量，按“2.1”項下色譜條件連續(xù)進樣測定6次，記錄峰面積。結果，經換算，洛索洛芬銀峰面積的RSD＝0.19%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗

取“2.2.2”項下供試品溶液（批號：20160629）適量，分別于室溫下放置0、2、4、6、8、12 h時按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果，洛索洛芬銀峰面積的RSD＝0.74%（n＝6），表明供試品溶液在室溫下放置12 h內穩(wěn)定性良好。

2.8 重復性試驗

取“2.2.2”項下供試品溶液（批號：20160629）適量，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果，洛索洛芬銀峰面積的RSD＝1.67%（n＝6），表明本方法重復性良好。

2.9 加樣回收率試驗

取同一批樣品（批號：20160629）適量，共9份，每份約0.05 g，精密稱定，各置于25 mL量瓶中，分別加入一定質量的洛索洛芬鈉對照品，按“2.2.2”項下方法制備濃度為80%、100%、120%的供試品溶液，每個濃度各3份。取上述供試品溶液各適量，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算加樣回收率，結果見表1。

表1 加樣回收率試驗結果（n＝9）Tab 1 Results of recovery test（n＝9）

2.10 樣品含量測定

取3批樣品（批號：20160629、20160630、20160701）各適量，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并按外標法計算洛索洛芬銀的含量。結果，3批樣品的含量分別為98.21%、101.02%、101.82%（n＝3）。

3 討論

3.1 耐用性試驗

筆者曾選用不同流動相比例[甲醇-水-冰醋酸-三乙胺（60∶40∶0.1∶0.1、65∶35∶0.1∶0.1，V/V/V/V）]，不同品牌色譜柱Diamonsil C18（150 mm×6.0 mm，5 μm）和Zorbax ODS（250 mm×6.0 mm，5 μm），又分別考察了柱溫變化（±5℃）、流速變化（±20%）時對其含量的影響[15]。結果表明，洛索洛芬銀峰面積的RSD均＜2.0%（n＝3），說明本方法在不同流動相比例、不同型號的色譜柱、不同柱溫、不同流速下耐用性良好。

3.2 供試品溶液前處理

洛索洛芬銀是一種難溶性的藥物，只有在氨水、硝酸等極少數溶劑中溶解。本試驗采用硝酸進行溶解，但硝酸破乳效果差，不能使之較好分離；而處理乳膏樣品時加入5%的氨水溶液來溶解洛索洛芬銀，并在60℃水浴中加熱可使乳膏破乳，油水分離完全。因此，本試驗選擇5%氨水進行溶解。在處理時選用冰浴4 h是為了使乳膏基質凝固，達到易于濾過的目的。洛索洛芬銀在長時間的光照下不穩(wěn)定，因此整個測定過程在具有避光條件的房間內操作。

3.3 溶劑的選擇

該制劑為乳膏劑，為避免乳膏基質對含量測定的影響，筆者曾選用蒸餾水、流動相、甲醇、無水乙醇作為溶劑進行試驗。結果表明，選用甲醇作為溶劑時對乳膏基質沒有影響，結果準確，因此本試驗選擇甲醇為溶劑。此外，在之后的水浴操作過程中需確保水浴加熱時間充分，如不充分會導致油水分離不完全，影響測定結果。

3.4 對照品的選擇

洛索洛芬銀是通過洛索洛芬鈉與硝酸銀合成的，目前市面上還沒有其對照品。本試驗色譜圖中測定的是洛索洛芬酸母核，而洛索洛芬銀和洛索洛芬鈉均含有洛索洛芬酸同一母核，鈉離子和銀離子不干擾洛索洛芬酸的色譜測定，只是鈉和銀的原子量不同，經過洛索洛芬鈉與洛索洛芬銀的相對分子質量之比即能換算得洛索洛芬銀的量，為避免沒有洛索洛芬銀對照品的困難，故本試驗選用洛索洛芬鈉作為對照品使用。在色譜圖中，對照品溶液中含有洛索洛芬酸和鈉離子，供試品溶液中含有洛索洛芬酸和銀離子，在HPLC圖譜中顯示的峰都是洛索洛芬酸，所以二者在同一個保留時間出峰。

綜上所述，本方法操作方便、結果準確、重復性好，可用于洛索洛芬銀乳膏中洛索洛芬銀的含量測定。

[1] 陳筱瑜，楊苓山，林燕喃，等.燒燙傷外用藥物及劑型的研究進展[J].解放軍藥學學報，2012，28（2）：166-168.

[2] 陳忠江，趙志偉，段鵬，等.納米銀抗菌凝膠與磺胺嘧啶銀治療燒傷患者60例分析[J].山西醫(yī)藥雜志，2010，39（9）：874-875.

[3] 趙永超，李彪.磺胺嘧啶銀治療燒傷創(chuàng)面102例療效觀察[J].河南外科學雜志，2011，17（1）：39-40.

[4] 錢苗苗，李淑娥.磺胺嘧啶銀敷料在小兒淺Ⅱ度燒傷護理中的應用[J].湖南中醫(yī)藥大學學報，2013，33（10）：47-48.

[5] 馬虹，黃潔夫.臨床醫(yī)生用藥大全[M].廣州：廣東科技出版社，2000：133.

[6] 張堅，黃仕雄，張仲如.美寶濕潤燒傷膏與磺胺嘧啶銀治療燒傷的療效比較[J].臨床合理用藥雜志，2009，2（21）：42-43.

[7] 周淑琴.新型非甾體抗炎藥洛索洛芬鈉的研究進展[J].上海醫(yī)藥，2008，29（10）：468-469.

[8] 黃峰，張江林，楊春花.洛索洛芬鈉治療強直性脊柱炎的療效與安全性評價[J].中國新藥雜志，2002，11（11）：878-881.

[9] 劉琳娜，李學擁，吳曉春，等.銀離子抗菌敷料用于Ⅱ度燒傷創(chuàng)面的療效和安全性[J].實用藥物與臨床，2013，16（10）：922-923.

[10] Tian J，Wong KK，Ho CM，et al.Topical delivery of silver nanoparticles promotes wound healing[J].Chem Med Chem，2007，2（1）：129-136.

[11] 陳美婉，彭新生，吳琳娜，等.納米銀抗菌劑的研究和應用[J].中國消毒學雜志，2009，26（4）：424-426.

[12] Society of Japanese Pharmacopoeia.The Japanese Pharmacopoeia：sixteenth edition[S].Tokyo：Society of Japanese Pharmacopoeia，2011：1047.

[13] 冀滿豐.HPLC法測定洛索洛芬鈉緩釋片中主藥的含量[J].中國現代藥物應用，2008，2（12）：8-9.

[14] 楊甜，王成永.HPLC法測定洛索洛芬鈉滲透泵型控釋片的含量[J].安徽醫(yī)藥，2010，14（3）：293-294.

[15] 粟貴，劉雁鳴，龍海燕，等.HPLC法測定并比較藥用級與非藥用級苯甲酸鈉的含量[J].中國藥房，2016，27（18）：2566-2569.

（編輯：劉 柳）

Content Determination of Loxoprofen Silver in Loxoprofen Silver Cream by HPLC

SHEN Yiwei1，2，YAN Han1，2，HUANG Yueying1，2，SHI Xiaoqing1，2，BIAN Jun1（1.Dept.of Pharmacy，No.411 Hospital of PLA，Shanghai 200434，China；2.College of Pharmacy，Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine，Nanchang 330004，China）

OBJECTIVE：To establish a method for the content determination of loxoprofen silver in Loxoprofen silver cream，and provide reference for the quality control of the preparation.METHODS：HPLC was performed on the column of Diamonsil C18with mobile phase of methanol-water-glacial acetic acid-triethylamine（55∶45∶0.1∶0.1，V/V/V/V）at a flow rate of 1.0 mL/min，detection wavelength was 223 nm，column temperature was 30℃，and the injection volume was 20 μL.RESULTS：The linear range of loxoprofen silver was 6.53-130.7 μg/mL（r＝0.999 9）；the limit of quantitation was 0.253 μg/mL，limit of detection was 0.076 μg/mL；RSDs of precision，stability and reproducibility tests were lower than 2%；recovery was 96.79%-103.68%（RSD＝2.23%，n＝9）.CONCLUSIONS：The method is simple，accurate and reproducible，and can be used for the content determination of Loxoprofen silver cream.

Loxoprofen silver cream；Loxoprofen silver；HPLC；Content determination

R917

A

1001-0408（2017）06-0851-03

2016-09-16

2016-12-11）

＊碩士研究生。研究方向：藥物新劑型與新技術。電話：021-65280289。E-mail：shenyiwei03@163.com

#通信作者：主任藥師，碩士。研究方向：新藥制劑開發(fā)與研究。電話：021-65280289。E-mail：Bianjun411@163.com

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.06.36