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    關(guān)于生乳發(fā)酵試驗(yàn)方法的研究

    2022-12-14 01:08:24田桂艷曹文燕郝培霞白曉玲
    中國(guó)乳業(yè) 2022年11期
    關(guān)鍵詞:生乳樣液產(chǎn)酸

    劉 靜,田桂艷,曹文燕,郝培霞,李 慧,白曉玲,張 會(huì)

    保定蒙牛飲料有限公司,河北保定 072450

    0 引言

    隨著人們生活水平的提高,對(duì)營(yíng)養(yǎng)的需求更加多元化,乳制品的種類(lèi)也越來(lái)越豐富,發(fā)酵型酸奶以其優(yōu)良的口感和更容易被吸收的特性深受人們喜愛(ài)[1]。通過(guò)檢驗(yàn)、更快地篩選出適合發(fā)酵的牛奶以縮短牛奶在廠(chǎng)生產(chǎn)時(shí)間,對(duì)于乳品企業(yè)具有重要意義。

    目前酸奶的發(fā)酵是使用保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌的混合菌株[2],共同分解代謝牛奶中的乳糖。兩種菌株對(duì)乳糖的代謝方式均為同型乳酸發(fā)酵[3],但在不同發(fā)酵時(shí)期表現(xiàn)不同的代謝特性,在混合培養(yǎng)初期,嗜熱鏈球菌以其產(chǎn)酸快、生長(zhǎng)快的特點(diǎn)[4],成為主要的發(fā)酵菌株,經(jīng)糖酵解途徑代謝乳糖產(chǎn)酸使發(fā)酵pH值下降[5],營(yíng)造出適合保加利亞乳桿菌發(fā)酵的酸性環(huán)境,當(dāng)pH值降至5.5時(shí),嗜熱鏈球菌的生長(zhǎng)速率減慢,而保加利亞乳桿菌的生長(zhǎng)速率加快,成為主要的產(chǎn)酸菌株,在發(fā)酵后期及貯藏期發(fā)揮主要產(chǎn)生粘度和酸度的能力。

    溴甲酚紫指示劑[6]的變色范圍是6.8(紫)~5.2(黃)(溴甲酚紫pH值在6.8以上為紫色,6.8~5.2為藍(lán)色,5.2以下為黃色),生乳發(fā)酵的pH值的變化范圍為6.7~4.6,在試驗(yàn)條件下,2 h的發(fā)酵能使樣液的pH值從6.7降低至5.0,此時(shí)嗜熱鏈球菌的產(chǎn)酸過(guò)程完成,保加利亞菌株產(chǎn)生粘度和酸度也發(fā)揮了作用。所以添加溴甲酚紫指示劑的變色范圍能監(jiān)控到兩種菌株主要的發(fā)酵過(guò)程,能發(fā)現(xiàn)發(fā)酵過(guò)程異常,對(duì)比目前在用的發(fā)酵方法,可提前觀(guān)察發(fā)酵情況,更早對(duì)異常情況進(jìn)行分析處理,在實(shí)際試驗(yàn)中可以輔助使用。

    1 材料與方法

    1.1 材料與儀器

    1.1.1 材料與試劑

    溴甲酚紫溶液(0.1 g/L),分析純,福晨(天津)化學(xué)試劑有限公司;菌種(200 U/包),丹麥科漢森有限公司。

    1.1.2 主要儀器設(shè)備

    超凈工作臺(tái)(SW-CJ-2F),蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司;pH計(jì)(FE20),梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司;粘度計(jì)(DV2TLVTJ0),美國(guó)BROOKFIELD公司。

    1.2 方法

    1.2.1 母菌種的配制和驗(yàn)證

    母菌種的配制:在超凈工作臺(tái)中將1.5 g粉末發(fā)酵劑加入250 mL的12%復(fù)原乳(12%復(fù)原乳的配制要求:使用溫度為(45~60 ℃)的三級(jí)水將無(wú)抗生素脫脂乳粉[7]溶解并定容至250 mL)中,在(55±1) ℃水浴鍋中水合1 h后沸水水浴10 min,然后冷卻至42 ℃左右。

    母菌種的驗(yàn)證:使用曾檢測(cè)發(fā)酵合格的生乳留樣進(jìn)行驗(yàn)證,將生乳樣品加熱煮沸殺菌[8]5~10 s后,轉(zhuǎn)移200 mL至滅菌后的300 mL三角瓶中,冷卻至45 ℃左右,加入母菌種4~5 mL,然后加入1 mL 0.1 g/L的溴甲酚紫溶液,加塞后搖勻,此時(shí)樣液為藍(lán)色(生乳的pH值一般在6.7左右),置于(45±1) ℃水浴鍋中溫育2.5 h,在溫育過(guò)程中不得搖晃三角瓶。培養(yǎng)2 h進(jìn)行顏色判定,在2.5 h進(jìn)行感官、粘度、pH值的檢測(cè),符合標(biāo)準(zhǔn)要求,母菌種方可使用。

    1.2.2 發(fā)酵過(guò)程

    將生乳樣品加熱煮沸殺菌5~10 s后,轉(zhuǎn)移200 mL至滅菌后的300 mL三角瓶中,冷卻至45 ℃左右,加入母菌種4~5 mL,然后加入1 mL 0.1 g/L的溴甲酚紫溶液,加塞后搖勻,此時(shí)樣液為藍(lán)色(生乳的pH值一般在6.7左右),置于(45±1) ℃水浴鍋中溫育2.5 h,在溫育過(guò)程中不得搖晃三角瓶[9]。

    培養(yǎng)2 h進(jìn)行顏色判定,在2.5 h進(jìn)行感官、粘度、pH值的檢測(cè)。見(jiàn)表1。

    表1 觀(guān)察順序和判斷標(biāo)準(zhǔn)

    1.3 判定結(jié)果

    1. 3.1顏色判定

    發(fā)酵2 h時(shí),觀(guān)察顏色變化,樣液的顏色從藍(lán)色變?yōu)辄S色,生乳產(chǎn)酸進(jìn)程正常。如果沒(méi)有變色,說(shuō)明生乳發(fā)酵異常,可進(jìn)行異常分析。

    1.3.2 感官指標(biāo)

    繼續(xù)培養(yǎng)至2.5 h,輕輕取出樣品瓶,觀(guān)察樣品狀態(tài)。

    1.3.3 理化指標(biāo)

    感官合格后的樣品可以進(jìn)行理化指標(biāo)的檢測(cè),合格指標(biāo)如下:粘度指標(biāo):>500 cp,pH指標(biāo):4.6~5.0。

    2 方法可行性論證

    分別從酸奶發(fā)酵過(guò)程、添加溴甲酚紫指示劑與常用法酸奶發(fā)酵過(guò)程對(duì)比、添加溴甲酚紫結(jié)果觀(guān)察與常用法檢測(cè)酸度和粘度指標(biāo)對(duì)比、添加溴甲酚紫與日常檢測(cè)不同點(diǎn)等方面闡述該方法的可行性。

    2.1 酸奶發(fā)酵pH值變化圖

    結(jié)合發(fā)酵過(guò)程中菌種的作用,初期生乳pH值在6.7左右,溶液呈現(xiàn)藍(lán)色,隨著嗜熱鏈球菌產(chǎn)酸的進(jìn)程加快,pH逐漸降低,降到5.5時(shí),保加利亞乳桿菌的生長(zhǎng)速率提升,直至pH4.6完成發(fā)酵。

    在試驗(yàn)設(shè)定的條件下,菌種正常的發(fā)酵進(jìn)程:生乳的pH值普遍在6.6~6.7左右分布,隨著發(fā)酵作用,pH值1 h降低到5.9左右,2 h降低到5.1左右,3 h達(dá)到4.6左右,完成發(fā)酵(圖1)。

    圖1 生乳發(fā)酵pH值變化圖

    2.2 添加溴甲酚紫與不添加溴甲酚紫酸奶的pH值對(duì)比數(shù)據(jù)

    在同一個(gè)樣品中添加了溴甲酚紫指示劑的發(fā)酵進(jìn)程與未添加溴甲酚紫指示劑的日常發(fā)酵方法的發(fā)酵進(jìn)程趨勢(shì)是一致的,而且它們?cè)诿總€(gè)發(fā)酵時(shí)間點(diǎn)的pH值相差<0.07,說(shuō)明添加溴甲酚紫指示劑后只改變了樣液的顏色,并未影響酸奶的發(fā)酵進(jìn)程,所以添加溴甲酚紫的發(fā)酵方法可以使用(表2)。

    表2 兩種方法pH值對(duì)比數(shù)據(jù)

    2.3 添加溴甲酚紫與不添加溴甲酚紫酸奶檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)對(duì)比

    通過(guò)表3數(shù)據(jù)可以看出,溴甲酚紫法在2 h通過(guò)顏色的判定結(jié)論和2.5 h觀(guān)察感官結(jié)果一致,粘度均合格都大于500 cp且數(shù)值相差不大,使用溴甲酚紫方法通過(guò)pH計(jì)測(cè)量得出酸度結(jié)果,相對(duì)比常規(guī)法使用的酸度滴定法檢測(cè)酸度更加快速,而且和酸奶的發(fā)酵終點(diǎn)pH 4.6的判定方式一致,更容易判定出發(fā)酵的進(jìn)程。

    表3 兩種方法結(jié)果對(duì)比

    2.4 添加溴甲酚紫與日常檢測(cè)不同點(diǎn)對(duì)比分析

    溴甲酚紫法在發(fā)酵到2 h的時(shí)候就能直觀(guān)的通過(guò)觀(guān)察樣液的顏色判斷發(fā)酵的進(jìn)程是否正常,而常規(guī)發(fā)酵法需要等到2.5 h取出樣品后才能發(fā)現(xiàn)樣品異常,所以添加了溴甲酚紫的方法能更早的發(fā)現(xiàn)發(fā)酵過(guò)程的異常,盡快分析采取驗(yàn)證措施,縮短驗(yàn)證時(shí)間(圖2)。

    圖2 兩種方法流程對(duì)比圖

    3 結(jié)論

    通過(guò)對(duì)添加溴甲酚紫發(fā)酵方法的可行性論證可以看出:添加了溴甲酚紫的發(fā)酵方法,不影響酸奶發(fā)酵的發(fā)酵進(jìn)程,且它能在2 h時(shí)就發(fā)現(xiàn)樣品發(fā)酵的異常,更快的分析采取驗(yàn)證措施,且使用pH計(jì)檢測(cè)酸度結(jié)果,比日常的檢測(cè)使用的酸度滴定方法更快。在實(shí)際試驗(yàn)中可以輔助使用。溴甲酚紫的添加對(duì)觀(guān)察生乳酸奶發(fā)酵進(jìn)程具有重要意義。

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