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    蒽酮-硫酸法測定地筍多糖含量的研究

    2016-03-13 10:16:21王玉璽
    化工設計通訊 2016年4期
    關鍵詞:水浴鍋樣液光度計

    王玉璽,胡 欣

    (貴州工程應用技術學院化學工程學院,貴州畢節(jié) 551700)

    蒽酮-硫酸法測定地筍多糖含量的研究

    王玉璽,胡 欣

    (貴州工程應用技術學院化學工程學院,貴州畢節(jié) 551700)

    采用蒽酮-硫酸法測定地筍多糖含量并對其測定條件進行研究。實驗結果表明:使用蒽酮-硫酸試劑在430~800 nm掃描地筍多糖的最大吸收波長為625nm,蒽酮試劑的最佳濃度為4g/L,最佳加熱時間為8min,最佳顯色時間4min,精密度實驗RSD值為2.31%。平均回收率為92.99%,RSD 為3.60%。

    地筍多糖;蒽酮-硫酸法;測定

    1 研究材料及方法

    1.1 材料與儀器

    1.1.1 材料

    地筍(產地貴州威寧)、蒽酮、濃硫酸、葡萄糖、三氯甲烷、正丁醇;蒽酮-濃硫酸(2g/L):稱取0.2g蒽酮,溶于100mL濃硫酸中(現(xiàn)配現(xiàn)用);葡萄糖標準樣液(100mg/L):稱取1g葡萄糖標準品于燒杯內,攪拌溶解,完全溶解后,移入100mL容量瓶內,定容;葡萄糖工作樣液(100μg/L):精確吸取1mL葡萄糖標準樣液于100mL容量瓶內,用超純水定容至刻度線。

    1.1.2 儀器

    分光度計、恒溫水浴鍋、控溫,微波消解/萃取儀、紫外分光光度計、真空抽濾器、磁力攪拌器、移液管、可調試移液器(10mL 5mL)、量筒、燒杯、250mL容量瓶、100mL容量瓶、離心管。

    1.2 實驗方法

    1.2.1 地筍多糖樣液的制備

    稱取已經研磨好的、干燥的地筍粉末0.5g,置于消解儀中,加入20mL超純水,放入已經調好的微波消解儀中(80℃,8min)提取,待時間到達后,趁熱移入真空抽濾瓶中進行抽濾。將濾液移入100mL燒杯中,加入15mLSevage試劑(注意盡量每次沖洗的量最好保持一致),放在磁力攪拌機上攪拌15min。15min后將溶液移入分液漏斗中進行分液,取上清液移入250mL容量瓶中,用超純水定容至刻度線(樣液1)。再從樣液1中取5mL樣液定容至100mL(樣液2),待測。

    1.2.2 確定蒽酮-濃硫酸的最大吸收波長

    分別吸取1mL葡萄糖工作樣液和地筍多糖樣液2于25mL離心管中,在冰水浴中加入4mL 2g/L蒽酮-濃硫酸溶液,放入80℃的恒溫水浴鍋中恒溫10min后,取出含有待測樣液的離心管,將其放入冰水中,待冷卻至室溫后,將樣液倒入比色皿中,在紫外分光光度計中進行掃描(根據(jù)文獻設置紫外分光光度計的掃描范圍為430~800nm),以確定其最大吸收波長。

    1.2.3 確定蒽酮-濃硫酸的最佳用量

    分別稱取0.01g、0.02g、0.025g、0.03g、0.04g、0.05g、0.06g蒽酮溶于10mL濃硫酸溶液中,準確吸取7份1mL地筍多糖樣液于編好號的25mL離心管內,再分別加入不同濃度的4mL蒽酮-濃硫酸溶液,放入80℃的恒溫水浴鍋中恒溫10min后,取出含有待測樣液的離心管,將其放入冰水中,待冷卻至室溫后,將樣液倒入比色皿中,再在可見分光光度計中測定其吸光度。

    1.2.4 確定蒽酮-濃硫酸的最佳加熱時間

    配制由1.2.3方法得出的蒽酮-濃硫酸最佳的用量,準確吸取6份1mL地筍多糖樣液于編好號的25mL離心管內,再加入4mL配制好的蒽酮-濃硫酸,放入80℃的恒溫水浴鍋中,分別水浴恒溫2min、4min、6min、8min、10min、15min、20min,取出離心管并放入冰水中,待冷卻至室溫后,再在可見分光光度計中測定其吸光度。

    1.2.5 確定蒽酮-濃硫酸的最佳顯色時間

    準確吸取1mL地筍多糖樣液于25mL離心管中,再加入4mL蒽酮-濃硫酸,放入80℃的恒溫水浴鍋中水浴恒溫一定時間,取出離心管后,立即將管中的待測樣液倒入比色皿內,隔2min就測一次,直到數(shù)據(jù)穩(wěn)定為止。

    1.2.6 精密度實驗

    準確吸取6份1mL地筍多糖溶液于編好號的25mL離心管內,再加入4mL蒽酮-濃硫酸溶液,放入80℃的恒溫水浴鍋中恒溫一定后,取出含有待測樣液的離心管,將其放入冰水中,再在可見分光光度計中測定其吸光度,計算出標準偏差,以確定本實驗方法的精密度。

    1.2.7 樣品的測定

    用1.2.1的方法且用測出的最佳條件分別提取試樣1和試樣2中的多糖溶液,提取后的樣液分別為樣液1和樣液2,用地筍多糖樣液為原液,用蒽酮-濃硫酸法測定它們的吸光度。

    2 結果與討論

    2.1 蒽酮-濃硫酸最大吸收波長的確定

    通過研究可知,地筍多糖溶液的最大吸收波長在614~625nm,且此時的吸光度達到最大值;葡萄糖標準溶液的最大吸光度值的掃描波長在595~624nm,由于掃描時掃描過快,導致波長在630nm時的數(shù)值下降太快,依據(jù)相關文獻和各方面的綜合考慮,選用625nm作為本實驗的測定波長比較合適。

    2.2 確定蒽酮-濃硫酸的最佳用量

    不同蒽酮-硫酸溶液的濃度對其吸光度的影響很大,當蒽酮-硫酸溶液的濃度在4g/L時,其吸光度值最大,這是因為濃硫酸與多糖水解反應時需要一定的濃度:濃度大,強酸會破壞多糖的分子結構,吸光度減小:濃度小,反應不完全,吸光度偏小。因此蒽酮-濃硫酸的最佳使用濃度為4g/L。

    2.3 確定蒽酮-濃硫酸的最佳加熱時間

    當?shù)毓S多糖樣液加熱8min后吸光度達到最大值,到10min 后吸光度值明顯下降且緩慢上升至平緩;這是由于濃硫酸與多糖水解反應時需要一定的時間,加熱時間過短,反應不完全,顯色強度不強,吸光度則偏小。

    2.4 確定蒽酮-濃硫酸的最佳顯色時間

    地筍多糖樣液反應放置4min后,其吸光度基本穩(wěn)定,在4-20min內其吸光度總是在0.415、0.416、0.417這三個數(shù)值上有所波動,但是吸光度在20min以后就一直保持在0.415這個數(shù)值上。這可能是因為可見分光光度計本身就存在誤差,且誤差在0.002以內,故選用4min為蒽酮-濃硫酸的最佳顯色時間,且實驗中反應后冷卻放置4min以后就可以進行測定。

    3 結束語

    采用蒽酮-硫酸法測定地筍多糖時,在比較好的測定條件下測定地筍多糖,即:加入4g/L 蒽酮-硫酸溶液,置于80℃的恒溫水浴鍋中恒溫8min,放入冰水中冷卻4min,于波長625nm 范圍內測定吸光值,可提高樣品中地筍多糖測定的準確度。蒽酮-硫酸法測定地筍多糖具有穩(wěn)定、精準、重復性好的優(yōu)點,是一種快速、簡便測定地筍多糖的方法。

    Anthrone-Sulfuric Acid Method To Study Bamboo Polysaccharide Content

    Wang Yu-xi,Hu Xin

    Anthrone-Sulfuric Acid Method To Shoot Polysaccharide Content And Study Its Measurement Conditions.The Results Show That:The Use Of Anthrone-Sulfuric Acid Reagent In The 430-800 Nm Scan To Shoot Polysaccharide Maximum Absorption Wavelength Of 625nm,The Optimum Concentration Anthrone Reagent Is 4g/L,The Optimum Heating Time Of 8min,The Best Coloration Time 4min,Precision Experiments RSD Is 2.31%.The Average Recovery Rate Was 92.99%,RSD 3.60%.

    ground shoots polysaccharide;anthrone-sulfuric acid method;Determination

    R284

    B

    1003–6490(2016)04–0154–02

    2016–04–06

    王玉璽(1993—),男,貴州貴陽人,本科,主要研究方向為應用化學。

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