野生與栽培藍(lán)靛果果實(shí)提取物的體外抗氧化活性

劉德江，申 健，田立娟，程廣東，趙永勛

（佳木斯大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154007）

藍(lán)靛果Lonicera edulisTurcz.是忍冬科忍冬屬植物，為落葉小灌木。我國(guó)藍(lán)靛果主要分布在東北、華北和西北地區(qū)，以東北的大、小興安嶺和長(zhǎng)白山地區(qū)的野生資源貯量最為豐富，但掠奪式采摘使其資源破壞嚴(yán)重，而人工規(guī)?；耘嗟漠a(chǎn)量幾乎為零[1-3]。有關(guān)研究結(jié)果表明，藍(lán)靛果果實(shí)中含有大量的活性物質(zhì)，此類活性物質(zhì)具有抗病毒、抗癌和改善肝臟解毒功能等功用[4-5]，具有較高的營(yíng)養(yǎng)及藥用雙重價(jià)值[6]，是開發(fā)天然抗氧化劑的良好資源[7]。多年來(lái)，國(guó)內(nèi)外現(xiàn)有關(guān)于藍(lán)靛果的研究?jī)?nèi)容主要集中在野生藍(lán)靛果抗氧化性質(zhì)的研究方面，而有關(guān)栽培藍(lán)靛果的抗氧化性質(zhì)的研究在國(guó)內(nèi)外尚無(wú)報(bào)道。因此，文中測(cè)定并統(tǒng)計(jì)了以不同產(chǎn)地野生與栽培藍(lán)靛果果實(shí)提取物制備的樣液對(duì)DPPH? 、?OH及O2ˉ?自由基的清除率，比較分析了二者抗氧化活性的大小及差異性，以期為野生藍(lán)靛果資源的有效保護(hù)及藍(lán)靛果人工規(guī)?；脑耘嗵峁﹨⒖家罁?jù)。

1 材料與方法

1.1 材 料

野生藍(lán)靛果果實(shí)2010年6～7月分別采摘于黑龍江省的伊春、勃利和吉林省的汪清；栽培藍(lán)靛果果實(shí)2010年5～6月采摘于4年生的栽培藍(lán)靛果樹，這些栽培樹都是采用2007年通過(guò)采枝扦插繁殖得到的伊春、勃利和汪清的苗木而種植的。將采摘后的果實(shí)除雜后放入－20 ℃的冰箱中凍藏。

1.2 方 法

1.2.1 藍(lán)靛果提取物樣品的制備

根據(jù)劉德江等人采用的方法[8-9]制備藍(lán)靛果提取物樣品，提取方法為超聲波法，超聲波作用時(shí)間為19 min，超聲波作用功率為229 W，料液比為1∶19，提取級(jí)數(shù)為1 級(jí)。選用HPD-200A大孔樹脂進(jìn)行粗提物純化，最佳純化條件為：上樣液的質(zhì)量濃度為50 mg/mL，洗脫流速為2.0 mL/min，洗脫液濃度為70%(v/v)。將提取物減壓濃縮后進(jìn)行真空冷凍干燥處理以備用。

1.2.2 DPPH?自由基的清除

采用楊玲等人的方法[10-12]將藍(lán)靛果提取物用蒸餾水制成樣液，其質(zhì)量濃度分別設(shè)為0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mg/mL， 并 配 制 DPPH 2×l0-4mol/L的60%乙醇溶液。分別取不同質(zhì)量濃度提取物樣液各2.0 mL，加入DPPH的60%乙醇溶液2.0 mL，搖勻后放置30 min，以蒸餾水為空白對(duì)照，在517 nm處測(cè)定其吸光度（A0）。然后，分別取不同質(zhì)量濃度提取物樣液各2.0 mL，與2.0 mL乙醇溶液混合后，在517 nm處測(cè)定其吸光度（Ax）。最后，測(cè)定DPPH乙醇溶液2.0 mL與蒸餾水2.0 mL混合后的517 nm處的吸光度（Ac）。樣液對(duì)自由基的清除能力以K來(lái)表示。重復(fù)3次。清除率（K）的計(jì)算公式如下：

1.2.3 ?OH自由基的清除

依據(jù)楊玲等人的方法[13]，在具塞試管中依次加入2.0×10-4mol/L的甲基紫溶液1.0 mL、1.0×10-3mol/L的 Fe2+溶 液 1.0 mL、0.12% 的H2O2溶液1.0 mL，以Tris-HCl緩沖液將pH值調(diào)至4.5后，用蒸餾水精確稀釋到10 mL，搖勻放置30 min后，用分光光度計(jì)在578 nm處測(cè)定吸光度（Ai），以甲基紫和Tris-HCl緩沖溶液作為空白溶液，測(cè)定其吸光度（A），兩者均以水為參比。測(cè)定樣品時(shí)在上述體系中預(yù)先加入1.0 mL的樣液，采用上述方法測(cè)定樣品的吸光度（As），以同體積的樣液、Tris-HCl和水溶液作參比，重復(fù)3次。清除率（S）的計(jì)算公式為：

1.2.4 O2ˉ?自由基的清除

參照郭雪峰的方法[14-15]測(cè)定樣液對(duì)超氧自由基的清除能力。反應(yīng)體系中依次加入50 mmol/L的Tris-HCl溶液5.7 mL、樣液0.2 mL、6 mmol/L的鄰苯三酚溶液0.1 mL，將混合物反應(yīng)4 min，滴入2滴HCl以終止反應(yīng)，在320 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（A1）；用等體積的蒸餾水代替鄰苯三酚，測(cè)定其吸光度（A2）；再用等體積的蒸餾水代替樣品溶液，測(cè)定其吸光度（A3）。重復(fù)3次。清除率（S）的計(jì)算公式為：

2 結(jié)果與分析

2.1 DPPH?自由基的清除結(jié)果

不同產(chǎn)地野生與栽培藍(lán)靛果果實(shí)提取物不同質(zhì)量濃度的樣液對(duì)DPPH·的清除作用分別如圖1A、B、C所示。由圖1A、B、C可知，不同產(chǎn)地野生與栽培藍(lán)靛果果實(shí)提取物不同質(zhì)量濃度樣液對(duì)DPPH·都具有很強(qiáng)的清除能力，且其對(duì)DPPH·的清除能力隨著藍(lán)靛果樣液質(zhì)量濃度的增加而呈現(xiàn)出更強(qiáng)的變化趨勢(shì)。在圖1的A與B中，不同產(chǎn)地野生藍(lán)靛果果實(shí)樣液對(duì)DPPH·的清除能力均高于栽培果樣液。由圖1A可知，當(dāng)樣液質(zhì)量濃度分別為0.5、2.0 mg/mL且P＜0.05時(shí)，野生與栽培藍(lán)靛果果實(shí)樣液對(duì)DPPH·的清除能力之間存在差異；由圖1B可知，當(dāng)樣液質(zhì)量濃度分別為2.0、2.5 mg/mL且P＜0.05時(shí)，野生與栽培藍(lán)靛果果實(shí)樣液對(duì)DPPH·的清除能力之間亦有差異；由圖1C可知，當(dāng)樣液的質(zhì)量濃度分別為0.5、2.0 mg/mL且P＜0.05時(shí)，栽培和野生藍(lán)靛果果實(shí)提取樣液對(duì)DPPH·自由基的清除能力之間具有差異性。在圖1A、B、C中，當(dāng)P＜0.01時(shí)，野生與栽培藍(lán)靛果果實(shí)提取樣液對(duì)DPPH·自由基的清除能力之間均無(wú)差異。

2.2 ?OH自由基的清除結(jié)果

不同產(chǎn)地野生與栽培藍(lán)靛果果實(shí)提取物不同質(zhì)量濃度樣液對(duì)?OH的清除作用分別如圖2A、B、C所示。由圖2A、B、C可知，不同產(chǎn)地野生與栽培藍(lán)靛果果實(shí)提取物不同質(zhì)量濃度樣液對(duì)?OH均有較強(qiáng)的清除能力，且隨著藍(lán)靛果樣液質(zhì)量濃度的增加，其對(duì)?OH的清除能力愈來(lái)愈強(qiáng)，當(dāng)樣液的質(zhì)量濃度達(dá)到2.5 mg/mL時(shí)，栽培和野生藍(lán)靛果樣液對(duì)?OH的清除能力均達(dá)到70%以上，汪清栽培果樣液的清除率最大（86.5%）。在圖2A、B中，不同產(chǎn)地栽培藍(lán)靛果樣液對(duì)?OH的清除能力均高于野生果樣液。當(dāng)樣液的質(zhì)量濃度分別為如圖2A的2.0、2.5 mg/mL 和如圖2B的1.5、2.0 mg/mL且在P＜0.05時(shí)，野生與栽培藍(lán)靛果樣液對(duì)?OH的清除能力之間差異顯著。在圖2C中，當(dāng)樣液的質(zhì)量濃度分別為0.5、1.0 mg/mL時(shí)，栽培藍(lán)靛果樣液對(duì)?OH的清除能力略低于野生果樣液；而當(dāng)樣液的質(zhì)量濃度增加到1.5、2.0 mg/mL時(shí)，兩者在P＜0.05時(shí)具有差異。圖2A、B、C中，當(dāng)P＜0.01時(shí)，野生與栽培藍(lán)靛果樣液對(duì)?OH的清除能力之間均無(wú)差異。

圖1 不同產(chǎn)地野生與栽培藍(lán)靛果果實(shí)提取物不同質(zhì)量濃度樣液對(duì)DPPH·的清除作用Fig.1 Scavenging activities to DPPH· of different mass concentration of extracts from wild and cultivated Lonicera edulis at different regions

圖2 不同產(chǎn)地野生與栽培藍(lán)靛果果實(shí)提取物不同質(zhì)量濃度樣液對(duì)?OH的清除作用Fig.2 Scavenging activities to ?OH of different mass concentration extracts from wild and cultivated Lonicera edulis at different regions

2.3 O2ˉ?自由基的清除結(jié)果

不同產(chǎn)地野生與栽培藍(lán)靛果果實(shí)提取物不同質(zhì)量濃度樣液對(duì)O2ˉ?的清除作用分別如圖3A、B、C所示。由圖3A、B、C可知，以不同產(chǎn)地的野生與栽培藍(lán)靛果果實(shí)提取物制備的不同質(zhì)量濃度的樣液對(duì)O2ˉ?自由基均有極強(qiáng)的清除能力，且同等質(zhì)量濃度的栽培果提取樣液對(duì)O2ˉ?的清除能力均略高于野生果樣液。除此之外，當(dāng)樣液的質(zhì)量濃度均為0.5 mg/mL時(shí)，野生和栽培藍(lán)靛果提取樣液的清除率均高于60%以上；當(dāng)樣液的質(zhì)量濃度均為2.5 mg/mL時(shí)，野生和栽培藍(lán)靛果提取樣液的清除率均達(dá)到90%，最大為98.1%。由圖3B可知，當(dāng)樣液的質(zhì)量濃度為1.5 mg/mL且在P＜0.05時(shí)，栽培與野生果樣液的清除率之間具有顯著的差異；由圖3C可知，當(dāng)樣液的質(zhì)量濃度分別為2.0、2.5 mg/mL且在P＜0.05時(shí)，栽培與野生果樣液的清除率之間具有顯著差異。在圖3A、B、C中，當(dāng)P＜0.01時(shí)，野生與栽培藍(lán)靛果提取樣液對(duì)O2ˉ?的清除能力之間均無(wú)差異性。

圖3 不同產(chǎn)地野生與栽培藍(lán)靛果果實(shí)提取物不同質(zhì)量濃度樣液對(duì)O2ˉ?的清除作用Fig.3 Scavenging activities to O2ˉ? of different mass concentration extracts from wild and cultivated Lonicera edulis at different regions

3 結(jié) 論

不同產(chǎn)地野生與栽培藍(lán)靛果果實(shí)提取物不同質(zhì)量濃度樣液對(duì)DPPH?、?OH及O2ˉ?自由基都具有較強(qiáng)的清除能力，且其清除率隨著提取樣液的質(zhì)量濃度的增加而增加，呈量效關(guān)系。方差分析結(jié)果表明，當(dāng)P＜0.05時(shí)，野生與栽培藍(lán)靛果提取樣液對(duì)DPPH?、?OH及O2ˉ?自由基的清除率，僅表現(xiàn)出點(diǎn)狀差異，卻未呈現(xiàn)出線性關(guān)系；而當(dāng)P＜0.01時(shí)，野生與栽培藍(lán)靛果提取樣液對(duì)三種自由基的清除率之間并無(wú)顯著差異。

綜上所述，不同產(chǎn)地的野生與栽培藍(lán)靛果均有較高的抗氧化活性，且野生與栽培果的抗氧化活性之間無(wú)顯著差異。

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