補(bǔ)骨脂素對(duì)去卵巢癡呆大鼠腦組織海馬區(qū)的病理形態(tài)學(xué)影響

潘永梅++王建華+方敬+王蕊

[摘要]目的 探討補(bǔ)骨脂素對(duì)去卵巢癡呆大鼠腦組織海馬區(qū)的病理形態(tài)學(xué)影響。方法 2013年2月～2016年1月制備去卵巢癡呆大鼠模型，分為假手術(shù)組、模型組和補(bǔ)骨脂素組，每組10只，其中補(bǔ)骨脂素組建立模型后連續(xù)灌胃給藥29 d，模型組給予常規(guī)生理鹽水代替。觀察比較各組大鼠腦組織海馬區(qū)的病理形態(tài)。結(jié)果 與假手術(shù)組比較，模型組大鼠潛伏期明顯延長(zhǎng)（P<0.05）；與模型組比較，補(bǔ)骨脂素組均能明顯縮短潛伏期（P<0.05）；補(bǔ)骨脂素組大鼠穿越平臺(tái)次數(shù)顯著增加，與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。假手術(shù)組、模型組、補(bǔ)骨脂素組SOD含量分別為（145.30±18.42）、（110.49±6.46）、（120.98±7.13）U/gprot，MDA含量分別為（2.87±0.44）、（4.46±0.63）、（3.19±0.42）nmol/mgprot。與假手術(shù)組比較，模型組SOD含量顯著降低，MDA含量顯著增加，三組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。超微透射電鏡顯示補(bǔ)骨脂素組錐體細(xì)胞形態(tài)得到改善，排列均一、整齊，結(jié)構(gòu)清晰。結(jié)論 補(bǔ)骨脂素能提高去卵巢癡呆大鼠的SOD氧化酶活性，降低MDA含量，從而有利于腦組織海馬區(qū)的病理形態(tài)學(xué)的改善，提高記憶能力。

[關(guān)鍵詞]補(bǔ)骨脂素；去卵巢癡呆；腦組織海馬區(qū)；病理形態(tài)學(xué)

[中圖分類號(hào)] R749.99 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2016）09（b）-0009-03

[Abstract]Objective To investigate the effects of psoralen on ovariectomized rat dementia in hippocampus of rat brain tissue pathological effect.Methods From February 2013 to January 2016，the preparation of ovariectomized dementia rat model were divided the sham operation group，model group and psoraleae group，with 10 rats in each group，included psoralen group model after intragastric administration 29 d，model group were given routine saline instead. The pathological changes of the hippocampus of rats in each group were observed and compared.Results Compared with the sham group，rats in the model group，the latency were significantly prolonged（P<0.05）；compared with the model group，psoralen group were markedly shorted the incubation period （P<0.05）；and at the same time the psoralen group rats across the platform number were increased significantly，and compared the model group were significant difference （P<0.05）.The SOD contents in the sham group， model group，psoraleae group were （145.30±18.42），（110.49±6.46） and （120.98±7.13）U/gprot，the content of MDA were （2.87±0.44），（4.46±0.63） and （3.19±0.42）nmol/mgprot.Compared with the sham group，SOD content of the model group were significantly decreased，MDA content were increased significantly；and the contents of SOD and MDA in the psoralen group compared to the other groups difference were statistical significance （P<0.05）.Ultrastructural TEM showed that the morphology of pyramidal cells of psoralen group improved，uniform，neatly arranged，clear structure.Conclusion Psoralen in dementia rat ovarian application can improve the SOD enzyme activity，reduce MDA content，thus benefit the brain hippocampus pathological improvement，improve memory ability.

[Key words]Psoralen；Ovariectomized dementia；Hippocampus；Pathology

去卵巢癡呆是最常見的一種進(jìn)行性神經(jīng)變性疾病，病因?yàn)槁殉补δ軉适?，具有特異性神?jīng)病理改變，表現(xiàn)為大腦皮質(zhì)普遍萎縮、神經(jīng)纖維結(jié)、雙螺旋纖維增多等[1-3]。隨著人口老齡化的加劇，去卵巢癡呆的患病率持續(xù)上升。中醫(yī)認(rèn)為去卵巢癡呆是由“腦?？仗摗薄澳I精虧損”所引起的，中藥防治去卵巢癡呆有重要的作用[4]。中草藥補(bǔ)骨脂具有溫腎助陽(yáng)、納氣平喘、溫脾止瀉等功效，補(bǔ)骨脂素屬香豆素類物質(zhì)，是補(bǔ)骨脂中的主要有效成分[5-6]。本文探討補(bǔ)骨脂素對(duì)去卵巢癡呆大鼠腦組織海馬區(qū)的病理形態(tài)學(xué)影響，旨在為后期抗癡呆新藥的設(shè)計(jì)、開發(fā)提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1研究對(duì)象

研究時(shí)間為2013年2月～2016年1月，選擇成年健康雌性清潔級(jí)Sprague-Dawley大鼠30只，動(dòng)物合格證號(hào)：1112016，體重250～280 g，由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。補(bǔ)骨脂素購(gòu)自上海友思生物技術(shù)有限公司，超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒、丙二醛（MDA）試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所（批號(hào)20090702）。

1.2方法

按照隨機(jī)數(shù)字表法將30只Sprague-Dawley大鼠分為模型組、假手術(shù)組、補(bǔ)骨脂素組，每組10只。模型組、補(bǔ)骨脂素組常規(guī)建立去卵巢癡呆模型，補(bǔ)骨脂素組建立模型后連續(xù)灌胃給藥29 d，假手術(shù)組與模型組給予常規(guī)生理鹽水代替，灌胃1次/d。在模型建立中，大鼠用10%的水合氯醛腹腔內(nèi)注射麻醉，經(jīng)脊柱旁切口將雙側(cè)卵巢摘除，然后進(jìn)行正常飼養(yǎng)，連續(xù)檢查7 d未見大鼠動(dòng)情周期表明大鼠造模成功。

1.3觀察指標(biāo)

在Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)中，選擇上海吉量軟件科技有限公司的水迷宮。水迷宮由一黑色正圓形水槽（d=160 cm）組成，水槽中有一圓形平臺(tái)（d=12 cm），水槽中水深沒過平臺(tái)2 cm，水溫24℃左右。將大鼠頭朝水槽按順序依次從四個(gè)象限放入水中，大鼠找到平臺(tái)并在其上停留10 s后，記錄學(xué)習(xí)記憶時(shí)間與3 min內(nèi)穿越平臺(tái)的次數(shù)。

在SOD與MDA測(cè)定中，第29天灌胃給藥后，用10%水合氯醛350 mg/kg腹腔注射麻醉，處死后選擇大鼠腦組織海馬區(qū)進(jìn)行SOD與MDA的檢測(cè)。

在海馬區(qū)神經(jīng)元形態(tài)觀察中，采用超微透射電鏡觀察大鼠海馬區(qū)神經(jīng)元形態(tài)的變化。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用LSD法分析或單因素方差分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1各組大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力的比較

經(jīng)過測(cè)定，與假手術(shù)組比較，模型組大鼠潛伏期明顯延長(zhǎng)（P<0.05）；與模型組比較，補(bǔ)骨脂素組均能明顯縮短潛伏期（P<0.05）；補(bǔ)骨脂素組大鼠穿越平臺(tái)次數(shù)顯著增加，與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

2.2各組大鼠腦組織SOD、MDA含量的比較

與假手術(shù)組比較，模型組SOD含量顯著減少，MDA含量顯著增加；補(bǔ)骨脂素可提高SOD含量，降低MDA含量，三組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

2.3各組病理形態(tài)學(xué)的比較

透射電鏡顯示，模型組大鼠神經(jīng)元核固縮，染色質(zhì)濃縮，核仁結(jié)構(gòu)不清，線粒體嵴缺失呈空洞，線粒體雙層膜結(jié)構(gòu)不清、腫脹，微管腫脹、斷裂。假手術(shù)組神經(jīng)元細(xì)胞核結(jié)構(gòu)清晰，核仁呈圓形居中央，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)形態(tài)未見異常。補(bǔ)骨脂素組錐體細(xì)胞形態(tài)得到改善，排列均一、整齊，結(jié)構(gòu)清晰。

3討論

去卵巢癡呆是一種慢性進(jìn)行性疾病，臨床表現(xiàn)以記憶、認(rèn)知功能缺陷為主，可伴有技能及人格、語(yǔ)言、運(yùn)動(dòng)、視覺空間障礙等[7-8]。從機(jī)制上分析，腦組織是體內(nèi)氧負(fù)荷最大的器官之一，腦組織有著高的糖代謝和呼吸代謝，自由基損傷在腦缺血再灌注損傷中起重要作用，高濃度的不飽和脂肪酸組成腦神經(jīng)元的膜結(jié)構(gòu)，使得腦組織更易受自由基的損傷[9-10]。正常機(jī)體氧自由基產(chǎn)生與清除處于動(dòng)態(tài)平衡，但是由于受各種因素的影響，機(jī)體氧自由基生成增加，內(nèi)源性的自由基清除減少，對(duì)腦組織產(chǎn)生破壞作用[11]。中醫(yī)認(rèn)為腎精在人體生命活動(dòng)中具有重要的地位和作用，采用“補(bǔ)腎生精”的方法能夠有效治療“善忘”“癡呆”等疾病，在延緩和控制疾病的發(fā)展上有很好的效果[12]。補(bǔ)骨脂素為補(bǔ)骨脂中有效成分，屬香豆素類化合物，具有抗氧化、抗炎、抗抑郁、抗菌、抗腫瘤等作用，其中藥有效成分均對(duì)癡呆造成的神經(jīng)元損傷具有保護(hù)作用[13]。本研究顯示，與假手術(shù)組相比，模型組大鼠潛伏期明顯延長(zhǎng)（P<0.05）；與模型組相比，補(bǔ)骨脂素組均能明顯縮短潛伏期（P<0.05）；同時(shí)補(bǔ)骨脂素組大鼠穿越平臺(tái)次數(shù)顯著增加，與模型組比較有顯著性差異（P<0.05）。

有學(xué)者指出，香豆素類物質(zhì)是一類重要的植物雌激素，補(bǔ)骨脂素可能是通過雌激素信號(hào)通路發(fā)揮改善癡呆功能的作用[14]，但具體的作用機(jī)制尚需進(jìn)一步深入研究。MDA是脂質(zhì)體過氧化的主要終產(chǎn)物，其含量可間接反映機(jī)體中自由基水平及脂質(zhì)過氧化反應(yīng)程度，過多的活性氧將會(huì)攻擊DNA、酶類、生物膜類等，最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡。SOD是一種金屬蛋白，可以通過歧化反應(yīng)清除氧自由基，從而保護(hù)細(xì)胞不受毒性氧自由基的損害[15]。本研究顯示，與假手術(shù)組相比，模型組SOD含量顯著減少，MDA含量顯著增加；補(bǔ)骨脂素可提高SOD含量，降低MDA含量，三組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），提示補(bǔ)骨脂素有更強(qiáng)的清理自由基的能力和抗氧化能力。電鏡形態(tài)學(xué)研究也證明，補(bǔ)骨脂素對(duì)大鼠海馬神經(jīng)元結(jié)構(gòu)有一定的保護(hù)作用。

綜上所述，補(bǔ)骨脂素能提高去卵巢癡呆大鼠的SOD氧化酶活性，降低MDA含量，從而有利于腦組織海馬區(qū)的病理形態(tài)學(xué)的改善，提高記憶能力。

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（收稿日期：2016-06-17 本文編輯：王紅雙）