高效液相色譜法測定扶正合劑中補骨脂素和異補骨脂素含量

李 昂

(湖南省湘潭市藥品檢驗所，湖南 湘潭 411100)

扶正合劑是湘潭紅十字建春醫(yī)院的中藥復(fù)方制劑，根據(jù)中醫(yī)驗方研制而成，由補骨脂、黃芪、女貞子、雞血藤等藥材組方，具有扶正固本、提高人體免疫力的作用，用于久病陰虛，配合化學(xué)治療、可促進(jìn)疾病康復(fù)。為了有效地控制藥品質(zhì)量，本試驗中采用高效液相色譜法對補骨脂中補骨脂素和異補骨脂素的含量進(jìn)行測定，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1200型高效液相色譜儀;AUW-20型島津電子天平;UV2501型紫外可見分光光度計(日本島津)。補骨脂素對照品(批號為110739-200814)、異補骨脂素對照品(批號為110738-201012)，均購自中國藥品生物制品檢定所;扶正合劑(醫(yī)院自制，批號為110510，111226，120603);甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其他試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件

色譜柱:Diamonsil C18柱(150 mm ×4．6 mm，5 μm);流動相:甲醇-水(35∶65);流速:1．0 mL/min;檢測波長:246 nm。柱溫:35℃;進(jìn)樣量:10 μL。理論板數(shù)按補骨脂素峰計算不低于3 000，色譜峰分離度大于1．5。

2．2 溶液制備

分別精密稱取補骨脂素對照品14．78 mg和異補骨脂素對照品14．35 mg，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，備用，作為貯備液。分別精密量取貯備液2 mL，置50 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液(補骨脂素0．011 82 g/L，異補骨脂素 0．011 48 g/L)。精密量取 20 mL 樣品，用醋酸乙酯提取4次，每次20 mL，合并提取液，置水浴蒸干，殘渣用甲醇溶解，并轉(zhuǎn)移到25 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2．3 方法學(xué)考察

陰性干擾試驗:按樣品工藝配比制備缺補骨脂的陰性樣品，照供試品溶液制備方法，制備陰性樣品溶液，進(jìn)樣10 μL，測定。結(jié)果陰性樣品對測定無干擾見圖1。

線性關(guān)系考察:分精密量取對照品溶液 2，4，6，8，10 μL，注入高效液相色譜儀進(jìn)行分析，測定峰面積。以對照品進(jìn)樣量(X，μg)為橫坐標(biāo)、峰面積(Y)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，補骨脂素回歸方程為 Y=7．839 5 X+6．110 0(r=0．999 9);異補骨脂素為 Y=7．365 9+3．685 4 X(r=0．999 8)。結(jié)果表明，補骨脂素進(jìn)樣量在23．65 ～118．24 ng范圍內(nèi)，異補骨脂素進(jìn)樣量在 22．96～114．80 ng范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗:精密量取同一對照品溶液(質(zhì)量濃度為32．6 μg/mL)20 μL，連續(xù)進(jìn)樣 6 次。記錄峰面積，結(jié)果的 RSD 為0．7%，表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗:取同一批(批號為111226)樣品，依法制備6份供試品溶液并測定含量。結(jié)果補骨脂素的平均含量為0．031 g/L(RSD=1．3%)，異補骨脂素的平均含量為 0．045 g/L(RSD=0．9%)，表明方法重復(fù)性好。

穩(wěn)定性試驗:取同一供試品溶液10 μL，分別于溶液配制后0，2，4，6，8，10，12，14，16 h 時進(jìn)樣測定。結(jié)果補骨脂素和異補骨脂素峰面積的 RSD分別為1．2%和0．8%(n=9)，表明供試品溶液在16 h內(nèi)穩(wěn)定。

圖1 高效液相色譜圖

加樣回收試驗:稱取已測定含量樣品(批號為110501)10 mL和15 mL，各取3份，精密量取，各加入補骨脂素和異補骨脂素對照品適量，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)樣，計算加樣加收率。結(jié)果見表1。

表1 補骨脂素和補骨脂素加樣回收試驗結(jié)果(n=6)

2．4 樣品含量測定

取3批樣品各2份，分別制備供試品溶液，進(jìn)行測定并計算。結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果

3 討論

取補骨脂素和異補骨脂素對照品貯備液適量，以流動相精密配成含對照品0．4 g/L的溶液，在200～400 nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行紫外掃描，結(jié)果在246 nm波長處有最大吸收。參照文獻(xiàn)[1-2]，采用醋酸乙酯和正丁醇作為提取溶劑，結(jié)果顯示醋酸乙酯提取效果最佳。選用甲醇-水(35∶65)作為流動相，補骨脂素和異補骨脂素峰形良好，保留時間適宜，樣品中補骨脂素和異補骨脂素能達(dá)到基線分離。該方法簡便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可作為扶正合劑質(zhì)量控制的有效方法。

[1]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典(一部)[M]．北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:174．

[2]田永華，錢 葉，俞 圓．HPLC測定腰痛片中補骨脂素和異補骨脂素的含量[J]．中成藥，2007，29(8):12-13．