米力農(nóng)注射液中乳酸含量測(cè)定

朱正兵，梅澤勝，謝金艷

(海南靈康制藥有限公司，海南　?？凇?70311)

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米力農(nóng)注射液中乳酸含量測(cè)定

朱正兵，梅澤勝，謝金艷

(海南靈康制藥有限公司，海南海口570311)

建立了米力農(nóng)注射液中乳酸含量測(cè)定方法。高效液相色譜法，采用ODS-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)色譜柱，以0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH=3.0)為流動(dòng)相A；以磷酸氫二鉀溶液(取磷酸氫二鉀2.7 g，加水800 mL溶解后，加三乙胺2.4 mL，用磷酸調(diào)節(jié)pH=7.5)-乙腈(70:30)為流動(dòng)相B，進(jìn)行梯度洗脫，0～7 min、7～8 min、8～15 min、15～16 min、16～27 min的流動(dòng)相分別為：流動(dòng)相A：100%，流動(dòng)相B：0→100%，流動(dòng)相B：100%，流動(dòng)相A：0→100%，流動(dòng)相A:100%；流速1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm。結(jié)果表明，在198.16～1387.12 μg/mL范圍內(nèi)乳酸的峰面積與濃度具有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r=0.9998，平均回收率為100.42%，RSD 為0.89%。本方法準(zhǔn)確，可靠，重復(fù)性好，可作為米力農(nóng)注射液中檢測(cè)乳酸含量的質(zhì)量控制方法。

米力農(nóng)注射液；乳酸；含量

米力農(nóng)(Milrinone)，化學(xué)名2-甲基-6-氧-1,6-二氫-[3,4′二吡啶]-5-甲腈，是人工合成的雙吡啶化合物，為非洋地黃、非兒茶酚類強(qiáng)心藥，上市的米力農(nóng)注射液均加乳酸調(diào)節(jié)pH值。國(guó)外上市米力農(nóng)注射液說明書(Baxter Healthcare Corporation,Ben Venue Laboratories Inc)[1-2]，均有如下描述：1 mg 米力農(nóng)，用乳酸或氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值至3.2～4.0，乳酸的使用量相當(dāng)于0.95～1.29 mg/mL。為全面把控產(chǎn)品質(zhì)量，保證藥品安全，我們對(duì)米力農(nóng)注射液中的乳酸含量測(cè)定進(jìn)行研究。

[3-5]選擇 HPLC法對(duì)米力農(nóng)注射液中乳酸進(jìn)行含量測(cè)定研究，確定了檢查方法。

1　儀器與試藥

LC-20AT高效液相色譜儀，SPD-20A紫外檢測(cè)器，LC-Solution色譜工作站，日本島津公司。

乳酸工作對(duì)照品(分析純，批號(hào)：D20111210，含量：99.7%);米力農(nóng)注射液，海南靈康制藥有限公司(批號(hào)：140601，140602，140603)。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件

色譜柱：C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm，ODS柱，月旭科技股份有限公司)；以0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH=3.0)為流動(dòng)相A；磷酸氫二鉀溶液(取磷酸氫二鉀2.7 g，加水800 mL溶解后，加三乙胺2.4 mL，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至7.5)-乙腈(70:30)為流動(dòng)相B；流速為1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm。梯度洗脫條件見表1。

表1　梯度洗脫條件

2.2專屬性試驗(yàn)

以水為空白溶劑；精密稱取處方量米力農(nóng)(1.0 mg/mL)和無水葡萄糖(47 mg/mL)，按制劑方法分別制備米力農(nóng)空白溶液和無水葡萄糖空白溶液；精密稱取乳酸工作對(duì)照品加水制成1.0 mg/mL的溶液為乳酸定位溶液；取制備的米力農(nóng)注射液(批號(hào)：140601)為供試品溶液。分別精密量取上述各溶液20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖(見圖1)。結(jié)果表明，空白溶劑、無水葡萄糖和米力農(nóng)在乳酸峰相應(yīng)位置無吸收峰，對(duì)乳酸的測(cè)定沒有干擾。

圖1　專屬性試驗(yàn)色譜圖

2.3系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

參考文獻(xiàn)[4]對(duì)乳酸和冰醋酸進(jìn)行分離度考察，以確定方法的可行性。精密量取冰醋酸0.2 mL，置25 mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，精密量取1 mL置50 mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，作為冰醋酸對(duì)照品溶液，精密稱取乳酸工作對(duì)照品約635 mg，精密稱定，置25 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取2 mL，置50 mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，作為乳酸對(duì)照品溶液；取冰醋酸對(duì)照品溶液和乳酸對(duì)照品溶液各5 mL，混合均勻，作為混合溶液；精密量取上述各種溶液及樣品溶液20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖(見圖2)。結(jié)果表明，乳酸出峰時(shí)間為5.794 min，冰醋酸出峰時(shí)間為6.587 min；兩者之間的分離度為4.623；符合系統(tǒng)適用性試驗(yàn)規(guī)定。

圖2　系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色譜圖

2.4線性關(guān)系與范圍

精密稱取乳酸工作對(duì)照品99.08 mg，置50 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。分別精密量取貯備液1、2、3、4、5、6、7 mL置10 mL量瓶中，加水定容至刻度，搖勻，即得濃度為20%、40%、60%、80%、100%、120%、140%等系列溶液，精密量取各溶液20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸(見表2)。結(jié)果表明，在198.16～1387.12 μg/mL范圍內(nèi)，乳酸濃度與峰面積線性關(guān)系良好。

表2　乳酸線性關(guān)系測(cè)定結(jié)果

2.5精密度試驗(yàn)

精密量取線性試驗(yàn)項(xiàng)下的貯備液5 mL，置10 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，照上述色譜條件，精密量取20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，重復(fù)進(jìn)樣6次，結(jié)果見表3。

表3　精密度試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果表明，重復(fù)進(jìn)樣6次的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)小于1%，本方法重復(fù)性試驗(yàn)良好。

2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密量取線性試驗(yàn)項(xiàng)下的貯備液5 mL，置10 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，照上述色譜條件，分別于0、2、4、6、8 h精密量取20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果見表4。結(jié)果表明，乳酸溶解在水中，室溫下放置8 h很穩(wěn)定(峰面積RSD為0.33%)。

表4　穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

2.7重復(fù)性試驗(yàn)

取制備的米力農(nóng)注射液(批號(hào)：140601)作為供試品溶液；另精密稱取乳酸工作對(duì)照品適量(約相當(dāng)于乳酸50 mg)，置50 mL量瓶中，加水溶解并稀釋制成每1 mL中約含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液，分別精密量取對(duì)照品溶液和供試品溶液各20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法計(jì)算6份樣品中乳酸的含量。試驗(yàn)結(jié)果見表5。結(jié)果表明，本方法重復(fù)性試驗(yàn)良好(6份樣品乳酸含量RSD為0.69%)。

表5　乳酸測(cè)定重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

2.8定量線的測(cè)定

在上述色譜條件下，取線性試驗(yàn)項(xiàng)下貯備液逐級(jí)稀釋，按信噪比為10:1對(duì)最低定量線進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果表明，乳酸定量限為0.02 ng(0.001 μg/mL×20 μL)；重復(fù)進(jìn)樣6次，保留時(shí)間RSD為0.11%，峰面積RSD為2.80%。

2.9回收率試驗(yàn)

2.9.1供試品溶液的制備

分別精密稱取乳酸工作對(duì)照品(約相當(dāng)于20 mg、25 mg、30 mg)，各3份，置25 mL量瓶中，分別加入米力農(nóng)注射液處方中各成份的處方量[米力農(nóng)(25 mg)、無水葡萄糖(1175 g)]，加水適量80℃加熱使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得含乳酸濃度相當(dāng)于80%、100%、120%的供試品溶液。

2.9.2對(duì)照品溶液的制備

精密稱取乳酸工作對(duì)照品適量(約相當(dāng)于乳酸50 mg)，置50 mL量瓶中，加水溶解并稀釋制成每1 mL中約含1 mg的溶液，搖勻，即得對(duì)照品溶液。

2.9.3測(cè)試

精密量取上述供試品溶液及對(duì)照品溶液各20 μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算測(cè)得量，按測(cè)得量與投入量的比值計(jì)算回收率。結(jié)果見表6。試驗(yàn)結(jié)果表明方法準(zhǔn)確度好，回收率在98%～102%之間；RSD小于2.0%。

表6　乳酸回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.10三批制備樣品乳酸含量測(cè)定

取制備的3批米力農(nóng)注射液，作為供試品溶液。精密稱取乳酸工作對(duì)照品適量，加水溶解并稀釋制成每1 mL中約含1 mg 的溶液，作為對(duì)照品溶液。精密量取對(duì)照品溶液和供試品溶液各20 μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法計(jì)算乳酸的含量。結(jié)果表明，制備的3批米力農(nóng)注射液含乳酸的量均在0.95～1.29 mg/mL范圍內(nèi)[3]。

表7　三批米力農(nóng)注射液制備樣品中乳酸含量測(cè)定結(jié)果

3　討　論

(1)米力農(nóng)注射液為非洋地黃、非兒茶酚類強(qiáng)心藥，上市產(chǎn)品有用鹽酸、乳酸等調(diào)節(jié)pH值，其中多采用加乳酸調(diào)節(jié)pH值，通常調(diào)節(jié)的pH值范圍為3.2～4.0，在米力農(nóng)注射液現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)[5]中并沒有規(guī)定乳酸的使用量范圍，給產(chǎn)品質(zhì)量帶來一定風(fēng)險(xiǎn)。

(2)文獻(xiàn)[4]規(guī)定了乳酸的限量范圍，但測(cè)定方法中樣品的處理比較復(fù)雜，本文提出了一種米力農(nóng)注射液中乳酸的含量測(cè)定方法，與文獻(xiàn)[4]方法相比，樣品無需進(jìn)行強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹脂柱處理，直接進(jìn)行測(cè)定，操作方便；通過專屬性試驗(yàn)，系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，線性試驗(yàn)，精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗(yàn)，回收率試驗(yàn)等方法學(xué)研究，證明本方法可以很好的檢測(cè)米力農(nóng)注射液中乳酸的含量。

(3)乳酸在米力農(nóng)注射液中的作用是助溶劑和pH值調(diào)節(jié)劑，乳酸的含量與米力農(nóng)注射液的pH值密切相關(guān)，pH值的變化情況一定程度上反應(yīng)出乳酸的含量，在一定程度上影響米力農(nóng)注射液質(zhì)量。為全面保證米力農(nóng)注射液產(chǎn)品質(zhì)量，建議將乳酸含量測(cè)定指標(biāo)列入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

參考文獻(xiàn)

[1]Drugs @ FDA.Label Information[OL].http://www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/label/2002/75834_Milrinone%20Lactate_Prntlbl.pdf.

[2]Drugs @ FDA.Label Information[OL].http://www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/label/2002/75660_Milrinone%20Lactate_Prntlbl.pdf.

[3]毛淑杰,李先瑞,馬志靜.HPLC測(cè)定中藥炮制輔料醋中乳酸的含量[D].中成藥,2007，29(2):243-247.

[4]國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn).JX20090327 乳酸米力農(nóng)注射液進(jìn)口藥品注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)[S].

[5]國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn).新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)[S].第73冊(cè):106-107.

Determination of Lactic Acid in Milrinone Injection

ZHU Zheng-bing，MEI Zhe-sheng，XIE Jin-yan

(Hainan Lingkang Pharmaceutical Co.,Ltd.,Hainan Haikou 570311,China)

To establish an assay of determination of lactic acid in milrinone injection,HPLC was carried out on a ODS-C18column (4.6 mm×250 mm,5 μm) column,the mobile phase A consisted of 0.05 mol/L potassium dihydrogen phosphate solution(with phosphoric acid to adjust the pH to 3.0),the mobile phase B consisted of dipotassium hydrogen phosphate solution(taking dipotassium hydrogen 2.7 g,adding water 800 mL dissolved and triethylamine 2.4 mL,with phosphoric acid to adjust the pH to 7.5)-acetonitrile(70:30),gradient elution,0～7 min,7～8 min,8～15 min,15～16 min,16～27 min of the mobile phase were as follows:mobile phase A:100%,mobile phase B:0→100%,mobile phase B:100%,mobile phase A:0→100%,mobile phase A:100%,with the flow rate of 1.0 mL/min,the detection wavelength was 210 nm.The results showed that the standard curve was in good linearity in the range of 198.16～1387.12 μg/mL,r=0.9998 for determination of its related substances.The average recovery was 100.42%，RSD was 0.89%.The method is accurate,reliable,reproducible and can be used for quality control of lactic acid in milrinone injection.

milrinone injection;lactic acid;content

朱正兵(1970-)，男，工程師，主要從事藥物研發(fā)和應(yīng)用。

R

B

1001-9677(2016)04-0081-04