穩(wěn)定沉默TIPE2后削弱Poly I：C誘導(dǎo)的人單核/巨噬細(xì)胞凋亡

江潔曙　王珊珊　方晶晶　徐　意　葉小磊.寧波大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院ICU，浙江寧波　3500；.寧波大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院急診科，浙江寧波　3500；3.寧波市醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所，浙江寧波　3500

穩(wěn)定沉默TIPE2后削弱Poly I：C誘導(dǎo)的人單核/巨噬細(xì)胞凋亡

江潔曙1王珊珊1方晶晶1徐意2葉小磊3▲
1.寧波大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院ICU，浙江寧波315020；2.寧波大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院急診科，浙江寧波315020；3.寧波市醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所，浙江寧波315020

目的觀察TIPE2穩(wěn)定沉默后對TLR激動劑Po1y I：C誘導(dǎo)THP-1凋亡的影響。方法以THP-1細(xì)胞為研究對象，使用不同TLR激活劑與THP-1細(xì)胞孵育后，采用熒光定量PCR檢測TIPE2 mRNA表達(dá)。應(yīng)用慢病毒技術(shù)穩(wěn)定沉默TIPE2表達(dá)后，MTT法檢測細(xì)胞增殖，Annexin V/PI雙染法檢測細(xì)胞凋亡，免疫印跡分析TIPE2沉默后Caspase-8表達(dá)水平變化。 結(jié)果TLRs激活劑中TLR3特異性激活劑Po1y I：C可以顯著上調(diào)TIPE2的表達(dá)（P＜0.05），隨作用時間延長，可顯著抑制THP-1細(xì)胞增殖，并可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。利用慢病毒技術(shù)穩(wěn)定沉默THP-1細(xì)胞中TIPE2表達(dá)以后，可顯著削弱Po1y I：C誘導(dǎo)的TIPE2表達(dá)（P＜0.05），TIPE2沉默后，Po1y I：C抑制THP-1增殖和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的效應(yīng)顯著削弱，隨后免疫印跡的結(jié)果顯示，Caspase-8的活化形式，p41/42表達(dá)下調(diào)。結(jié)論Po1y I：C通過上調(diào)TIPE2表達(dá)可抑制THP-1細(xì)胞增殖，并可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，穩(wěn)定沉默TIPE2后可一定程度削弱上述效應(yīng)，可能與下調(diào)Caspase-8的活性形式表達(dá)有關(guān)。

Poly I：C；TIPE2；免疫；TLR；凋亡

［Abstract］Objective To investigate the inf1uence of stab1y si1ent TIPE2 on THP-1 apoptosis induced by TLR agonist Po1y I：C.Methods THP-1 ce11s were se1ected as the study subjects.The expression of TIPE2 mRNA was detected by f1uorogenic quantitative PCR after incubation of THP-1 ce11s with different TLR activating agents.After stab1e si1ence of TIPE2 by 1entivira1 technique，the ce11 pro1iferation was detected by MTT，apoptosis was detected by Annexin V/PI doub1e-staining method，and changes of Caspase-8 expression 1eve1 after si1ence of TIPE2 was ana1yzed by western b1ot.Results TLR3 specific activator Po1y I：C cou1d significant1y up-regu1ate the expression of TIPE2（P＜0.05）.A1ong with the time of action，it cou1d significant1y inhibit the pro1iferation of THP-1，and induce apoptosis.Stab1e si1ence of TIPE2 in THP-1 by 1entivira1 technique cou1d significant1y impair the TIPE2 expression induced by Po1y I：C（P＜0.05）. After si1ence of TIPE2，the effects of Po1y I：C on inhibition the pro1iferation of THP-1 and induction of apoptosis were significant1y impaired，and the resu1t of fo11owing western b1ot showed active form of Caspase-8 and down-regu1ation of p41/42 expression.Conclusion By up-regu1ating the expression of TIPE2，Po1y I：C can inhibit the pro1iferation of THP-1，and induce apoptosis，which can be partia11y impaired by stab1e si1ence of TIPE2，possib1y due to down-regu-1ation of Caspase-8 active form expression.

［Key words］Po1y I：C；TIPE2；Immune；TLR；Apoptosis

免疫系統(tǒng)內(nèi)穩(wěn)態(tài)的維護機制極其復(fù)雜和神秘，改變調(diào)控免疫細(xì)胞死亡或者活化擴增免疫細(xì)胞均可以打破免疫細(xì)胞的內(nèi)穩(wěn)態(tài)環(huán)境，最終帶來極為致命的炎性疾病，目前研究發(fā)現(xiàn)一組超家族蛋白對免疫系統(tǒng)的內(nèi)穩(wěn)態(tài)維持至關(guān)重要。尤其是具有hexahe1ica1 bund1e結(jié)構(gòu)的蛋白稱之為死亡效應(yīng)domain（DED），與Caspase家族蛋白的CARD結(jié)構(gòu)域以及募集區(qū)域有結(jié)構(gòu)類似，參與到細(xì)胞死亡和其他的信號通路中。

TIPE中壞死因子誘導(dǎo)蛋白8-類似蛋白2作為這類家族蛋白的成員之一，近年來，在機體免疫的內(nèi)穩(wěn)態(tài)中扮演重要作用，其主要機制與調(diào)控T細(xì)胞受體和To11樣受體信號通路有關(guān)，除了在炎癥組織中表達(dá)外，TIPE2還在髓樣組織和多種腫瘤細(xì)胞中表達(dá)，說明其中可能發(fā)揮著不同的功能［1］。有報道顯示，TIPE2可以調(diào)控To11樣受體（To11-1ike receptor，TLR）的表達(dá)，并對周圍不同的刺激信號強度產(chǎn)生響應(yīng)［2］。但是上游TLR的活化是否也可以影響TIPE2的表達(dá)，是否可以影響人單核/巨噬細(xì)胞活性和增殖？尚未見有相關(guān)的報道。本項目于2014年1月～2015年12月期間，以人單核細(xì)胞株THP-1為考察對象，考察不同TLR激動劑對TIPE2表達(dá)的影響，并探討相關(guān)的分子機制。

1　材料與方法

1.1細(xì)胞培養(yǎng)和TLR激動劑處理

人THP-1細(xì)胞購自中國科學(xué)院上海細(xì)胞庫。新生牛血清，DMEM培養(yǎng)基和0.25%胰蛋白酶購自美國Life techno1ogy公司；人TLR1-9激動劑購自Invivo-Gen公司，抗人TIPE2和Caspase-8抗體購自Abcam公司。其余試劑均為國產(chǎn)分析純。THP-1細(xì)胞培養(yǎng)在含有10%胎牛血清以及100 U/mL青-鏈霉素霉素的DMEM培養(yǎng)液中，置于含有5%CO2，37℃培養(yǎng)箱中，每隔2～3天換液。取對數(shù)生長期細(xì)胞進行實驗。細(xì)胞計數(shù)后將試劑盒中的TLR1-9特異性激動劑用培養(yǎng)液稀釋后使用，終濃度分別為0.1 μg/mL和1 μg/mL，孵育24 h后，Trizo1裂解細(xì)胞，提取RNA，按照方法1.6中的描述檢測TIPE2 mRNA表達(dá)水平。

1.2細(xì)胞抑制實驗

細(xì)胞抑制率使用四甲基偶氮噻唑藍(lán)法（meth1thiazo1etrazo1ium assay，MTT assay），將THP-1細(xì)胞以1× 104/mL密度接種于6孔或12孔板，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后，Po1y I：C配置成10 mg/mL儲液，使用時用完全培養(yǎng)稀釋，加入到細(xì)胞中使得終濃度分別為0.1 μg/mL、1 μg/mL，設(shè)置空白對照組。于24 h后收集細(xì)胞，加入5 mg/mL的MTT溶液，37℃孵育4 h后，棄上清每孔加150 μL DMSO后在酶標(biāo)儀上570 nm處讀取吸光值（OD）。實驗重復(fù)3次。計算抑制率=（1-ODP1oyI：C/OD空白對照組）×100%。穩(wěn)定沉默TIPE2后的細(xì)胞抑制率基本方法同上，實驗前1 d細(xì)胞按1×104/孔鋪96孔板，設(shè)shTIPE2穩(wěn)定沉默組（經(jīng)過嘌呤霉素篩選后穩(wěn)定沉默TIPE2的THP-1細(xì)胞），shScramb1e組（經(jīng)過嘌呤霉素篩選后的空白載體組），加入Po1y I：C后孵育24 h后加入MTT檢測細(xì)胞在570 nm處的吸光度值變化。

1.3慢病毒載體構(gòu)建以及穩(wěn)定沉默TIPE2細(xì)胞株建立

將合成好的shRNA寡核苷酸序列 （共設(shè)計3對TIPE2 shRNA寡核苷酸序列，委托上海生工生物合成得到，具體序列如下：

退火形成雙鏈DNA片段。與雙酶切線性化后的pLKO.1-TRC載體（含GFP編碼序列）連接。取4 μL所得的連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化DH5α感受態(tài)細(xì)胞，37℃恒溫培養(yǎng)過夜。挑取3個單克隆菌落接種至Ampici11in抗性的LB培養(yǎng)液中，小搖過夜。用試劑盒小量提取質(zhì)粒后，分別用EcoRI和NcoI酶切鑒定，產(chǎn)物進行1%瓊脂糖凝膠電泳。鑒定正確的質(zhì)粒命名為：pLKO.1-TRCTIPE2-shRNA1。將酶切鑒定正確的細(xì)菌送測序以進一步確認(rèn)序列。

病毒包裝時，轉(zhuǎn)染前1 d對293T細(xì)胞進行分皿。使用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將含shTIPE2或shScramb1e質(zhì)粒，分別同pΔ8.91及pMD2.G這2個包裝質(zhì)粒按照10：10：1的質(zhì)量比混合后，共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞。12 h后更換完全培養(yǎng)基。37℃培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)，并在熒光顯微鏡下觀察熒光表達(dá)情況。48～72 h期間收集上清，0.45 μm濾器過濾后備用。感染時，取對數(shù)生長期THP-1細(xì)胞，接種于6孔板培養(yǎng)12 h后，棄上清每孔滴加含病毒液體200 μL，加入含po1ybrene（濃度4 μg/mL）的培養(yǎng)基，感染8 h后換普通培養(yǎng)基；48 h后加含嘌呤霉素（濃度0.5 μg/mL）的培養(yǎng)基，隔2 d更換該培養(yǎng)基。3次篩選后加普通培養(yǎng)基培養(yǎng)24 h后收集細(xì)胞于培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，進行后續(xù)實驗。

1.4細(xì)胞凋亡檢測

對細(xì)胞凋亡分析，使用細(xì)胞凋亡檢測試劑盒（Becton Dickinson公司，美國）進行膜聯(lián)蛋白V-FITC/PI雙染色。以不同濃度的Po1y I：C處理24 h處理后，收集THP-1細(xì)胞，PBS漂洗一遍后，300 μL結(jié)合緩沖液重懸細(xì)胞，加入FITC標(biāo)記膜聯(lián)蛋白V和碘化丙啶（PI）各5 μL，避光孵育15 min，隨后在細(xì)胞懸液中再加入200 μL結(jié)合緩沖液，過200目尼龍網(wǎng)后通過BDAccuriTMC6流式細(xì)胞分析。利用單染Annexin V和PI的細(xì)胞設(shè)門后，統(tǒng)計凋亡細(xì)胞和存活細(xì)胞比例。

1.5熒光定量PCR

收集各組細(xì)胞，用Trizo1提取細(xì)胞總RNA，使用MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。以各組cDNA為模板，加入緩沖液、引物等進行PCR，各樣本重復(fù)3次。TIPE2：上游引物序列5’-GGA ACA TCC AAG GCA AGA CTG-3’-，下游引物序列5’-AGC ACC TCA CTG CTT GTC TCA TC-3’；GAPDH作為內(nèi)參對照序列上游引物5’-GT CGT ATT GGG CGC CTG GTC ACC-3’，下游引物5’-CAC ACC CAT GAC GAA CAT GGG GGC-3’。20 μL反應(yīng)體系中包括2×SYBR? Premix Ex TaqTMII 10 μL，上游引物（10 μM）0.5 μL，下游引物 （10 μM）0.5 μL，cDNA 1 μL，ddH2O 8 μL，反應(yīng)條件95℃預(yù)變性3 min，以下步驟進行30個循環(huán)：95℃變性10 s，55℃退火30 s，72℃延伸30 s。每份標(biāo)本設(shè)3個復(fù)孔，取其循環(huán)閾值（Ct）均值，分別計算各組的ΔCt（Ct目的基因-Ct內(nèi)參基因），再以正常組為1進行均一化，以2-ΔΔCt表示基因的相對表達(dá)水平。

1.6免疫印跡

THP-1細(xì)胞經(jīng)Po1y I：C處理24 h后，冷PBS漂洗一遍，RIPA裂解細(xì)胞，收集蛋白并用BCA法測定蛋白濃度。按20 μg/泳道蛋白量進行SDS-PAGE電泳，轉(zhuǎn)膜并用脫脂牛奶封閉后，加入抗TIPE2抗體（1：2000）和β-actin（1：4000）抗體于4℃孵育過夜。取出膜用TBS-T漂洗3次后，將膜和相應(yīng)2抗（1：5000）在搖床上室溫孵育1 h，取出膜后TBS-T漂洗3次后，加入ECL化學(xué)發(fā)光試劑顯色后，用LI-COR免疫印跡成像系統(tǒng)進行掃描，GAPDH條帶為內(nèi)參。

1.7統(tǒng)計學(xué)分析

應(yīng)用GraphPad Prism軟件進行差異顯著性分析。實驗結(jié)果數(shù)據(jù)為3次獨立實驗均值，計量結(jié)果用均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，符合正態(tài)分布，則兩組間比較根據(jù)數(shù)據(jù)類型采用獨立樣本t檢驗，多組間比較用ANOVA方差分析；若不符合正態(tài)分布，則采用非參數(shù)Mann-Whitney檢驗。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1不同TLR激活劑對TIPE2表達(dá)的影響

從封三圖1A中來看，TIPE2受到Po1y I：C活化的影響，其他特異性激動劑也有一定的變化，但是Po1y I：C對TIPE2的上調(diào)作用（相對表達(dá)強度在0.1 μg/mL和1 μg/mL時候分別為（0.80±0.06）和（2.30± 0.21）最為顯著，Po1y I：C主要為TLR3的激動劑。既往有研究顯示，Po1y I：C可抑制多種細(xì)胞的增殖，并可誘導(dǎo)凋亡［3］，利用MTT實驗檢測不同濃度Po1y I：C對THP-1細(xì)胞抑制率的影響，結(jié)果如封三圖1B和1C所示，Po1y I：C可對THP-1細(xì)胞有顯著的抑制，在1 μg/mL時候其抑制率可到達(dá)42%，同時隨著作用時間的延長抑制率逐漸上調(diào)。隨后，用Annexin V/PI雙染檢測Po1y I：C作用后對THP-1細(xì)胞凋亡的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨Po1y I：C濃度增加凋亡細(xì)胞逐漸增加而存活細(xì)胞顯著減少，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見封三圖1D。

2.2TIPE2穩(wěn)定沉默細(xì)胞株建立

既往研究顯示，TIPE2可能參與Caspase-8的活化，因此為了證實TLR3特異性抑制Po1y I：C對THP-1的抑制和誘導(dǎo)凋亡可能與TIPE2的上調(diào)有關(guān)，通過慢病毒技術(shù)穩(wěn)定沉默THP-1細(xì)胞中TIPE2的表達(dá)，如封三圖2A所示，將構(gòu)建好的載體轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞DH5a后，小抽得到質(zhì)粒，并驚醒酶切鑒定，原質(zhì)粒在酶切后的片段大小應(yīng)為7872、2155和190 bp，而接入shRNA后熒光為7872、190、303和42，對于酶切正確的質(zhì)粒送去測序進行驗證（封三圖2B），取正確的質(zhì)粒大抽以后去內(nèi)毒素用于轉(zhuǎn)染包裝病毒用。如封三圖2C所示，得到的病毒滴度較高，可以較好的感染THP-1細(xì)胞，隨后對TIPE2用免疫印跡進行驗證后如封三圖2D所示，設(shè)計的3個shRNA都可以比較好的沉默TIPE2的表達(dá)。

2.3TIPE2沉默后對Poly I：C誘導(dǎo)凋亡的影響

如封三圖3所示，用Po1y I：C處理穩(wěn)定沉默TIPE2的 THP-1細(xì)胞后發(fā)現(xiàn)，shScramb1e組中的TIPE2對Po1y I：C依然有很好的響應(yīng)，可以顯著上調(diào)TIPE2的表達(dá)，而在shTIPE2組，Po1y I：C對TIPE2的mRNA上調(diào)作用被顯著削弱。隨后比較shScramb1e組和shTIPE2組在Po1y I：C處理后對細(xì)胞抑制率的影響，結(jié)果顯示shScramb1e組的細(xì)胞抑制率為（41.2± 4.3）%，而在shTIPE2組為（16.0±2.3）%，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。隨后利用流式細(xì)胞檢測凋亡情況發(fā)現(xiàn)，在Po1y I：C處理24 h后，shTIPE2組中凋亡細(xì)胞比例為（15.2±1.6）%，而在shScramb1e組中為（32.2± 3.9）%，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。提示TIPE2穩(wěn)定沉默后可顯著削弱由Po1y I：C誘導(dǎo)的THP-1的凋亡。隨后，分析Caspase-8的表達(dá)情況發(fā)現(xiàn)，在shTIPE2組中，活化形式p41/42表達(dá)下調(diào)。

3　討論

TLR是一類介導(dǎo)天然免疫的跨膜信號傳遞受體家族，在細(xì)胞活化信號的轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮重要作用，是聯(lián)系天然免疫與適應(yīng)性免疫的橋梁。近年來，研究表明TLR介導(dǎo)的天然免疫在病毒誘導(dǎo)的炎性細(xì)胞損傷過程中同樣具有重要意義。TLR3是TLR家族中的重要成員，由胞外富含亮氨酸的重復(fù)序列、膜結(jié)構(gòu)域和胞質(zhì)內(nèi)激酶結(jié)構(gòu)域組成［4］。能夠特異性的識別致病性病毒的雙鏈dsRNA。雙鏈RNA（doub1e stranded RNA，dsRNA）是TLR3所識別的病原相關(guān)分子模式（PAMP），多種病毒在復(fù)制期間可以產(chǎn)生大量的dsRNA，因此，TLR3可以作為機體抗病毒的重要防線。TLR3不僅在宿主抗病毒過程中具有重要作用，而且還與一些自身免疫病的發(fā)生存在密切關(guān)系。近期研究發(fā)現(xiàn)，壞死細(xì)胞釋放的RNA或體外轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的mRNA同樣可以活化TLR3，提示體內(nèi)壞死組織釋放的RNA可以作為TLR3的內(nèi)源性配體啟動或調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答。由于大部分自身免疫病并未發(fā)現(xiàn)與病毒感染具有直接聯(lián)系，因此，內(nèi)源性配體對TLR3的活化在自身免疫病的發(fā)病機制中可能具有重要意義。

腫瘤壞死因子-α誘導(dǎo)蛋白-8樣分子2（tumor necrosis factor-α induced protein 8 1ike-2，TIPE2）作為一種新發(fā)現(xiàn)的蛋白分子，與腫瘤壞死因子誘導(dǎo)蛋白-8家族成員擁有某些共有序列，TIPE2選擇性表達(dá)的在淋巴源性和髓源性免疫細(xì)胞中，對固有免疫和細(xì)胞免疫起到負(fù)性調(diào)控作用?？梢种萍せ钷D(zhuǎn)錄因子ap-1 和nf-kb的活化［2，5］。與小鼠主要在淋巴細(xì)胞中表達(dá)所不同的是，tipe2在人體的多數(shù)組織中都有表達(dá)，比如干細(xì)胞、神經(jīng)元腦組織和腦干中、食管以及宮頸的鱗狀上皮細(xì)胞中、膀胱和尿道的交界處、結(jié)腸、胃腺上皮細(xì)胞、結(jié)腸、闌尾中都有表達(dá)［6］。尤其在終末分化的細(xì)胞中為高表達(dá)，前體細(xì)胞表達(dá)下調(diào)，提示一方面與增殖有關(guān)，一方面與分化以及相關(guān)蛋白的形成有關(guān)。tipe2在多個疾病中都呈現(xiàn)異常表達(dá)，包括肝炎［7］、肝癌、中風(fēng)［8］、腎排異反應(yīng)［9］、HCV、哮喘［10］、重癥肌無力［11］、紅斑狼瘡［12］等?；颊叩耐庵苎衪ipe2的表達(dá)在多種自身免疫性疾病中都是下調(diào)的，提示免疫細(xì)胞處于高度活化狀態(tài)。通過特異性誘導(dǎo)免疫細(xì)胞中TIPE2的表達(dá)，或許有助于減少抑制自身免疫細(xì)胞活性，減少對正常組織的損傷。

有研究顯示內(nèi)源性TLR3的激活劑，Po1y I：C可以誘導(dǎo)多種細(xì)胞的凋亡，如膽管上皮細(xì)胞，進而可能在肝硬化炎性損傷中發(fā)揮作用［13］。外源性的或者內(nèi)源性的dsRNA可以通過TLR3或IRF-3途徑誘導(dǎo)多種細(xì)胞死亡，如胰腺β細(xì)胞死亡［14］、前列腺癌［15］、唾液腺上皮細(xì)胞［16］。TLR3是模式識別受體，所引起的凋亡主要與Caspase-8有關(guān)［17］。TIPE2作為Caspase-8重要的伴侶蛋白，在其活性的發(fā)揮中扮演重要作用，因此可以認(rèn)為Po1y I：C刺激TLR3活化后所引起的細(xì)胞凋亡中，其中一個途徑為通過活化Caspase-8和TIPE2實現(xiàn)。此外，在腫瘤中的研究顯示［18］，TIPE2在多種腫瘤中表達(dá)下調(diào)，且tipe2是ras的主要抑制因子，通過抑制Ra1gds后抑制ras復(fù)合物的形成，最后引起ra1和akt的抑制，如果上調(diào)以后則可引起ras活性下降，細(xì)胞增殖下降，遷移減少。因此，我們推斷Po1y I：C刺激活化t1r3以后通過上調(diào)tipe2的表達(dá)，可能還可進一步引起ras的抑制，從而抑制細(xì)胞增殖，并可能影響細(xì)胞的遷移，吞噬和抗菌的能力。tipe2缺失后肝癌細(xì)胞增殖和遷移速度加快，并可以抑制細(xì)胞胞吐，而過量表達(dá)tipe2以后則可以抑制體內(nèi)外肝癌細(xì)胞則增殖遷移和侵襲［19，20］，后續(xù)研究顯示和rac1和減少F-actin以及MMP-9，以及uPA的活化有關(guān)，我們在研究中也觀察到沉默tipe2后，thp-1細(xì)胞增殖加快，與既往研究相吻合［19，20］。

因此，TIPE2不僅在自身免疫系統(tǒng)疾病中扮演重要作用，同時在腫瘤的發(fā)展中也具有一定的意義，人為上調(diào)TIPE2在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)可能有助于抑制癌細(xì)胞增殖和遷移，但是也有可能影響免疫細(xì)胞的活化，因此，如果將TIPE2作為藥物靶點開發(fā)腫瘤治療藥物時，應(yīng)該注意到對正常免疫系統(tǒng)的負(fù)面影響。

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Human monocyte/macrophage apoptosis induced by impaired Poly I：C after stable silence of TIPE2

JIANG Jieshu1WANG Shanshan1FANG Jingjing1XU Yi2YE Xiaolei3
1.ICU，the Affi1iated Hospita1 of Ningbo University Medica1 Co11ege，Ningbo315020，China；2.Department of Emergency，the Affi1iated Hospita1 of Ningbo University Medica1 Co11ege，Ningbo315020，China；3.Ningbo Medica1 Science Institute，Ningbo315020，China

R392

A

1673-9701（2016）16-0001-05

浙江省寧波市社會發(fā)展基金支持（2013C50043）

2016-02-19）