非酒精性脂肪肝患者肝組織中Irisin的表達(dá)*

馬圓圓，吳　雪，劉曉鋼，張麗俠，李　姍，王亭亭，王志芳，李　沖，李靜怡，韓　超，李付廣，鄭麗麗#

1)鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院內(nèi)分泌科 鄭州 450052　2)河南省高等學(xué)校臨床醫(yī)學(xué)重點(diǎn)學(xué)科開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室 鄭州 450052　3)鄭州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)教研室 鄭州 450001

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非酒精性脂肪肝患者肝組織中Irisin的表達(dá)*

馬圓圓1,2)，吳雪1,2)，劉曉鋼1)，張麗俠1)，李?yuàn)?)，王亭亭1)，王志芳1)，李沖1)，李靜怡1)，韓超1)，李付廣3)，鄭麗麗1)#

1)鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院內(nèi)分泌科 鄭州 4500522)河南省高等學(xué)校臨床醫(yī)學(xué)重點(diǎn)學(xué)科開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室 鄭州 4500523)鄭州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)教研室 鄭州 450001

摘要目的：探討Irisin在非酒精性脂肪肝(NAFLD)患者肝穿刺組織中的表達(dá)及其意義。方法：回顧性分析病理活檢確診的非酒精性單純性脂肪肝(NAFL,n=56)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH,n=75)患者及無(wú)脂肪變和脂肪性肝炎的正常者(n=20)的臨床資料，免疫組化SP法檢測(cè)各組肝穿刺組織中Irisin的表達(dá)水平。結(jié)果：3組年齡及性別構(gòu)成比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與正常對(duì)照組相比，NAFL組及NASH組存在脂質(zhì)代謝異常。NAFL組和NASH組肝組織中Irisin表達(dá)水平高于對(duì)照組(P<0.05)，但NAFL組和NASH組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論：Irisin可能是一種補(bǔ)償性調(diào)節(jié)肝臟脂質(zhì)蓄積的因子。

隨著肥胖的普遍流行，非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD)的發(fā)病率也迅速增長(zhǎng)，其在中國(guó)發(fā)達(dá)地區(qū)約為15%，較10 a前增加了一倍[1]。作為一種以肝細(xì)胞內(nèi)脂肪過(guò)度沉積為主要病理特征的臨床綜合征，NAFLD的病因及發(fā)病機(jī)制仍不完全清楚，目前并無(wú)特效藥物。研究[1-2]顯示，肥胖、胰島素抵抗及血脂紊亂等代謝綜合征是NAFLD發(fā)生的高危因素。Irisin是一種新發(fā)現(xiàn)的代謝調(diào)節(jié)因子，因其在改善肥胖、調(diào)節(jié)糖脂代謝方面的重要作用而成為研究熱點(diǎn)。臨床研究[3]發(fā)現(xiàn)，NAFLD患者血清中Irisin水平升高，且與胰島素抵抗指數(shù)等代謝指標(biāo)具有一定相關(guān)性，而胰島素抵抗在NAFLD的發(fā)生及發(fā)展中起著極其重要的作用[4-5]，但I(xiàn)risin在NAFLD患者肝臟中的表達(dá)水平是否升高目前尚未有報(bào)道。作者對(duì)病理確診的NAFLD患者肝穿刺組織中Irisin的表達(dá)水平進(jìn)行了分析，以期為NAFLD的治療提供新的方向。

1對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象選取2010年1月至2014年12月在鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院因肝酶升高或疑診非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis，NASH)而行B超引導(dǎo)下經(jīng)皮肝穿刺的患者及肝移植術(shù)前行肝穿刺的供體為研究對(duì)象，收集其臨床資料及病理科存檔標(biāo)本。NAFLD診斷標(biāo)準(zhǔn)參照中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)脂肪肝和酒精性肝病學(xué)組2010年修訂的NAFLD診療指南[6]。根據(jù)NAFLD活動(dòng)度積分，該組資料中，非酒精性單純性脂肪肝(nonalcoholic simple fatty liver，NAFL)56例，NASH 75例；無(wú)脂肪變及脂肪性肝炎的正常者20例(正常對(duì)照組)。

1.2臨床資料收集病例的年齡、性別、身高、體重、甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)、空腹血糖(FBS)、空腹胰島素(FINS)、糖化血紅蛋白(HbA1c)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、γ-谷酰胺轉(zhuǎn)移酶(GGT)、堿性磷酸酶(ALP)、超敏C-反應(yīng)蛋白(hsCRP)等資料，計(jì)算BMI和穩(wěn)態(tài)模式評(píng)估法-胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)，HOMA-IR=FBG×FINS/22.5。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。采用Kruskal-Wallis檢驗(yàn)，進(jìn)一步的兩兩比較采用Mann-Whitney U檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2結(jié)果

2.13組一般資料及實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的比較①3組年齡及性別構(gòu)成差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。②與正常對(duì)照組相比，NAFL和NASH組BMI、FINS、HOMA-IR、TG、ALT、AST、GGT、hsCRP水平升高(P<0.05)，HDL-C水平降低(P<0.05)。③與NAFL組相比，除ALP水平無(wú)明顯變化外，NASH組HDL-C水平降低(P<0.05)，余指標(biāo)均升高。詳見(jiàn)表1。

表1　3組一般資料及實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)比較

a：與正常對(duì)照組比較，P<0.05；b：與NAFL組比較，P<0.05。

2.23組肝組織中Irisin表達(dá)的比較Irisin主要表達(dá)于肝細(xì)胞胞質(zhì)，部分表達(dá)于肝細(xì)胞胞膜和胞核(圖1)。NAFL組和NASH組Irisin表達(dá)水平均高于正常對(duì)照組(P<0.05)，見(jiàn)表2。

A：正常對(duì)照組；B：NAFL組;C：NASH組。圖1　不同組織中Irisin的表達(dá)(免疫組化，×200)

表2　3組肝組織中Irisin表達(dá)水平的比較

F=7.989，P<0.001；*：與正常對(duì)照組比較，P<0.05。

3討論

Irisin是在2012年由Spiegelman教授等發(fā)現(xiàn)的一種肌肉分泌的因子，它通過(guò)促進(jìn)白色脂肪棕色化，增加能量釋放，發(fā)揮減輕體重、改善胰島素抵抗的作用[8]。最近，Aydin等[7,9]通過(guò)免疫組化研究發(fā)現(xiàn)，Irisin在心臟、胰腺以及肝臟等組織亦有較高表達(dá)，且運(yùn)動(dòng)后心臟、肝臟及腎臟等組織Irisin的分泌量增加。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)[10]表明，Irisin可抑制肝細(xì)胞內(nèi)調(diào)控脂質(zhì)生成的核受體(如肝X受體α)的表達(dá)、核定位及轉(zhuǎn)錄活性，從而減少肝臟脂質(zhì)蓄積。此實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，Irisin主要表達(dá)定位于肝細(xì)胞胞質(zhì)，在部分肝細(xì)胞胞膜及胞核也有表達(dá)，推測(cè)其可能通過(guò)旁/自分泌的途徑參與調(diào)控肝細(xì)胞脂質(zhì)代謝。

Choi等[3]研究發(fā)現(xiàn)，NAFLD患者血清中Irisin水平高于正常對(duì)照組，且輕度NAFLD患者高于中重度患者，提示Irisin可能對(duì)早期肝臟脂肪變性具有潛在的保護(hù)作用。另有研究[11-12]發(fā)現(xiàn)，血清中Irisin水平與體重、BMI等指標(biāo)呈正相關(guān)，且在限制飲食或減肥手術(shù)導(dǎo)致體重下降后，Irisin水平也隨之降低，提示Irisin可補(bǔ)償性調(diào)節(jié)惡化的胰島素敏感性及糖脂代謝。Viitasalo等[13]同樣發(fā)現(xiàn)，易發(fā)生肝臟脂質(zhì)蓄積及炎癥的PNPLA3 148 M等位基因攜帶者血清中Irisin的水平較高，推測(cè)Irisin可能通過(guò)代償性增加以限制肝臟早期脂肪變及炎癥的發(fā)展，該代償性調(diào)節(jié)機(jī)制可能與組織內(nèi)的能量需求相關(guān)。Kuloglu等[14]研究發(fā)現(xiàn)Irisin在其所定位的組織中可能起著ATP傳感器的作用，組織中能量過(guò)剩則啟動(dòng)Irisin的表達(dá)，使能量供應(yīng)物質(zhì)如脂肪和糖類(lèi)以熱量的形式釋放。上述研究均表明，Irisin可能成為改善NAFLD的潛在治療藥物，但血清中Irisin的來(lái)源眾多[7]，不能直接反映肝臟脂肪變及炎癥與其自身Irisin表達(dá)水平的關(guān)系。

該研究選取不同病程患者的肝穿刺組織來(lái)分析各代謝指標(biāo)的變化。結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組相比，NAFL和NASH患者BMI、HOMA-IR、血脂以及肝酶等臨床指標(biāo)水平較高，同時(shí)肝臟組織Irisin表達(dá)評(píng)分也較高；隨NAFL進(jìn)展為NASH，肝細(xì)胞Irisin的表達(dá)水平有所增加，但未表現(xiàn)出統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。據(jù)此推測(cè)，肝臟中Irisin的表達(dá)可能受病程影響。在病程初期，肝臟Irisin的表達(dá)補(bǔ)償性上調(diào)以平衡機(jī)體對(duì)耗能因子的需求，此時(shí)機(jī)體可能存在“Irisin抵抗”狀態(tài)。隨NAFL進(jìn)展為NASH，盡管肝細(xì)胞仍補(bǔ)償性分泌Irisin，但由于受到氧化應(yīng)激及各種炎癥刺激的損傷，肝細(xì)胞功能紊亂甚至失活，其補(bǔ)償機(jī)制受限，故NASH患者肝細(xì)胞中Irisin的表達(dá)雖較NAFL患者有增高趨勢(shì)，但尚未表現(xiàn)出有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。由于該研究?jī)H限于未發(fā)生肝硬化的患者，因此，隨病情繼續(xù)進(jìn)展，肝組織纖維化加重，肝臟Irisin表達(dá)水平的變化還需進(jìn)一步研究證實(shí)。

綜上所述，Irisin可能是一種補(bǔ)償性調(diào)節(jié)肝細(xì)胞脂質(zhì)蓄積的因子，且與NAFLD的發(fā)展密切相關(guān)。進(jìn)一步研究Irisin對(duì)肝臟脂肪變和炎癥的影響有可能為NAFLD的治療拓展新的思路。

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(2016-01-07收稿責(zé)任編輯王曼)

doi：10.13705/j.issn.1671-6825.2016.04.021

#通信作者，女，1956年10月生，博士，主任醫(yī)師，研究方向：糖尿病及其血管并發(fā)癥， E-mail:zhengli63162@126.com

中圖分類(lèi)號(hào)R589.2

關(guān)鍵詞非酒精性脂肪肝；Irisin；脂質(zhì)代謝

Expression of Irisin in liver tissue of patients with nonalcoholic fatty liver disease

MA Yuanyuan1,2)，WU Xue1,2)，LIU Xiaogang1)，ZHANG Lixia1)，LI Shan1)，WANG Tingting1)，WANG Zhifang1)，LI Chong1)，LI Jingyi1)，HAN Chao1)，LI Fuguang3)，ZHENG Lili1)

1)DepartmentofEndocrinology，theFirstAffiliatedHospital,ZhengzhouUniversity，Zhengzhou4500522)InstituteofClinicalMedicine,theFirstAffiliatedHospital,ZhengzhouUniversity,Zhengzhou4500523)DepartmentofImmunology，CollegeofBasicMedicalSciences，ZhengzhouUniversity，Zhengzhou450001

Key wordsnonalcoholic fatty liver disease；Irisin；lipid metabolism

AbstractAim: To evaluate the expression of Irisin in liver tissue of patients with nonalcoholic fatty liver disease(NAFLD) and analyze its significance. Methods: The clinical data of patients，including 56 cases of biopsy-proven nonalcoholic simple fatty liver(NAFL)and 75 cases of nonalcoholic steatohepatitis(NASH) were retrospectively analyzed. Twenty cases without fatty change or adipose hepatitis were the control. Irisin expression in liver biopsy tissue was detected by immunohistochemical SP method. Results: There were no significant differences in age or sex ratio among the 3 groups(P>0.05).Compared with control,there was abnormal lipid metabolism in NAFL and NASH groups.The Irisin expression level in NAFL and NASH groups was higher compared with control group(P<0.05),while there was no significant difference between NAFL and NASH groups(P>0.05). Conclusion: Irisin may act as a compensatory regulation factor for lipid accumulation in hepatocytes.

*河南省衛(wèi)計(jì)委普通項(xiàng)目201403028