• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    膈下逐瘀湯對(duì)非酒精性脂肪肝大鼠脂質(zhì)代謝和血小板活化的影響

    2017-03-06 17:15:56朱曉松方濤陳文慧譚麗萍石安華
    關(guān)鍵詞:非酒精性脂肪肝血小板

    朱曉松 方濤 陳文慧 譚麗萍 石安華

    [摘要] 目的 研究膈下逐瘀湯對(duì)非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠的治療作用及機(jī)制。 方法 雄性SD大鼠按完全隨機(jī)分組原則分為空白組、模型組和藥物干預(yù)組。空白組基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng),其余高脂飼料喂養(yǎng),持續(xù)喂養(yǎng)12周。8周末藥物干預(yù)組開始給藥,動(dòng)態(tài)觀察各組大鼠肝組織病理變化,檢測(cè)各組大鼠肝指數(shù)、血清總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT),肝組織TG和TC含量,以及血小板聚集率和可溶性P-選擇素(CD62p)的含量。 結(jié)果 8周末模型組HE染色的肝組織病理切片觀察到脂肪變性的肝細(xì)胞占肝小葉的比例>1/3,證明造模成功,12周末模型組大鼠各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)與空白組比較含量均有不同程度升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P < 0.05或P < 0.01);與模型組比較,藥物干預(yù)組大鼠各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)含量均有不同程度降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P < 0.05或P < 0.01)。 結(jié)論 膈下逐瘀湯對(duì)于改善NAFLD大鼠肝細(xì)胞脂質(zhì)沉積有著顯著的療效,作用機(jī)制可能與調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝、減少CD62p的表達(dá)、降低血小板聚集率有關(guān)。

    [關(guān)鍵詞] 膈下逐瘀湯;非酒精性脂肪肝;血小板;可溶性P-選擇素

    [中圖分類號(hào)] R285.5 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210(2016)11(c)-0004-04

    Effects of Gexia Zhuyu Decoction on lipid metabolism and platelet activation in rats with non-alcoholic fatty liver disease

    ZHU Xiaosong FANG Tao CHEN Wenhui TAN Liping SHI Anhua

    Basic Medical College, Yunnan University of Traditional Chinese Medicine, Yunnan Province, Kunming 650500, China

    [Abstract] Objective To study the effects and mechanism of Gexia Zhuyu Decoction in rats with non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD). Methods Male Sprague Dawley (SD) rats were randomized completely into three groups: blank group, model group and drug group. Blank group was fed with common diet, the others were fed with high-fat diet for 12 weeks. At the 8th weekend, the drug group was given Gexia Zhuyu Decoction. The pathological changes of hepatic tissue in rats of all groups were observed dynamically. The liver index, total cholesterol (TC), triglyceride (TG), alanine aminotransferase (ALT) in serum, TC, TG in liver specimens, and platelet aggregation, soluble P-selectin (CD62p) were measured. Results At the end of 8th weekend, the pathological section of hepatic tissue by HE staining in model group showed that, the proportion of hepatic cells with fatty degeneration accounted for hepatic lobule was over 1/3, which proved that, the model was successful. At the end of 12th weekend, all indexes of model group were higher than those in blank group, the differences were statistically significant (P < 0.05 or P < 0.01). All indexes of drug group were lower than those in model group, the differences were statistically significant (P < 0.05 or P < 0.01). Conclusion Gexia Zhuyu Decoction can improve the condition of liver fatty degeneration of rats with fatty liver obviously. The mechanism may be associated with the regulation of lipid metabolism, reduction of the CD62p, inhibition of platelet aggregation.

    [Key words] Gexia Zhuyu Decoction; Non-alcoholic fatty liver disease; Platelet; Soluble P-selectin

    非酒精性脂肪肝(NAFLD)為我國(guó)常見的慢性肝病之一,是指除酗酒原因外引起的以肝細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)過度沉積為主要病理變化的臨床綜合征[1]?,F(xiàn)代分子病理學(xué)研究認(rèn)為其發(fā)病跟胰島素抵抗、氧化應(yīng)激及遺傳等因素有關(guān)[2]。目前治療仍以運(yùn)動(dòng)、減輕體重為主,尚無理想藥物[3]。中醫(yī)學(xué)研究認(rèn)為NAFLD的基本病機(jī)是痰瘀互結(jié),治療原則以活血化瘀、健脾祛痰為主[4]。應(yīng)用活血化瘀方治療NAFLD的作用機(jī)制還未研究透徹。本研究通過喂食大鼠高脂飼料,建立早期NAFLD大鼠模型,觀察膈下逐瘀湯對(duì)NAFLD大鼠模型的作用,并從血小板活化的角度探索活血化瘀藥物膈下逐瘀湯治療NAFLD的作用機(jī)制。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)4周齡雄性SD大鼠120只,體重80~100 g,昆明醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心提供,許可證號(hào):SCXK(滇)2011-0004。

    1.1.2 實(shí)驗(yàn)藥品 膈下逐瘀湯(處方組成:五靈脂、當(dāng)歸、川芎、桃仁、丹皮、赤芍、烏藥、玄胡索、甘草、香附、紅花、枳殼,比例:9∶9∶6∶9∶6∶6∶6∶3∶9∶3∶9∶5)。制備成含生藥量1.44 g/mL的藥液[5],4℃冰箱密封保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.1.3 儀器試劑 Spectra Max 340PC酶標(biāo)儀(美國(guó)分子儀器公司);LBY-NJ血小板聚集儀(北京普利生儀器公司)。血清總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)檢測(cè)試劑盒(上海榮盛生物藥業(yè)有限公司);可溶性P-選擇素(CD62p)檢測(cè)試劑盒(蘇州卡爾文生物技術(shù)有限公司)。

    1.2 模型建立及分組給藥

    適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d后編號(hào),按完全隨機(jī)原則分為3組,空白組50只,模型組50只,藥物干預(yù)組20只??瞻捉M喂飼基礎(chǔ)飼料,其余組給予自制高脂飼料(基礎(chǔ)飼料88%,豬油10%,膽固醇2%),自由飲水。于4、6、8周末分別處死空白組和模型組大鼠各10只,取血和肝組織樣本,動(dòng)態(tài)觀察造模情況,發(fā)現(xiàn)8周末,脂肪變性的肝細(xì)胞占肝小葉比例>1/3,為輕度脂肪肝[6-7],因此從8周末藥物干預(yù)組每天灌胃膈下逐瘀湯[7.2 g/(kg·d)],空白組和模型組灌胃等體積生理鹽水,連續(xù)給藥4周,飼料不變,第10、12周分別處死各組大鼠10只。

    1.3 樣本采集

    實(shí)驗(yàn)動(dòng)物禁食不禁飲12 h,10%水合氯醛麻醉,腹主動(dòng)脈取血,分離血清、血漿。取血后,處死大鼠,迅速取肝組織稱重,計(jì)算肝指數(shù)(肝指數(shù)=肝濕重/體重×100%)。取肝左葉組織10%甲醛固定,做病理組織學(xué)檢查,肝右葉制備組織勻漿檢測(cè)肝脂。

    1.4 觀察指標(biāo)

    ①肝組織病理學(xué)檢查;②全自動(dòng)生化儀檢測(cè)血清TC、TG、ALT,肝組織TG和TC含量;③按照試劑盒說明書用血小板聚集儀檢測(cè)血小板聚集率;④按照試劑盒說明書采用酶標(biāo)儀檢測(cè)CD62p。

    1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,計(jì)量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,樣本符合正態(tài)分布且方差齊性時(shí),多組間計(jì)量資料比較采用單因素方差分析,兩兩比較時(shí)方差齊用LSD檢驗(yàn),方差不齊采用多個(gè)樣本比較的秩和檢驗(yàn)(Kruskal-Wallis)法及兩兩比較的秩和檢驗(yàn)(Wilcoxon)法,以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 一般情況

    空白組大鼠毛發(fā)整潔有光澤,行動(dòng)靈活,飲食飲水正常,大便正常,體重穩(wěn)定增長(zhǎng)。模型組大鼠毛色暗淡,行動(dòng)遲緩,8周后食量逐漸減少,大便黏軟,部分出現(xiàn)便溏現(xiàn)象。藥物干預(yù)組毛發(fā)趨于空白組,活動(dòng)較多,大便較正常。

    2.2 肝組織病理學(xué)變化

    HE染色鏡下觀察(圖1,封三):空白組大鼠肝細(xì)胞內(nèi)未發(fā)現(xiàn)明顯脂肪空泡,肝小葉結(jié)構(gòu)完整,肝索排列整齊;模型組大鼠大量肝細(xì)胞內(nèi)有脂肪空泡,脂肪變性的肝細(xì)胞數(shù)目占肝小葉比例>2/3,少量肝細(xì)胞發(fā)生氣球樣變,并伴有肝細(xì)胞點(diǎn)狀壞死;藥物干預(yù)組可見部分肝細(xì)胞內(nèi)有較小的脂肪空泡,脂變細(xì)胞數(shù)目不到肝小葉的1/3,無細(xì)胞壞死。蘇丹Ⅲ染色鏡下觀察(圖2,封三):空白組大鼠肝細(xì)胞未見明顯紅色脂滴,模型組大鼠肝細(xì)胞內(nèi)紅色脂滴廣泛分布,藥物干預(yù)組肝細(xì)胞紅色脂滴明顯減少。

    2.3 肝指數(shù)、血脂、肝脂及血清ALT的變化

    與空白組比較,模型組大鼠肝指數(shù),血清TC、TG、ALT和肝組織TC、TG含量均升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P < 0.05或P < 0.01);與模型組比較,藥物干預(yù)組大鼠肝指數(shù),血清TC、TG、ALT和肝組織TC、TG含量均降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P < 0.05或P < 0.01)。見表1。

    2.4 血小板聚集率的變化

    與空白組比較,模型組大鼠血小板聚集率第4周后升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P < 0.05),第8周后升高更明顯,差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P < 0.01);與模型組比較,藥物干預(yù)組大鼠血小板聚集率顯著降低,差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P < 0.01)。見表2。

    2.5 血漿CD62p含量

    與空白組比較,模型組與藥物干預(yù)組大鼠血漿CD62p含量均顯著升高,差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P < 0.01);與模型組比較,藥物干預(yù)組大鼠血漿CD62p含量顯著降低,差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P < 0.01)。見表3。

    3 討論

    本研究采用改良高脂飼料復(fù)制NAFLD大鼠模型,由于造模時(shí)間較長(zhǎng),若使用成年大鼠在12周末實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)大鼠重量太重不適合實(shí)驗(yàn),因此采用4周齡的幼鼠作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。第8周末肝組織切片HE染色觀察到模型組大鼠肝小葉內(nèi)超過1/3的肝細(xì)胞有脂肪空泡,為輕度脂肪肝,第12周末有超過2/3的肝細(xì)胞內(nèi)有脂肪空泡,有的空泡融合將細(xì)胞核擠到一側(cè),有的甚至發(fā)生氣球樣變,可見點(diǎn)狀壞死灶,為中重度脂肪肝,證明NAFLD模型成立[6-7]。

    膈下逐瘀湯選自王清任《醫(yī)林改錯(cuò)》,方中當(dāng)歸、川芎、赤芍養(yǎng)血活血;桃仁、紅花、靈脂破血逐瘀;配香附、烏藥、枳殼、元胡行氣止痛,是中醫(yī)活血化瘀的經(jīng)典方[8]。課題組前期研究[9-11]發(fā)現(xiàn),含生藥量為1.44 g/mL的藥液藥效最為顯著,因此本研究采用了該濃度的藥液。12周末空白組大鼠肝細(xì)胞脂肪變性不明顯,幾乎看不到脂肪空泡;藥物干預(yù)組大鼠肝細(xì)胞變性較模型組輕微,變性細(xì)胞數(shù)目較少,表明膈下逐瘀湯可以減輕模型大鼠肝細(xì)胞脂肪變性的程度。由于造模所選擇的動(dòng)物、方法、造模時(shí)間等因素的差異,未能找到本研究TC、TG、ALT準(zhǔn)確的參考范圍,但跟課題組前期研究[10-11]的數(shù)據(jù)進(jìn)行比較,數(shù)值還是較接近的。本研究還進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)組間的比較,與空白組比較,模型組大鼠血清TC、TG和肝組織TC、TG含量均有不同程度的升高;與模型組比較,藥物干預(yù)組大鼠血清TC、TG和肝組織TC、TG含量均有不同程度降低,表明膈下逐瘀湯能夠降低NAFLD模型大鼠血脂和肝脂的水平,表明其不僅可以抑制脂質(zhì)的吸收,還能促進(jìn)肝臟對(duì)脂質(zhì)的降解代謝。與空白組比較,模型組大鼠血清ALT含量明顯升高(P < 0.01),表明模型大鼠有較嚴(yán)重的肝細(xì)胞損傷;與模型組比較,藥物干預(yù)組大鼠血清ALT含量顯著降低(P < 0.01),表明膈下逐瘀湯可以減輕肝損傷,有保肝護(hù)肝的功效。

    傳統(tǒng)中醫(yī)學(xué)中沒有NAFLD的病名,根據(jù)臨床表現(xiàn)將其歸屬于“瘀證”“肝痞”“黃疸”等范疇,其病機(jī)為氣滯血瘀、痰瘀互結(jié)[12-13]。“血瘀”在NAFLD的發(fā)生發(fā)展中起到重要的作用[14]。通過對(duì)“血瘀證”的研究發(fā)現(xiàn),其本質(zhì)是血液循環(huán)障礙,血流速度變慢,血栓形成[15]。長(zhǎng)期高脂飲食容易導(dǎo)致血脂升高,血液黏稠度增加,流動(dòng)性降低,血小板聚集性增加,血管內(nèi)皮受損,容易形成血栓,也就是出現(xiàn)了血瘀證的表現(xiàn)[16]。不難看出,血小板活化是血瘀證發(fā)生和發(fā)展的重要病理生理基礎(chǔ),為解釋血瘀證的病機(jī)提供了分子水平的客觀依據(jù)[17]。血小板活化分子表達(dá)增加,血小板的聚集性會(huì)增強(qiáng),血栓形成的可能性就增加,機(jī)體就越容易出現(xiàn)血瘀證[18]。

    CD62p是一種位于血小板特殊顆粒和血管內(nèi)皮細(xì)胞Weibel-Palade小體內(nèi)的膜糖蛋白,當(dāng)血小板受刺激時(shí)快速大量地表達(dá)于血小板膜表面,介導(dǎo)血小板和血管內(nèi)皮與炎細(xì)胞黏附以及血小板之間的黏附,進(jìn)而促進(jìn)纖維蛋白沉積和血栓形成,是目前發(fā)現(xiàn)的最能反映血小板活化程度的特異性指標(biāo)之一[19-20]。血小板聚集率是中醫(yī)血瘀證量化標(biāo)準(zhǔn)之一,血小板聚集率越高越容易形成瘀血和血栓。

    與空白組比較,從第4周造模開始,血小板聚集率就開始升高,第8周末升高更明顯(P < 0.01),同時(shí)血漿CD62p含量也顯著升高(P < 0.01),表明CD62p表達(dá)增多,血小板活化,血小板聚集率升高,加重微循環(huán)障礙,從而引起脂質(zhì)代謝障礙,容易發(fā)生脂肪肝。與模型組比較,藥物干預(yù)組大鼠的血小板聚集率和血漿CD62p含量明顯下降(P < 0.01),表明膈下逐瘀湯可以減少CD62p的表達(dá)和血小板活化,降低模型大鼠的血小板聚集率,改善血流狀態(tài),促進(jìn)微循環(huán)物質(zhì)交換,降低肝細(xì)胞脂肪變性的概率,從而減輕NAFLD的癥狀。本研究結(jié)果表明,以活血化瘀為主的膈下逐瘀湯減輕NAFLD大鼠模型肝脂肪變性程度和肝損傷,降低血脂、肝脂含量,可能是通過減少CD62p的表達(dá)來抑制血小板活化、降低血小板聚集率、改善血流狀態(tài)、促進(jìn)肝臟脂質(zhì)代謝來實(shí)現(xiàn)的。本研究以方驗(yàn)證,初步揭示了NAFLD與血瘀證的關(guān)系,為臨床形成更為有效的治法方藥提供理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)研究基礎(chǔ)。

    [參考文獻(xiàn)]

    [1] Fracanzani AL,Valenti L,Bugianesi E,et al. Risk of severe liver disease in nonalcoholic fatty liver disease with normal aminotransferase levels:a role for insulin resistance and diabetes [J]. Hepatology,2008,48(3):792-798.

    [2] Cohen JC,Horton JD,Hobbs HH. Human fatty liver disease:old questions and new insights [J]. Science,2011,332(6037):1519-1523.

    [3] 龔世梅,舒發(fā)明,馮全生.中藥復(fù)方治療非酒精性脂肪肝研究進(jìn)展[J].云南中醫(yī)中藥雜志,2016,37(1):83-85.

    [4] 韓莉,王觀龍,楊欽河,等.數(shù)據(jù)挖掘非酒精性脂肪性肝病中醫(yī)證候及用藥特點(diǎn)[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2015, 38(7):496-500.

    [5] 李儀奎.中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].上海:科技出版社,2006:36.

    [6] 中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝臟病學(xué)分會(huì)脂肪肝和酒精性肝病學(xué)組.非酒精性脂肪性肝病診療指南(2010年修訂版)[J].中華肝臟病雜志,2010,18(3):163-166.

    [7] 徐中菊,姜超,顧婷婷,等.丹芍疏肝顆粒對(duì)非酒精性脂肪肝大鼠NF-кB蛋白表達(dá)的影響[J].上海中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2016,30(3):64-68.

    [8] 烏蘭圖婭.膈下逐瘀湯對(duì)肝瘀血療效的分析[J].中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用,2015,9(19):258-259.

    [9] 李松梅,李秀芳,林青,等.參苓白術(shù)散和膈下逐瘀湯對(duì)早期脂肪肝大鼠模型血小板聚集的影響[J].中藥藥理與臨床,2007,23(5):38-39.

    [10] 楊銀花,王佳寧,韓雪,等.膈下逐瘀湯對(duì)早期非酒精性脂肪肝大鼠肝臟脂質(zhì)代謝的影響[J].中外醫(yī)療,2014, 10(33):79-80.

    [11] 楊銀花,王佳寧,韓雪,等.早期非酒精性脂肪肝大鼠血液流變學(xué)變化及膈下逐瘀湯的干預(yù)作用[J].中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥,2015,10(5):278-279.

    [12] 卞瑤,黃文俊,姚政,等.去脂軟肝方對(duì)高脂誘導(dǎo)大鼠脂肪肝血管性血友病因子作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2014,11(1):4-6.

    [13] 李滿容.非酒精性脂肪性肝病中醫(yī)證候及臨床特點(diǎn)分析[J].中醫(yī)臨床研究,2015,7(27):17-18.

    [14] 梁菁,韓榮.非酒精性脂肪性肝病中醫(yī)證型研究進(jìn)展[J].新疆中醫(yī)藥,2015,33(3):72-75.

    [15] 趙浩,劉劍剛,雷燕,等.血脂異常血瘀證患者血液流動(dòng)性和流變性觀察[J].微循環(huán)學(xué)雜志,2015,25(3):23-26.

    [16] 張順貞,石安華,卞瑤,等.去脂軟肝方對(duì)早期脂肪肝大鼠血脂及血液流變學(xué)的影響[J].中華中醫(yī)藥雜志,2015, 30(3):875-877.

    [17] 劉玥,殷惠軍,陳可冀.血小板蛋白質(zhì)組學(xué)及其在血瘀證與活血化瘀中藥研究中的探索應(yīng)用[J].中國(guó)科學(xué):生命科學(xué),2013,43(8):619-625.

    [18] 李云婷,張雷雷,張巧麗,等.血小板活化標(biāo)志物CD62P、CD63在糖尿病患者早期腎臟微血管病變中的表達(dá)[J].河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2015,36(5):551-553.

    [19] Bonacina F,Barbieri SS,Cutuli L,et al. Vascular pentraxin 3 controls arterial thrombosis by targeting collagen and fibrinogen induced platelets aggregation [J]. Biochim Bio-phys Acta,2016,1862(6):1182-1190.

    [20] Sambola A,García Del Blanco B,Ruiz-Meana M,et al. Increased von Willebrand factor,P-selectin and fibrin content in occlusive thrombus resistant to lytic therapy [J]. Thromb Haemost,2016,115(6):1129-1137.

    (收稿日期:2016-08-07 本文編輯:張瑜杰)

    猜你喜歡
    非酒精性脂肪肝血小板
    重組人促血小板生成素對(duì)化療所致血小板減少癥的防治效果
    高脂高糖飲食誘導(dǎo)的非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝組織TLR4和MyD88 mRNA的表達(dá)
    脂肪肝對(duì)HBeAg陽(yáng)性慢性乙型肝炎患者療效的影響
    蔥白提取物調(diào)節(jié)非酒精性脂肪肝脂質(zhì)水平的機(jī)制研究
    腔隙性腦梗死患者血小板總數(shù)和血小板平均體積的相關(guān)探討
    水飛薊賓聯(lián)合洛伐他汀對(duì)非酒精性脂肪肝的臨床療效
    重組人血小板生成素預(yù)防吉西他濱化療相關(guān)血小板減少癥的臨床觀察
    左旋卡尼汀治療非酒精性脂肪肝伴代謝綜合征臨床療效分析
    肝病與膽汁反流性胃炎的關(guān)系分析
    血小板活化因子與冠狀動(dòng)脈病變支數(shù)相關(guān)性研究
    日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 欧美最黄视频在线播放免费| 91在线观看av| 久久久久久人人人人人| 黄色女人牲交| 亚洲九九香蕉| 人人妻人人澡人人看| 亚洲精品国产一区二区精华液| 美国免费a级毛片| 一区二区三区高清视频在线| 久久久水蜜桃国产精品网| 麻豆av在线久日| 成年女人毛片免费观看观看9| 久久国产亚洲av麻豆专区| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 久久99热这里只有精品18| 国产伦人伦偷精品视频| 老司机午夜福利在线观看视频| 国产精品野战在线观看| 身体一侧抽搐| 日韩三级视频一区二区三区| 亚洲成人久久爱视频| 精品第一国产精品| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 亚洲第一青青草原| 免费看十八禁软件| 日本一区二区免费在线视频| 免费在线观看成人毛片| 国产精品久久电影中文字幕| 国产伦在线观看视频一区| 好男人电影高清在线观看| 亚洲熟妇熟女久久| 久久这里只有精品19| 亚洲 欧美一区二区三区| 精品国产亚洲在线| 国产一区二区激情短视频| 一本一本综合久久| 丁香六月欧美| 国产男靠女视频免费网站| 一二三四社区在线视频社区8| 国产一卡二卡三卡精品| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 国产激情久久老熟女| 免费在线观看日本一区| 国产激情欧美一区二区| 国产免费男女视频| 一级黄色大片毛片| 91字幕亚洲| 成人国产一区最新在线观看| 麻豆成人av在线观看| 激情在线观看视频在线高清| 亚洲熟女毛片儿| 婷婷精品国产亚洲av在线| 男女下面进入的视频免费午夜 | 国产亚洲欧美在线一区二区| 男女之事视频高清在线观看| 俺也久久电影网| 久久午夜亚洲精品久久| 女警被强在线播放| 国产v大片淫在线免费观看| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 亚洲九九香蕉| 欧美中文综合在线视频| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 久久中文看片网| www.www免费av| 午夜久久久久精精品| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 久久精品影院6| 欧美色视频一区免费| 免费在线观看日本一区| 国产三级在线视频| 啪啪无遮挡十八禁网站| 最新美女视频免费是黄的| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 亚洲成av片中文字幕在线观看| tocl精华| 亚洲午夜理论影院| 国产又色又爽无遮挡免费看| 桃红色精品国产亚洲av| 在线国产一区二区在线| 美女免费视频网站| 丝袜人妻中文字幕| 免费在线观看日本一区| 欧美日本亚洲视频在线播放| 免费人成视频x8x8入口观看| 我的亚洲天堂| 男女午夜视频在线观看| 一级片免费观看大全| 国产精品永久免费网站| 老司机靠b影院| 在线天堂中文资源库| 亚洲成人久久爱视频| 看黄色毛片网站| 午夜福利在线在线| 亚洲七黄色美女视频| 美女扒开内裤让男人捅视频| 999久久久精品免费观看国产| 免费在线观看完整版高清| 给我免费播放毛片高清在线观看| 成人精品一区二区免费| 97人妻精品一区二区三区麻豆 | 免费一级毛片在线播放高清视频| 国产成人系列免费观看| 免费看十八禁软件| 在线国产一区二区在线| 男人舔女人下体高潮全视频| 后天国语完整版免费观看| 久久青草综合色| www.自偷自拍.com| 欧美zozozo另类| www.熟女人妻精品国产| 黄色 视频免费看| 最好的美女福利视频网| 国产高清视频在线播放一区| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 深夜精品福利| 叶爱在线成人免费视频播放| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 国产亚洲欧美在线一区二区| 久久精品国产亚洲av高清一级| 亚洲成人久久爱视频| 亚洲第一电影网av| 欧美性长视频在线观看| ponron亚洲| 午夜免费观看网址| 免费看美女性在线毛片视频| 在线观看免费午夜福利视频| 国产人伦9x9x在线观看| 岛国在线观看网站| 午夜福利18| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 久久九九热精品免费| 91大片在线观看| 亚洲精品在线美女| av在线天堂中文字幕| 欧美丝袜亚洲另类 | 午夜免费鲁丝| 亚洲国产精品999在线| 久久精品91无色码中文字幕| 精品高清国产在线一区| 亚洲国产精品sss在线观看| cao死你这个sao货| 久久国产精品人妻蜜桃| 人人妻人人澡欧美一区二区| 在线观看午夜福利视频| 午夜日韩欧美国产| 精品国产美女av久久久久小说| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 99国产精品99久久久久| 国产又色又爽无遮挡免费看| 亚洲人成电影免费在线| 白带黄色成豆腐渣| 久久久久久大精品| 精品午夜福利视频在线观看一区| 亚洲精品国产区一区二| 国产成人精品无人区| 一本精品99久久精品77| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 禁无遮挡网站| 超碰成人久久| 久久久久久久久久黄片| 夜夜夜夜夜久久久久| 午夜激情av网站| 天堂动漫精品| 午夜福利成人在线免费观看| 欧美亚洲日本最大视频资源| 成人午夜高清在线视频 | 露出奶头的视频| 免费看日本二区| 亚洲成人免费电影在线观看| 嫩草影院精品99| 国产激情久久老熟女| 老司机靠b影院| 日本免费a在线| 国产高清videossex| 一区二区三区高清视频在线| 一级片免费观看大全| 怎么达到女性高潮| 精品国产一区二区三区四区第35| 麻豆成人午夜福利视频| 亚洲av五月六月丁香网| 女性生殖器流出的白浆| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 在线视频色国产色| 90打野战视频偷拍视频| a在线观看视频网站| 成人18禁在线播放| 欧美成人午夜精品| 极品教师在线免费播放| 怎么达到女性高潮| 黄色女人牲交| 女警被强在线播放| 一级黄色大片毛片| 黄频高清免费视频| 亚洲 欧美一区二区三区| 国产精品久久久av美女十八| 午夜精品久久久久久毛片777| 天天一区二区日本电影三级| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 欧美黄色淫秽网站| 久久久久久九九精品二区国产 | 成人三级做爰电影| 亚洲全国av大片| 日韩av在线大香蕉| 亚洲午夜理论影院| 国产精品久久久久久精品电影 | 午夜福利欧美成人| 免费在线观看亚洲国产| 亚洲精品在线美女| 亚洲国产欧美一区二区综合| 丁香六月欧美| 在线免费观看的www视频| 欧美色欧美亚洲另类二区| 少妇 在线观看| or卡值多少钱| 欧美色欧美亚洲另类二区| 精品久久久久久久久久久久久 | 精品无人区乱码1区二区| 人妻久久中文字幕网| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 19禁男女啪啪无遮挡网站| 国产真实乱freesex| 免费观看精品视频网站| 午夜视频精品福利| 国产黄a三级三级三级人| 日韩有码中文字幕| 可以在线观看毛片的网站| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 深夜精品福利| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 日韩大尺度精品在线看网址| 12—13女人毛片做爰片一| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 满18在线观看网站| 午夜老司机福利片| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 好男人电影高清在线观看| 成在线人永久免费视频| e午夜精品久久久久久久| 色婷婷久久久亚洲欧美| 两个人免费观看高清视频| 亚洲精华国产精华精| 中文在线观看免费www的网站 | 欧美激情久久久久久爽电影| 免费看a级黄色片| av视频在线观看入口| 久久久久国产一级毛片高清牌| 精品国产国语对白av| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 成年版毛片免费区| 免费看美女性在线毛片视频| 日日夜夜操网爽| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 午夜精品在线福利| 欧美国产日韩亚洲一区| 麻豆av在线久日| 精品一区二区三区四区五区乱码| 久久久久免费精品人妻一区二区 | 18禁国产床啪视频网站| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 亚洲 欧美一区二区三区| 亚洲国产精品999在线| 午夜福利视频1000在线观看| 欧美性长视频在线观看| 叶爱在线成人免费视频播放| 亚洲av片天天在线观看| 搡老岳熟女国产| av在线天堂中文字幕| 久久久久国产一级毛片高清牌| 欧美一区二区精品小视频在线| 国产成人精品无人区| 欧美最黄视频在线播放免费| 男女下面进入的视频免费午夜 | 妹子高潮喷水视频| 亚洲精品久久国产高清桃花| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 国产黄色小视频在线观看| 国产在线精品亚洲第一网站| 国产精品久久久久久精品电影 | 丰满的人妻完整版| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 啦啦啦免费观看视频1| x7x7x7水蜜桃| 国产成人欧美| 1024手机看黄色片| 久久国产精品影院| 大型av网站在线播放| 色播在线永久视频| 久久香蕉国产精品| 伦理电影免费视频| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 午夜老司机福利片| ponron亚洲| 一本久久中文字幕| 国产精品99久久99久久久不卡| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 久久国产亚洲av麻豆专区| www日本黄色视频网| 国产成年人精品一区二区| 欧美三级亚洲精品| 午夜福利一区二区在线看| 色精品久久人妻99蜜桃| www.熟女人妻精品国产| 少妇熟女aⅴ在线视频| 国产主播在线观看一区二区| 老鸭窝网址在线观看| 一本精品99久久精品77| 亚洲一区二区三区色噜噜| 露出奶头的视频| 亚洲avbb在线观看| 亚洲中文字幕日韩| 国产精品一区二区三区四区久久 | 搡老岳熟女国产| 国产av不卡久久| 国产亚洲av嫩草精品影院| 91在线观看av| 最好的美女福利视频网| 99国产综合亚洲精品| 国产精品亚洲一级av第二区| 欧美av亚洲av综合av国产av| 精品久久久久久久末码| 国产成人啪精品午夜网站| 麻豆成人av在线观看| 一进一出好大好爽视频| 午夜精品在线福利| 亚洲午夜理论影院| 一区二区三区激情视频| 免费一级毛片在线播放高清视频| 黄色 视频免费看| 亚洲国产欧洲综合997久久, | 亚洲av五月六月丁香网| 男女床上黄色一级片免费看| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 欧美激情久久久久久爽电影| 亚洲av美国av| 人人妻人人澡人人看| 亚洲最大成人中文| 岛国视频午夜一区免费看| 黄色片一级片一级黄色片| 一本大道久久a久久精品| 午夜免费观看网址| 亚洲成a人片在线一区二区| 久久国产精品影院| a级毛片a级免费在线| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 免费在线观看完整版高清| 黄色丝袜av网址大全| 久热这里只有精品99| 久久久久国产一级毛片高清牌| 国产精品影院久久| 成人国语在线视频| 一级a爱片免费观看的视频| 成年免费大片在线观看| 一级a爱片免费观看的视频| 成年女人毛片免费观看观看9| 波多野结衣av一区二区av| 99久久精品国产亚洲精品| 日韩欧美国产一区二区入口| 亚洲免费av在线视频| 精品人妻1区二区| 很黄的视频免费| 亚洲精品在线观看二区| 女人被狂操c到高潮| 国产野战对白在线观看| 精品午夜福利视频在线观看一区| 国产主播在线观看一区二区| 欧美大码av| 日韩欧美三级三区| 成人一区二区视频在线观看| av有码第一页| 色播在线永久视频| 黄频高清免费视频| 欧美日韩精品网址| 日韩大码丰满熟妇| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 91成人精品电影| 国产成人欧美在线观看| 亚洲国产看品久久| 久久久久精品国产欧美久久久| 黄色女人牲交| 午夜福利18| 三级毛片av免费| 日韩欧美国产一区二区入口| 性欧美人与动物交配| 丁香欧美五月| 人人妻人人澡人人看| 国产精品亚洲一级av第二区| 哪里可以看免费的av片| 亚洲av成人av| 成在线人永久免费视频| 精品国内亚洲2022精品成人| av天堂在线播放| av福利片在线| 久久国产精品影院| 叶爱在线成人免费视频播放| 精品第一国产精品| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 国产视频内射| 亚洲 国产 在线| 免费在线观看黄色视频的| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 色播亚洲综合网| 99国产精品一区二区三区| 亚洲av电影在线进入| 人人澡人人妻人| 欧美午夜高清在线| 亚洲国产精品久久男人天堂| 久久久国产欧美日韩av| 两性夫妻黄色片| 国产视频一区二区在线看| 免费搜索国产男女视频| 国产精品乱码一区二三区的特点| 亚洲精品粉嫩美女一区| 精品久久久久久久久久久久久 | 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 日韩大码丰满熟妇| 国产伦在线观看视频一区| 啦啦啦 在线观看视频| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 99re在线观看精品视频| 欧美一级毛片孕妇| 久久久久久九九精品二区国产 | 99精品久久久久人妻精品| 少妇熟女aⅴ在线视频| 岛国视频午夜一区免费看| 精品日产1卡2卡| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 后天国语完整版免费观看| 午夜激情av网站| 黄频高清免费视频| 国产1区2区3区精品| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 国内精品久久久久久久电影| 老司机靠b影院| 18美女黄网站色大片免费观看| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 亚洲精品粉嫩美女一区| 天堂影院成人在线观看| 给我免费播放毛片高清在线观看| 国语自产精品视频在线第100页| 在线观看午夜福利视频| 亚洲成人久久性| 中文字幕精品亚洲无线码一区 | 黄色片一级片一级黄色片| 神马国产精品三级电影在线观看 | www日本在线高清视频| 久久亚洲真实| 免费在线观看影片大全网站| 欧美色欧美亚洲另类二区| 国产一区在线观看成人免费| 国产人伦9x9x在线观看| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 欧美乱码精品一区二区三区| 亚洲国产精品成人综合色| 国产亚洲av高清不卡| 欧美日韩一级在线毛片| www.自偷自拍.com| 精品久久久久久成人av| 深夜精品福利| 搡老熟女国产l中国老女人| 成人午夜高清在线视频 | 在线看三级毛片| 精华霜和精华液先用哪个| √禁漫天堂资源中文www| 在线免费观看的www视频| 日日爽夜夜爽网站| 狠狠狠狠99中文字幕| 又紧又爽又黄一区二区| 精品熟女少妇八av免费久了| 在线视频色国产色| 观看免费一级毛片| 亚洲无线在线观看| 欧美日韩精品网址| 欧美色视频一区免费| 国产三级在线视频| 欧美国产日韩亚洲一区| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 中文资源天堂在线| 两个人视频免费观看高清| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 操出白浆在线播放| 国产成人系列免费观看| 亚洲人成网站高清观看| or卡值多少钱| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 制服诱惑二区| 久久国产乱子伦精品免费另类| 亚洲精品国产一区二区精华液| 亚洲久久久国产精品| 久久精品国产综合久久久| 欧美黑人巨大hd| 动漫黄色视频在线观看| 亚洲一区高清亚洲精品| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 啦啦啦韩国在线观看视频| 黑丝袜美女国产一区| 黄色成人免费大全| 久久性视频一级片| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 久久精品国产综合久久久| cao死你这个sao货| 丝袜在线中文字幕| 欧美中文日本在线观看视频| 免费av毛片视频| 一区二区三区国产精品乱码| 国产成人精品无人区| 久久婷婷成人综合色麻豆| 国产区一区二久久| 午夜免费观看网址| 亚洲av片天天在线观看| 久久精品成人免费网站| 日韩免费av在线播放| 校园春色视频在线观看| 国产精品二区激情视频| 日韩国内少妇激情av| 又大又爽又粗| 男女午夜视频在线观看| 久久人妻av系列| 日韩视频一区二区在线观看| 精品不卡国产一区二区三区| 美女 人体艺术 gogo| 久久狼人影院| 欧美最黄视频在线播放免费| 99国产精品一区二区蜜桃av| 久久婷婷成人综合色麻豆| 久久久久国产一级毛片高清牌| 免费在线观看完整版高清| av电影中文网址| 在线观看免费日韩欧美大片| 国产av在哪里看| 一本精品99久久精品77| 黑丝袜美女国产一区| 久久香蕉精品热| aaaaa片日本免费| 丰满的人妻完整版| 99久久99久久久精品蜜桃| 这个男人来自地球电影免费观看| 午夜福利在线在线| 日韩欧美国产在线观看| 亚洲九九香蕉| 成人特级黄色片久久久久久久| av片东京热男人的天堂| 久久精品国产清高在天天线| 色播在线永久视频| 免费看十八禁软件| 国产野战对白在线观看| 久久热在线av| а√天堂www在线а√下载| 丝袜在线中文字幕| 成熟少妇高潮喷水视频| 女性生殖器流出的白浆| 黄色成人免费大全| 亚洲成a人片在线一区二区| 久久精品国产清高在天天线| 成人永久免费在线观看视频| 香蕉国产在线看| 美女大奶头视频| 啦啦啦观看免费观看视频高清| а√天堂www在线а√下载| 久久久久久人人人人人| www.精华液| 成人亚洲精品一区在线观看| 久久香蕉精品热| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| www日本在线高清视频| 女警被强在线播放| 久久99热这里只有精品18| 在线观看舔阴道视频| 丝袜人妻中文字幕| 成人三级黄色视频| 日日夜夜操网爽| 免费搜索国产男女视频| 国产精品影院久久| 99国产综合亚洲精品| 亚洲成人免费电影在线观看| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 天堂√8在线中文| 国产精品98久久久久久宅男小说| 精品一区二区三区四区五区乱码| 久久久久久久久久黄片| 日韩精品中文字幕看吧| 免费在线观看黄色视频的| 欧美午夜高清在线| 国产成+人综合+亚洲专区| 日韩大码丰满熟妇| 嫩草影视91久久| 久久国产精品人妻蜜桃| 亚洲av熟女| 好男人电影高清在线观看| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 日韩欧美免费精品| 久久久久久九九精品二区国产 | 日本黄色视频三级网站网址| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 一进一出好大好爽视频| 久久国产亚洲av麻豆专区| 欧美日韩乱码在线| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 欧美黄色淫秽网站| 久久亚洲精品不卡| 欧美大码av| 成人免费观看视频高清| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 国产成人精品无人区| 亚洲熟女毛片儿| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 欧美av亚洲av综合av国产av| 高清在线国产一区|