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    蔥白提取物調(diào)節(jié)非酒精性脂肪肝脂質(zhì)水平的機(jī)制研究

    2017-02-23 14:01:37許思思時(shí)昭紅郭潔
    醫(yī)學(xué)信息 2016年36期
    關(guān)鍵詞:非酒精性脂肪肝脂質(zhì)

    許思思 時(shí)昭紅 郭潔

    摘要:目的 觀察蔥白提取物對非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)脂質(zhì)水平的影響,探討其防治NAFLD的作用機(jī)制。方法 采用高脂飼料喂養(yǎng)法復(fù)制非酒精性脂肪肝大鼠模型,造模成功后予以蔥白提取物及易善復(fù)進(jìn)行治療,同時(shí)用PKA抑制劑H89和cAMP激動劑Forskolin(FSK)作為對照,分為8組(正常對照組、模型組、易善復(fù)組、蔥白組、FSK組、H89組、蔥白-FSK組、蔥白-H89組)。結(jié)果 模型組大鼠血清TG、TC、肝組織TG、FFA、MDA含量明顯高于正常組,肝組織SOD含量明顯低于正常組;蔥白組、易善復(fù)組、蔥白-FSK組、蔥白-H89組大鼠血清TG、TC、肝組織TG、FFA、MDA含量顯著低于模型組,肝組織SOD含量高于模型組。其中蔥白-FSK組改善情況顯著高于蔥白組,蔥白-H89組低于蔥白組。結(jié)論 蔥白提取物能抑制脂肪在肝臟的過度蓄積,減輕脂質(zhì)過氧化,起到治療NAFLD的作用,其機(jī)制可能是與激活cAMP信號通路有關(guān)。

    關(guān)鍵詞:非酒精性脂肪肝;蔥白提取物;cAMP;脂質(zhì)

    非酒精性脂肪肝是指無過量飲酒史,以肝臟實(shí)質(zhì)細(xì)胞脂肪變性和脂肪貯積為特征的臨床綜合征,被認(rèn)為是代謝綜合征在肝臟的組成部分。其危害在于,隨著病情的進(jìn)展,NAFLD患者可發(fā)生不同程度的肝纖維化,并可發(fā)展成肝硬化,甚至導(dǎo)致肝癌[1],并且易于并發(fā)心腦血管疾病而導(dǎo)致相關(guān)的致死致殘率上升。本研究將通過探討蔥白提取物對非酒精性脂肪肝脂質(zhì)沉積水平的影響及相關(guān)分子機(jī)制,為其臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

    1 資料與方法

    1.1一般資料 SPF級SD雄性大鼠36只,體質(zhì)量(150±20)g,購自湖北省疾病控制中心(合格證編號:SCXK鄂2008-0005)。

    1.2藥物與試劑 高脂飼料購自北京華阜康生物科技股份有限公司;易善復(fù)膠囊(多烯磷脂酰膽堿,由北京賽諾菲制藥有限公司生產(chǎn),國藥準(zhǔn)字:H20059010)配置成14.25 g/L的溶液;蔥白提取物(由武漢市第一醫(yī)院制劑中心提供,批號080304)用植物油調(diào)勻配置成5 g/L的混懸液;FSK及H89(由谷歌生物有限公司提供,購自Sigma-Aldrich公司,貨號分別為F6886,B1427)分別配制成1×104 ng/ml及1×103 ng/ml的溶液;過氧化物歧化酶(SOD)試劑盒、丙二醛(MDA)試劑盒、甘油三酯(TG)試劑盒、游離脂肪酸(FFA)試劑盒及蛋白測定試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

    1.3主要儀器 電熱恒溫水箱(S648型,上海醫(yī)療器械廠),TU-1800S紫外可見分光光度計(jì)(由北京普析通用儀器有限責(zé)任公司生產(chǎn)),ZX6006臺式高速離心機(jī)(法國Jouan公司產(chǎn)品)。

    1.4造模 36只SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1 w后,隨機(jī)分為兩組:空白組6只,模型組30只。空白組大鼠給予普通飼料喂養(yǎng),模型組大鼠給予高脂飼料喂養(yǎng),所有大鼠均自由飲水進(jìn)食。12 w后隨機(jī)處死空白組及模型組大鼠各2只,根據(jù)肝組織病理切片及生化檢測結(jié)果,以30%以上的肝細(xì)胞均已形成大泡伴小泡性脂肪變性,及肝臟脂肪含量水平上升為標(biāo)準(zhǔn),確定造模成功[3]。

    1.5給藥 造模結(jié)束后,將模型組大鼠隨機(jī)分為7組:模型組、易善復(fù)組、蔥白組、Camp激動劑Froskolin(FSK)組、PKA抑制劑H89組、蔥白-FSK組、蔥白-H89組,分別進(jìn)行灌胃及腹腔注射治療。模型組:生理鹽水10 ml/(kg·d)灌胃,生理鹽水0.5 ml/(kg·d)腹腔注射;易善復(fù)組:多烯磷脂酰膽堿溶液142.5 mg/(kg·d)灌胃,生理鹽水0.5 ml/(kg·d)腹腔注射;蔥白組:蔥白提取物混懸液50 mg/(kg·d)灌胃,生理鹽水0.5ml/(kg·d)腹腔注射;FSK組:生理鹽水10 ml/(kg·d)灌胃,F(xiàn)SK溶液0.5 ml/(kg·d)腹腔注射;H89組:生理鹽水10 ml/(kg·d)灌胃,H89溶液0.5 ml/(kg·d)腹腔注射;蔥白-FSK組:蔥白提取物混懸液50 mg/(kg·d)灌胃,F(xiàn)SK溶液0.5 ml/(kg·d)腹腔注射;蔥白-H89組:蔥白提取物混懸液50 mg/(kg·d)灌胃,H89溶液0.5 ml/(kg·d)腹腔注射。4 w后處死所有大鼠,采集血液和肝臟標(biāo)本,做好標(biāo)記后放入-70℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.6觀察指標(biāo)及檢測

    1.6.1一般情況 觀察大鼠毛發(fā)、精神及食欲等情況。

    1.6.2血生化 測定血清甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)含量,采集血液標(biāo)本送交武漢市中西結(jié)合醫(yī)院檢驗(yàn)科完成。

    1.6.3組織學(xué)病檢 肉眼觀察肝臟的外觀,將每只大鼠肝臟剪取1 cm×1 cm大小,4%多聚甲醛固定標(biāo)本,石蠟切片進(jìn)行HE染色,在光鏡下觀察肝臟組織病理學(xué)情況。

    1.6.4比色法測定肝組織TG、FFA、SOD、MDA含量 在相同部位精確稱取肝臟100 mg加入勻漿器中,用無水乙醇/生理鹽水0.9 ml在冰水浴中制成10%的均漿,4℃3000r/min離心10min,提取上清液測定TG、FFA及SOD、MDA的含量。余下操作按試劑盒說明書進(jìn)行。紫外分光光度計(jì)下比色,記錄吸光度值,按試劑盒給出的公式計(jì)算出組織中TG、FFA、SOD、MDA的含量。

    1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以mean±SD來表示,結(jié)果用單因素方差分析,組間用q檢驗(yàn),P<0.05為有顯著差異性;P<0.01為有非常顯著差異性;P>0.05則為無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。軟件選用SPSS 19.0軟件包。

    2 結(jié)果

    2.1研究對象 正常對照組大鼠毛發(fā)光澤,食欲、食量、糞便及活動情況均正常,體重持續(xù)平穩(wěn)增加。模型組大鼠出現(xiàn)不同程度的精神萎靡,毛發(fā)黯淡,體重較正常大鼠減輕,食欲下降,活動度減少,反應(yīng)遲鈍。

    2.2肝組織病理學(xué)變化 肉眼觀察正常組大鼠肝臟呈鮮紅色,表面光滑,邊緣銳利。模型組大鼠肝臟較正常明顯增大,呈淺黃色,邊緣變鈍,切面有明顯的油膩感,與周圍組織粘連明顯。在光鏡下,正常組大鼠肝臟基本無異常變化,肝小葉結(jié)構(gòu)正常,無明顯脂滴分布。與正常組相比,模型組大鼠肝細(xì)胞可見重度的脂肪樣變性,肝細(xì)胞體積變大,細(xì)胞質(zhì)內(nèi)可見散在大小不等的圓形脂肪滴,匯管區(qū)可見炎癥細(xì)胞浸潤。與模型組比較,易善復(fù)組、蔥白組、蔥白-FSK組、蔥白-H89組肝細(xì)胞的脂肪變性程度均有不同程度的改善,以蔥白-FSK組的改善程度最明顯。

    2.3血清TC、TG變化 與正常組相比,模型組TG、TC顯著增高;與模型組相比較,易善復(fù)組、蔥白組、蔥白-FSK組、蔥白-H89組TG、TC有不同程度的下降;與蔥白組相比較,蔥白-FSK組TG、TC水平下降,其差異有顯著性意義(P<0.05);同樣與蔥白組相比,蔥白-H89組TG、TC含量則較高,其差異有顯著性意義(P<0.05)。見表1。

    2.4肝組織中TG、FFA、SOD、MDA含量變化 與正常組相比,模型組大鼠肝組織TG、FFA、MDA含量明顯增高,SOD含量明顯下降;與模型組相比較,易善復(fù)組、蔥白組、蔥白-FSK組、蔥白-H89組TG、FFA、MDA水平均有不同程度的下降,SOD的活性有不同程度的提高;與蔥白組相比較,蔥白-FSK組TG、FFA、MDA水平下降,SOD水平升高,其差異有顯著性意義(P<0.05);而與蔥白組比較,蔥白-H89組TG、FFA、MDA含量升高,SOD活性降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

    3 討論

    NAFLD是各種原因?qū)е碌母闻K脂肪蓄積過多的一種病理狀態(tài),主要是以肝細(xì)胞脂肪變性和脂質(zhì)貯積為特征。目前公認(rèn)的發(fā)病機(jī)制為"二次打擊"學(xué)說[2]:第一次打擊主要是各種原因引起的甘油三酯在肝臟中蓄積、排出障礙,引起脂肪肝的發(fā)生,這讓肝細(xì)胞變得容易受損傷;第二次打擊是氧化應(yīng)激導(dǎo)致脂質(zhì)過氧化,大量脂肪因子和細(xì)胞因子產(chǎn)生,使得脂肪變的肝細(xì)胞發(fā)生炎癥、壞死和纖維化。

    祖國醫(yī)學(xué)多將NAFLD歸屬于"積聚"、"痰濁"、"瘀血"、"肝癖"、"脅痛"等病證的范疇,認(rèn)為其發(fā)生與機(jī)體陽氣不足或陽氣郁閉、氣機(jī)不暢有關(guān)。"陽氣不通"貫穿于疾病的始終,是疾病發(fā)生、發(fā)展的關(guān)鍵環(huán)節(jié)[4]。蔥白提取物為百合科植物蔥的近根部莖萃取處理后的產(chǎn)物,有很強(qiáng)的通陽作用[5]。筆者實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,蔥白提取物能降低NAFLD大鼠脂質(zhì)水平,進(jìn)而改善肝臟脂肪過度堆積的狀態(tài),降低肝組織中MDA的含量,提高SOD的活性,抑制NAFLD的進(jìn)一步發(fā)展,促進(jìn)肝組織的修復(fù)。

    環(huán)磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)是一種環(huán)狀核苷酸,被稱為細(xì)胞內(nèi)的第二信使。cAMP介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑即是其中之一。cAMP信號傳導(dǎo)通路在脂代謝的調(diào)節(jié)中起重要作用,它可將cAMP依賴的蛋白激酶A(cAMP-dependentprotein kinaseA,PKA)激活,進(jìn)而誘導(dǎo)一系列蛋白質(zhì)磷酸化,最后抑制肝細(xì)胞脂質(zhì)合成。本試驗(yàn)采用cAMP激動劑FSK和PKA抑制劑H89作為對照,發(fā)現(xiàn)蔥白-FSK組比蔥白組更能改善肝臟脂肪沉積,減輕脂質(zhì)過氧化,而蔥白-H89組效果則及不上蔥白組,說明其機(jī)制可能與蔥白提取物激活了cAMP,介導(dǎo)了cAMP信號調(diào)節(jié)通路有關(guān)。

    參考文獻(xiàn):

    [1]范建高,曾民德.脂肪性肝病[M].第1版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2005:200-201.

    [2]Day CP.Pathogenesis of steatohepatitis[J].Best Praet Res Clin Gastroenterol,2002,16:663-678.

    [3]江慶瀾,徐邦牢.多烯磷脂酰膽堿對非酒精性脂肪肝大鼠的干預(yù)效果[J].廣州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2005,33(4):4-6.

    [4]時(shí)昭紅,張介眉.鮮蔥白提取物防治非酒精性脂肪肝的實(shí)驗(yàn)研究[J].中西醫(yī)結(jié)合肝病雜志,2009,19(4):229-231.

    [5]時(shí)昭紅,王湘寧,張長弓,等.蔥白提取物對非酒精性脂肪肝大鼠的治療作用[J].世界華人消化雜志,2010,18(27):2863-2868.

    編輯/周蕓霏

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