TPX2基因在宮頸癌診斷與治療的臨床價(jià)值

閆琴琴

摘要：目的 研究TPX2基因在宮頸癌診斷與治療的臨床價(jià)值。方法 采用RT-PCR技術(shù)和免疫組織化學(xué)法檢測(cè)正常宮頸組織、宮頸鱗癌組織、宮頸鱗癌 Siha 細(xì)胞系、宮頸腺癌組織、宮頸腺癌 HeLa 細(xì)胞系和上皮內(nèi)瘤變組織中TPX2基因的mRNA 和蛋白質(zhì)。結(jié)果 正常的宮頸組織TPX2mRNA表達(dá)量明顯低于其他非正常組（P<0.05），TPX2 蛋白很少出現(xiàn)在正常宮頸組織中，在宮頸鱗癌組織和上皮內(nèi)瘤變組織中表達(dá)強(qiáng)度增加，TPX2 蛋白表達(dá)強(qiáng)度與年齡關(guān)系不大，與病理級(jí)數(shù)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。結(jié)論 TPX2基因可以作為宮頸癌診斷與治療的一個(gè)指標(biāo)，具有重要的臨床價(jià)值。

關(guān)鍵詞：TPX2基因；TPX2 蛋白；宮頸癌

The Clinical Value of TPX2 Gene in the Diagnosis and Treatment of Cervical Cancer

YAN Qin-qin

（Qionglai Medical Center Hospital，Qionglai 611530，Sichuan，China）

Abstract：Objective Study on TPX2 gene in the clinical value of the diagnosis and treatment of cervical cancer. Methods Using RT-PCR technique and immunohistochemical detection of normal cervix， cervical squamous cell carcinomas， squamous cell cervical carcinoma Siha cell lines， cervical adenocarcinoma and cervical carcinoma HeLa cells and intraepithelial neoplasia TPX2 Gene's Messenger RNA and protein. Results Normal cervical tissue TPX2mRNA expression was significantly lower than that of other non-normal group （P<0.05）， theTPX2 proteins are rarely found in normal cervical tissue， in cervical squamous cell carcinoma and intraepithelial neoplasia intensity expressed in increases TPX2 protein expression and age have little to with series of pathology and lymph node metastasis. Conclusion TPX2 genes can be used as an indicator of cervical cancer diagnosis and treatment， is of great clinical value.

Key words：TPX2 gene； TPX2 protein； Cervical cancer

宮頸癌是一種常見的婦科惡性腫瘤，病因至今尚未完全明了，患者平均發(fā)病率，平均年齡都有差異。TPX是受細(xì)胞周期嚴(yán)格調(diào)控的微觀相關(guān)蛋白，作用發(fā)生在有絲分裂紡錘體形成過程中。資料顯示，TPX基因表達(dá)與一些癌癥發(fā)生有關(guān)，如乳腺癌等。本文研究TPX2基因表達(dá)與宮頸癌的關(guān)系，為宮頸癌的治療提供新思路，結(jié)果如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 2012年5月～2014年10月在我院確診的宮頸癌患者共有65例，年齡31～70歲，平均年齡48.9歲。這些患者手術(shù)切除宮頸癌，將這些完整的新鮮的宮頸癌組織放入液氮，放入-80 ℃冰箱保存。65例標(biāo)本中，宮頸鱗癌55例，將其分為三級(jí)：一級(jí)25例、二級(jí)13例、三級(jí)17例；宮頸腺癌10例，也將其分為三級(jí)：一級(jí)5例、二級(jí)4例、三級(jí)1例。在這65例標(biāo)本中，發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移14例，淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移51例。病歷存檔的宮頸上皮內(nèi)瘤變組有35例，患者平均年齡為44.6歲，患者分為CINⅠ10 例，CINⅡ14例，CINⅢ11例。對(duì)照組為正常宮頸組織，來自于子宮肌瘤患者，共20例，年齡35～67歲，平均年齡51.5歲。

1.2方法

1.2.1收集標(biāo)本 在患者放療和化療之前采集，同時(shí)取對(duì)照組的標(biāo)本。

1.2.2培養(yǎng)標(biāo)本 將患者的HeLa、Siha細(xì)胞分開培養(yǎng)，培養(yǎng)基為 10% FBS 的 RPMI1640 培養(yǎng)基，保存于37℃，待細(xì)胞生長合適時(shí)，進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1.2.3提取基因 使用試劑盒提取標(biāo)本的總RNA，加入試劑防止RNA降解，同時(shí)冰凍保存（-80℃）。

1.2.4分析基因 利用用 1.5%的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)基因的完整性，分光光度計(jì)測(cè)定 260/280nm波長處測(cè)定吸光度值，確定基因濃度和純度。

1.2.5 RT-PCR 按照試劑盒，添加引物（上?；に?，按照操作，擴(kuò)增TPX2基因。

1.2.6跑電泳 將第四步獲得的產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，檢測(cè)。

1.2.7免疫組化檢測(cè) 免疫組化 SP 法檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)操作按照SP試劑盒說明，切片脫蠟，高溫修復(fù)，去除氧化酶，分別添加TPX2一抗、TPX2二抗、TPX2三抗，然后進(jìn)行顯色，復(fù)染、封片。

1.2.8檢測(cè)結(jié)果判斷 檢測(cè)染色陽性細(xì)胞的數(shù)量和強(qiáng)度。

1.3結(jié)果評(píng)價(jià) 將本次染色為4個(gè)等級(jí)：0分：原色（沒有著色），1分：淺黃色（弱染色），2分：棕黃色（中染色）和3分：黃褐色（強(qiáng)染色）。將本次細(xì)胞陽性率為4個(gè)等級(jí)：0分：陽性率小于5%，1分：5%-25%，2分：25%-50%，和3分：大于50%。將以上兩項(xiàng)相加，也分為4個(gè)等級(jí)：0分：（-），1～2分：（+），3～4分：（+ +），和5～6分：（+ + +）。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 本實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)使用軟件SPSS 15.0統(tǒng)計(jì)分析，其中采用t 檢驗(yàn)進(jìn)行計(jì)量資料對(duì)比，采用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行計(jì)數(shù)資料對(duì)比。P<0.05說明兩種治療方式之間存在差異，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 。

2 結(jié)果

根據(jù)RT-PCR 檢測(cè)結(jié)果顯示，正常的宮頸組織的TPX2 的 mRNA表達(dá)量為（0.079±0.028），宮頸鱗癌組織與宮頸腺癌組織的表達(dá)量分別是（0.452±0.009）和（0.507±0.029），HeLa細(xì)胞和Siha細(xì)胞的表達(dá)量分別為（1.892±0.037）和）1.701±0.038）。正常的宮頸組織TPX2mRNA表達(dá)量明顯低于其他非正常組（P<0.05）。

結(jié)果顯示，TPX2 蛋白表達(dá)強(qiáng)度與年齡關(guān)系不大（P>0.05），隨著病理級(jí)數(shù)的增大，表達(dá)強(qiáng)度增大（P<0.05），淋巴轉(zhuǎn)移強(qiáng)于淋巴未轉(zhuǎn)移的（P<0.05）。

3 結(jié)論

宮頸癌是一種常見的婦科惡性腫瘤，并且是惡性腫瘤中最多見的癌瘤[1]。它的發(fā)病率差異較大，該疾病是由人類乳頭瘤病毒引發(fā)的，可以通過皮膚傳播，潛伏期較長，前期無癥狀，后期表現(xiàn)為陰道出血、陰道分泌物增多等，一般檢查方式為宮頸細(xì)胞刮片檢查、陰道檢查等[2-3]。

TPX是受細(xì)胞周期嚴(yán)格調(diào)控的微觀相關(guān)蛋白，作用發(fā)生在有絲分裂紡錘體形成過程中，資料顯示，TPX基因表達(dá)與一些癌癥發(fā)生有關(guān)，如乳腺癌、肺癌等。參與紡錘體形成裝等，主要表達(dá)在細(xì)胞有絲分裂的S期[4]。本文研究TPX2基因表達(dá)與宮頸癌的關(guān)系，為宮頸癌的治療提供新思路，正常的宮頸組織TPX2mRNA表達(dá)量明顯低于其他非正常組（P<0.05），正常的宮頸組織的TPX2的mRNA表達(dá)量僅為（0.079±0.028）。其次，TPX2蛋白在正常宮頸組織、宮頸鱗癌組織、宮頸鱗癌 Siha 細(xì)胞系、宮頸腺癌組織、宮頸腺癌 HeLa 細(xì)胞系和上皮內(nèi)瘤變組織也不相同，TPX2 蛋白在正常宮頸組織中沒有表現(xiàn)，在宮頸鱗癌組織和上皮內(nèi)瘤變組織中表達(dá)強(qiáng)度增加，可以推測(cè)TPX2 蛋白對(duì)癌癥的發(fā)生有促進(jìn)作用。

綜上所述，TPX2 可以作為一個(gè)研究點(diǎn)，作為宮頸癌診斷與治療的一個(gè)指標(biāo)，具有重要的臨床價(jià)值。

參考文獻(xiàn)：

[1]付麗麗.宮頸癌的預(yù)防與治療[J].藥物與臨床，2014（S2）：200-201.

[2]Y.Liu，Z.Ye，H.Sun，等. 利用ADC差值及其與微血管密度及血管內(nèi)皮生長因子的相關(guān)性進(jìn)行宮頸癌分級(jí)的研究[J]. 國際醫(yī)學(xué)放射學(xué)雜志，2013，36（3）：288-289.

[3]王錚，李徐奇，徐軍，等. 沉默 CXCR4 基因表達(dá)抑制胰腺癌增殖和侵襲的體外研究[J].第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，34（4）：279-283.

[4]劉梅，唐玉云，唐惠英. 宮頸癌腹腔鏡根治術(shù)與開腹手術(shù)的臨床療效分析[J].海南醫(yī)學(xué)，2013，24（14）：2077-2079.

編輯/蔡睿琳