中期因子和微血管密度在涎腺腺樣囊性癌組織中的表達(dá)

陳俊??李姬梅??李偉??胡紅梅.井岡山大學(xué)附屬醫(yī)院口腔科，吉安?4000；.江西省吉水縣人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，吉水?600 .井岡山大學(xué)醫(yī)學(xué)院解剖學(xué)與組織胚胎學(xué)教研室，吉安?4000

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中期因子和微血管密度在涎腺腺樣囊性癌組織中的表達(dá)

陳俊1李姬梅2李偉1胡紅梅3
1.井岡山大學(xué)附屬醫(yī)院口腔科，吉安?343000；2.江西省吉水縣人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，吉水?331600 3.井岡山大學(xué)醫(yī)學(xué)院解剖學(xué)與組織胚胎學(xué)教研室，吉安?343000

[摘要]目的 探討中期因子（MK）、微血管密度（MVD）在涎腺腺樣囊性癌（SACC）組織中的表達(dá)和意義，以及兩者之間表達(dá)的相關(guān)性。方法 采用免疫組織化學(xué)方法（SP法）檢測(cè)60例SACC組織及26例正常涎腺組織中MK、MVD的表達(dá)狀況及兩者之間的相關(guān)性。結(jié)果 MK在SACC組織中高表達(dá)，陽(yáng)性表達(dá)率為70.0%（42/60），正常組織中未見MK表達(dá)，二者間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。SACC中MVD計(jì)數(shù)為38.73±8.96，正常涎腺組織中MVD計(jì)數(shù)為11.15±3.33，二者間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。MK、MVD的表達(dá)與年齡、性別、分型無(wú)關(guān)（P＞0.05）；與腫瘤的大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期有關(guān)（P＜0.05）。MK和MVD在SACC中的表達(dá)具有正相關(guān)性（r=0.560，P＜0.05）。結(jié)論 MK蛋白的表達(dá)、MVD計(jì)數(shù)的增加與SACC的發(fā)生有關(guān)，可能是SACC早期診斷指標(biāo)之一。

[關(guān)鍵詞]涎腺腺樣囊性癌； 中期因子； 微血管密度； 免疫組織化學(xué)； 涎腺

涎腺腫瘤（salivary?gland?tumors，SGT）是口腔頜面部常見的腫瘤，以中老年居多，在全球范圍內(nèi)涎腺腫瘤的發(fā)病率居全身腫瘤的1%~4%[1-2]。涎腺腺樣囊性癌（salivary?adenoid?cystic?carcinoma，SACC）過(guò)去曾稱“圓柱瘤”（cylindroma），是最常見的唾液腺惡性腫瘤之一，臨床病理已證實(shí)，此腫瘤浸潤(rùn)性極強(qiáng)，易沿神經(jīng)擴(kuò)散，易侵入血管，常造成血行性轉(zhuǎn)移。中期因子（midkine，MK）是近來(lái)新發(fā)現(xiàn)的一種自分泌型肝素結(jié)合生長(zhǎng)因子，在乳腺癌、肺癌、胃癌、宮頸癌、骨髓瘤、口腔鱗狀細(xì)胞癌等多種惡性腫瘤中，MK均呈高表達(dá)，并且證實(shí)與腫瘤血管新生有密切關(guān)系。微血管密度（microvessel?density，MVD）1992年由Weidner等[3]報(bào)道，它是用來(lái)計(jì)數(shù)腫瘤內(nèi)血管生成的數(shù)量。但MK和MVD在SACC中的相關(guān)報(bào)道較少。本研究旨在通過(guò)研究MK與MVD 在SACC中的表達(dá)是否具有相關(guān)性，來(lái)探討MK在促進(jìn)腫瘤血管生成中的作用以及腫瘤微血管與腫瘤本身的關(guān)系。

1??材料和方法

1.1??標(biāo)本來(lái)源

標(biāo)本來(lái)源于南昌大學(xué)附屬口腔醫(yī)院口腔頜面外科2001年1月—2011年8月手術(shù)切除并經(jīng)病理證實(shí)的60例SACC組織和26例正常涎腺組織。SACC患者中男性25例，女性35例，年齡17~80歲，平均年齡為50.4歲；根據(jù)腫瘤生長(zhǎng)部位，其中舌下腺16例，腭腺14例，下頜下腺6例，腮腺13例，磨牙后腺11例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移9例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有51例。根據(jù)2005年世界衛(wèi)生組織（World?Health?Organization，WHO）唾液腺腫瘤組織病理學(xué)分類標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)60例SACC進(jìn)行病理分類，其中篩狀型20例，管狀型21例，實(shí)性型19例；通過(guò)病理分級(jí)檢測(cè)瘤組織的成熟程度，其中高分化20例，中分化25例，低分化15例；按2002年國(guó)際抗癌聯(lián)盟（Union?for?International?Cancer?Control，UICC）涎腺癌國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)60例SACC作TNM分期，其中T1為17例，T2為22例，T3+T4為21例。所有患者術(shù)前均未接受放化療。

1.2??試劑

MK兔抗人多克隆抗體（北京博奧森生物技術(shù)有限公司）；MVD鼠抗人單克隆抗體、SP試劑盒及DAB（福建邁新生物技術(shù)有限公司）。

1.3??方法

所有標(biāo)本均經(jīng)4%甲醛固定，石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片4張，MK蛋白和由CD34標(biāo)記的MVD均采用免疫組織化學(xué)SP法，MK的工作濃度1︰500，DAB染色，實(shí)驗(yàn)程序按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行，PBS代替一抗空白對(duì)照。

1.4??結(jié)果判定

1.4.1???MK的結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) ??MK蛋白在腫瘤細(xì)胞漿和（或）細(xì)胞膜中表達(dá)，判定陽(yáng)性反應(yīng)依據(jù)以下兩個(gè)方面：1）按顯色強(qiáng)度：細(xì)胞無(wú)染色記0分，呈黃色記1分，呈棕黃色記2分，呈棕褐色記3分；2）按陽(yáng)性細(xì)胞百分比評(píng)分：按光鏡下（×400）隨機(jī)選10個(gè)視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞。計(jì)數(shù)細(xì)胞若＜25% 為1分，25%~50%為2分，＞50%為3分；兩個(gè)方面的乘積＞3分計(jì)為陽(yáng)性，≤3分計(jì)為陰性。

1.4.2??CD34的結(jié)果判定及血管計(jì)數(shù)方法 ?用Weidner 等[3]報(bào)道的方法，陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)為：1）每1個(gè)染成棕黃色的，可以與周圍血管、腫瘤細(xì)胞及其他結(jié)締組織相分離的血管內(nèi)皮細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞簇，認(rèn)定為1個(gè)單一的計(jì)數(shù)的微血管。2）可能源于同一微血管的內(nèi)皮細(xì)胞，如染色清晰且相互分離，也可作為單獨(dú)的微血管計(jì)數(shù)。3）血管腔內(nèi)有無(wú)紅細(xì)胞不是確認(rèn)微血管的必備條件。4）對(duì)腫瘤細(xì)胞稀疏區(qū)及鄰近良性組織區(qū)域內(nèi)的血管不進(jìn)行計(jì)數(shù)。5）對(duì)管腔直徑＞10個(gè)紅細(xì)胞的血管不進(jìn)行計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)方法：先在低倍鏡下（×40）觀察整個(gè)切片，尋找高血管密度區(qū)，即“熱點(diǎn)”，然后在高倍鏡下（×200）計(jì)數(shù)被染成棕黃色的血管數(shù)目，再計(jì)數(shù)4個(gè)高倍鏡視野下血管的數(shù)目，此操作由兩個(gè)人采用雙盲法執(zhí)行，取兩人計(jì)數(shù)結(jié)果的平均值作為MVD列入分析。

1.5??統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS?17.0軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用卡方檢驗(yàn)和（或）精確概率計(jì)算法，對(duì)相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2??結(jié)果

在60例SACC中，MK陽(yáng)性表達(dá)者42例，陽(yáng)性表達(dá)率為70.0%（42/60）；正常涎腺組織中未見MK陽(yáng)性表達(dá)，二者間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=51，P= 0.00）。在癌細(xì)胞中，MK主要位于細(xì)胞漿及核膜，呈黃色或棕黃色顆粒狀物質(zhì)（圖1）。

圖 ?1??MK在SACC組織中呈陽(yáng)性表達(dá) ?SP??×?400Fig?1??The?positive?expression?of?MK?in?SACC??SP??×?400

CD34標(biāo)記的MVD染色主要是定位于新形成血管的內(nèi)皮上，呈黃色或棕黃色，腫瘤灶的邊緣處為染色最密集的區(qū)域，顯微鏡下觀察，有些SACC的新生血管已經(jīng)形成了管腔樣結(jié)構(gòu)，有些新生的血管的內(nèi)皮細(xì)胞只是呈星點(diǎn)狀或線條狀分布，MVD在SACC組織中呈陽(yáng)性表達(dá)（圖2、3）。SACC中MVD計(jì)數(shù)（38.73±8.96）明顯高于正常涎腺組織（11.15± 3.33），二者間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=15.920，P= 0.00）。

圖 ?2??MVD在SACC組織中呈陽(yáng)性表達(dá) ?SP??×?400Fig?2??The?positive?expression?of?MVD?in?SACC??SP??×?400

圖 ?3??新生血管的形態(tài)與結(jié)構(gòu) ?SP??×?400Fig?3??The?morphology?and?structure?of?neovascularization??SP??×?400

MK在SACC組織中的陽(yáng)性表達(dá)與患者的年齡、性別、分型及腫瘤分布的部位無(wú)關(guān)（P＞0.05），而與腫瘤范圍大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期有關(guān)（均P＜0.05）；CD34標(biāo)記的MVD計(jì)數(shù)與患者的年齡、性別、分型及腫瘤分布的部位無(wú)關(guān)（P＞0.05），而與腫瘤的大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期有關(guān)（均P＜0.05）（表1）。

表 ?1 ?MK、MVD與SACC臨床病理特征的關(guān)系Tab 1 Relationship between the expression of MK and MVD and clinical and pathological parameters of SACC

SACC組織中，MVD與MK的表達(dá)水平間存在正相關(guān)關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r=0.560，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。MK陽(yáng)性表達(dá)病例為42例，MVD計(jì)數(shù)為40.23±6.67；MK陰性表達(dá)病例為18例，MVD計(jì)數(shù)為38.22±6.89，二者間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=36.459，P＜0.05）。

3 ?討論

MK是近來(lái)新發(fā)現(xiàn)的一種肝素結(jié)合性生長(zhǎng)因子家族成員之一，其功能首先被定位于神經(jīng)系統(tǒng)中神經(jīng)細(xì)胞的發(fā)育及分化[4]，以后人們發(fā)現(xiàn)在消化、呼吸、血液、生殖等諸多系統(tǒng)中都存在MK[5]，MK不僅與正常的生理有關(guān)，還與炎癥、創(chuàng)傷及腫瘤等病態(tài)生理有關(guān)[6]。生理情況下，MK基因表達(dá)隨個(gè)體發(fā)育而變化，在胚胎期高表達(dá)，出生后逐漸降低；在成年組織中，除腎臟和小腸上皮外，其他部位幾乎不表達(dá)。近來(lái)許多研究[7-11]表明，MK?mRNA在多種癌組織中呈高頻率、高強(qiáng)度表達(dá)，這可能與腫瘤的發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移有關(guān)。超過(guò)60%的成人實(shí)體瘤患者的血清中均可檢測(cè)到高水平的MK，當(dāng)腫瘤切除后，再檢測(cè)發(fā)現(xiàn)患者血清中MK濃度呈明顯的下降。隨后Ikematsu等[12]又報(bào)道，在膀胱癌、結(jié)腸癌、肝癌、胰腺癌、胃癌等惡性腫瘤患者的尿液中MK的質(zhì)量濃度也明顯升高。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在SACC組織中MK呈高表達(dá)，而正常涎腺組織中未見MK的表達(dá)，MK可能作為SACC的一個(gè)診斷指標(biāo)。MK的表達(dá)與臨床分期和分化類型及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，表明隨著臨床分期和淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移，MK的表達(dá)增強(qiáng)，提示MK的表達(dá)可能與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，所以，MK可能成為臨床上評(píng)估SACC發(fā)展的指標(biāo)之一。此外，本實(shí)驗(yàn)還分析了MK與SACC臨床病理特征的關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)MK蛋白的表達(dá)與患者的年齡、性別、SACC的病理分型無(wú)相關(guān)性（P＞0.05）。本課題通過(guò)觀察SACC的免疫組織化學(xué)染色切片發(fā)現(xiàn)，在SACC組織中癌細(xì)胞的胞漿及核膜是MK蛋白主要的分布區(qū)域，在核膜上高表達(dá)MK有可能進(jìn)入到細(xì)胞核內(nèi)，通過(guò)某些信號(hào)通路來(lái)調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖與分化功能，從而腫瘤的產(chǎn)生。

目前大多數(shù)研究認(rèn)為，血管的新生有利于腫瘤的生長(zhǎng)、浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移。腫瘤組織中新生的血管基底膜較薄并且易斷裂，腫瘤細(xì)胞很容易侵入血管內(nèi)，繼而通過(guò)血液途徑而向遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。近年來(lái)，在研究腫瘤血管新生的報(bào)道中，所采用的血管內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記物[13]中以CD34最具代表，CD34通常在增殖的血管內(nèi)皮細(xì)胞和腫瘤組織內(nèi)血管生成旺盛的血管內(nèi)皮細(xì)胞中呈過(guò)表達(dá)，而在正常成熟的血管內(nèi)皮細(xì)胞中通常呈弱表達(dá)或不表達(dá)[14]。本研究結(jié)果顯示，SACC和正常涎腺組織比較，前者M(jìn)VD值顯著高于后者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。在顯微鏡下可觀察到，腫瘤組織中不僅有血管數(shù)目增加，而且新生血管的形態(tài)和結(jié)構(gòu)也有明顯變化，主要表現(xiàn)在：新生血管大部分為發(fā)育不完善，管壁僅為一層內(nèi)皮細(xì)胞，有些地方呈點(diǎn)隙裂狀，缺乏基底膜。因此，可以推測(cè)SACC中血管新生的這些情況給腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移提供了阻力最小的通道，給SACC易發(fā)生血行性轉(zhuǎn)移提供了有力的證據(jù)。此外，SACC的MVD值與淋巴結(jié)狀態(tài)有關(guān)，淋巴結(jié)陰性組（36.41±4.32）高于陽(yáng)性組（33.88±4.75），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移依賴于腫瘤血管的生成。本研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，MK在SACC細(xì)胞外間質(zhì)中的纖維組織、血管內(nèi)彈力膜層及內(nèi)皮細(xì)胞也有表達(dá)，提示MK可能具有刺激內(nèi)皮細(xì)胞增殖、促進(jìn)血管生成的作用，與Mashour等[15]報(bào)道相一致。另外，MK與MVD在SACC中的表達(dá)具有相關(guān)性，說(shuō)明MK具有促進(jìn)腫瘤血管生成的作用，也說(shuō)明腫瘤微血管與腫瘤本身有密切關(guān)系。

[參考文獻(xiàn)]

[1]?Spiro?RH.?Salivary?neoplasms:?overview?of?a?35-year?experience?with?2,807?patients[J].?Head?Neck?Surg,?1986,?8 (3):177-184.

[2]?Alves?FA,?Pires?FR,?De?Almeida?OP,?et?al.?PCNA,?Ki-67?and?p53?expressions?in?submandibular?salivary?gland?tumours [J].?Int?J?Oral?Maxillofac?Surg,?2004,?33(6):593-597.

[3]?Weidner?N,?Folkman?J,?Pozza?F,?et?al.?Tumor?angiogenesis:?a?new?significant?and?independent?prognostic?indicator?in?early-stage?breast?carcinoma[J].?J?Natl?Cancer?Inst,?1992,?84(24):1875-1887.

[4]?Iwashita?N,?Muramatsu?H,?Toriyama?K,?et?al.?Expression?of?midkine?in?normal?and?burn?sites?of?rat?skin[J].?Burns,?1999,?25(2):119-124.

[5]?Kadomatsu?K,?Muramatsu?T.?Midkine?and?pleiotrophin?in?neural?development?and?cancer[J].?Cancer?Lett,?2004,?204 (2):127-143.

[6]?陸巍,?童漢興,?周恒花,?等.?乳腺癌組織中中期因子的表達(dá)及其臨床意義[J].?中國(guó)臨床醫(yī)學(xué),?2008,?15(3):433-434. Lu?W,?Tong?HX,?Zhou?HH,?et?al.?Clinical?significance?of?midkine?expression?in?breast?cancer[J].?Clin?Med?J?Chin,?2008,?15(3):433-434.

[7]?欒兆吉,?諸蘭艷.?中期因子在肺癌中的研究進(jìn)展[J].?國(guó)際呼吸雜志,?2010,?30(4):229-233. Luan?ZJ,?Zhu?LY.?Research?progress?of?midkine?in?lung?cancer[J].?Int?J?Respir,?2010,?30(4):229-233.

[8]?石清濤,?寧曉明,?馮占軍.?中期因子在胃癌中的表達(dá)及其意義[J].?腫瘤防治研究,?2008,?35(1):30-32. Shi?QT,?Ning?XM,?Feng?ZJ.?Expression?of?midkine?in?gas-tric?cancer?and?its?clinical?significance[J].?Cancer?Res?Prevent?Treat,?2008,?35(1):30-32.

[9]?王耀先,?于輝,?陳秀瑋,?等.?宮頸癌組織中中期因子表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系[J].?哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),?2008,?42(6):622-624. Wang?YX,?Yu?H,?Chen?XW,?et?al.?Relationship?between?the?expression?of?midkine?factor?and?the?character?of?clinical?pathology?in?cervical?cancer[J].?J?Harbin?Med?Uni,?2008,?42(6):622-624.

[10]?高順姬,?李廣倫.?中期因子及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子在多發(fā)性骨髓瘤患者骨髓中的表達(dá)及意義[J].?中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志,?2009,?17(6):1464-1467. Gao?SJ,?Li?GL.?Expression?of?midkine?and?vascular?endothelial?growth?factor?in?bone?marrow?of?patients?with?multiple?myeloma?and?its?significance[J].?J?Exp?Hematol,?2009,?17(6):1464-1467.

[11]?李光宇,?毛雄輝,?孫冀.?Cyclin?D1和中期因子在口腔鱗狀細(xì)胞癌中表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究[J].?口腔頜面外科雜志,?2008,?18(6):390-393. Li?GY,?Mao?XH,?Sun?J.?Expression?of?Cyclin?D1?and?midkine?in?oral?squamous?cell?carcinoma[J].?J?Oral?Maxillofac?Surg,?2008,?18(6):390-393.

[12]?Ikematsu?S,?Okamoto?K,?Yoshida?Y,?et?al.?High?levels?of?urinary?midkine?in?various?cancer?patients[J].?Biochem?Biophys?Res?Commun,?2003,?306(2):329-332.

[13]?Brewer?CA,?Setterdahl?JJ,?Li?MJ,?et?al.?Endoglin?expression?as?a?measure?of?microvessel?density?in?cervical?cancer[J].?Obstet?Gynecol,?2000,?96(2):224-228.

[14]?李丙華,?徐婭蘋,?陳鳴,?等.?CD105與CD34在喉癌微血管中的表達(dá)及臨床意義[J].?浙江預(yù)防醫(yī)學(xué),?2004,?16(6):18-19. Li?BH,?Xu?YP,?Chen?M,?et?al.?A?study?on?the?expression?of?CD105and?CD34in?microvessel?and?its?clinical?significance?in?laryngocarcinoma?patients[J].?Zhejiang?J?Prevent?Med,?2004,?16(6):18-19.

[15]?Mashour?GA,?Ratner?N,?Khan?GA,?et?al.?The?angiogenic?factor?midkine?is?aberrantly?expressed?in?NF1-deficient?Schwann?cells?and?is?a?mitogen?for?neurofibroma-derived?cells[J].?Oncogene,?2001,?20(1):97-105.

（本文編輯 ?杜冰）

[中圖分類號(hào)]R?739.87

[文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A???[doi] ??10.7518/hxkq.2016.02.017

[收稿日期]2015-07-13；?[修回日期] ?2015-11-03

[作者簡(jiǎn)介]陳俊，主治醫(yī)師，碩士，E-mail：huhongmei1218@126.com

[通信作者]胡紅梅，副教授，碩士，E-mail：huhongmei503@126.com

Expression of midkine and microvessel density in salivary adenoid cystic carcinoma

Chen Jun1, Li Jimei2, Li Wei1, Hu Hongmei3. (1. Dept. of Stomatology, The Affiliated Hospital of Jinggangshan University, Ji’an 343000, China; 2. Dept. of Gynaecology and Obstetrics, People’s Hospital of Jishui County, Jiangxi Province, Jishui 331600, China; 3. Dept. of Histology and Embryology, Medical College of Jinggangshan University, Ji’an 343000, China)
Correspondence: Hu Hongmei, E-mail: huhongmei503@126.com.

[Abstract]Objective This?study?aimed?to?investigate?the?expression?of?midkine?(MK)?and?microvessel?density?(MVD)?in?patients?with?salivary?adenoid?cystic?carcinoma?(SACC)?and?its?clinical?significance,?as?well?as?detect?the?correlation?between?the?expression?of?MK?and?MVD?in?SACC.?Methods??Immunohistochemistry?analysis?(SP?method)?for?MK?and?MVD?were?performed?on?60?cases?of?SACC?and?26?cases?of?normal?salivary?gland?tissue.?The?expression?of?MK?and?MVD,?as?well?as?the?correlation?between?the?expression?of?MK?and?MVD?in?SACC?were?detected.?Results???In?SACC,?the?MK?expression?rate?was?70.0%?(42/60),?and?MK?was?not?expressed?in?normal?tissue.?Statistical?significance?was?found?between?SACC?and?normal?tissue?(P<0.05).?The?MVD?values?in?SACC?and?normal?salivary?gland?tissues?were?38.73±8.96?and?11.15±3.33,?respectively.?These?values?were?statistically?significant?(P<0.05).?The?expression?levels?of?MK?and?MVD?were?unrelated?to?age,?gender,?and?type?in?SACC?(P>0.05),?but?correlated?with?tumor?size,?lymph?node?metastasis,?and?tumor–node–metastasis?in?SACC?(P<0.05).?The?expression?of?MK?and?MVD?was?positively?correlated?with?SACC?(r=0.560,?P<0.05).?Conclusion?SACC?is?correlated?with?the?expression?of?MK?protein?and?the?increase?in?MVD,?which?may?be?some?of?the?early?diagnostic?markers?in?SACC.

[Key words]salivary?adenoid?cystic?carcinoma;??midkine;??microvessel?density;??immunohistochemistry;??salivary?gland