卡巴匹林鈣在豬體內(nèi)的藥代動力學(xué)和安全性研究

韓可可，陳 紅，田玉柱，王 佩，王嘉鵬，徐 維，權(quán) 丹，周雨卉

（1.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院，廣東 廣州 510642；2.山東齊魯動物保健品有限公司，山東 濟南 250100）

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卡巴匹林鈣在豬體內(nèi)的藥代動力學(xué)和安全性研究

韓可可1，陳 紅1，田玉柱2，王 佩1，王嘉鵬1，徐 維1，權(quán) 丹1，周雨卉1

（1.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院，廣東 廣州 510642；2.山東齊魯動物保健品有限公司，山東 濟南 250100）

摘 要：研究了豬單劑量口服、靜注40 mg/kg.bw卡巴匹林鈣后其代謝產(chǎn)物阿司匹林和水楊酸的藥代動力學(xué)過程，并按照1、3、5倍推薦劑量進(jìn)行了卡巴匹林鈣可溶性粉對靶動物豬的安全性試驗。藥動學(xué)試驗通過HPLC-UV測定不同采樣時間點的血藥濃度，數(shù)據(jù)用WinNonlin5.2.1軟件的非房室模型進(jìn)行擬合。結(jié)果表明，卡巴匹林鈣給藥后，代謝產(chǎn)物阿司匹林和水楊酸達(dá)峰快，峰濃度高。安全性評價試驗則通過測定血常規(guī)、血生化指標(biāo)來評估。給藥組與對照組相比，WBC、RBC、HGB等血液生理常規(guī)指標(biāo)及AST、GLU、TG、TC等血液生化指標(biāo)沒有顯著差異，臨床也未觀察到不良反應(yīng)。結(jié)果表明，卡巴匹林鈣可溶性粉5倍推薦劑量給藥，對靶動物豬是安全的。

關(guān)鍵詞：卡巴匹林鈣；豬；藥代動力學(xué)；安全性評價

卡巴匹林鈣（Carbasalate Calcium）是阿司匹林鈣與尿素的絡(luò)合物，最早由荷蘭默沙東（DSM）公司研制生產(chǎn)。卡巴匹林鈣的代謝特點和藥理作用與阿司匹林相同，在水中水解為阿司匹林而發(fā)揮解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎及抑制血小板聚集的作用。目前，歐盟已經(jīng)批準(zhǔn)卡巴匹林鈣用于除水生動物外的所有食品動物，美國FDA也將其列為非處方藥。在國內(nèi)，卡巴匹林鈣正逐步推廣應(yīng)用于畜禽養(yǎng)殖業(yè)［1］。本試驗對卡巴匹林鈣可溶性粉在豬體內(nèi)的藥代動力學(xué)進(jìn)行研究，并對其安全性進(jìn)行評價，為其在獸醫(yī)臨床的合理用藥提供理論依據(jù)。

1　材料與方法

1.1 試驗材料

卡巴匹林鈣可溶性粉（批號為1405014，含量50%，齊魯動物保健品有限公司提供），卡巴匹林鈣原料藥（以無水化合物計含量100.04%，齊魯動物保健品有限公司提供），阿司匹林標(biāo)準(zhǔn)品（含量100%，購自中國食品藥品檢定研究院），水楊酸標(biāo)準(zhǔn)品（含量99.9%，購自中國食品藥品檢定研究院）。高效液相色譜系統(tǒng)（Waters2695），紫外檢測器（Waters2487），MEK-6138K全自動血液學(xué)分析儀（日本光電工業(yè)株式會社），魅力1800自動血液生化分析儀（美國MD儀器公司）

1.2 藥動學(xué)研究方法

1.2.1 樣品采集 將6頭健康三元雜交大白豬（體重20～25 kg）隨機交叉試驗設(shè)計，分兩組，每組3頭。一組按40 mg/kg（BW）的劑量耳緣靜脈注射原料藥配置的靜注液，另一組按80 mg/kg（BW）灌服卡巴匹林鈣可溶性粉。口服給藥的豬分別于給藥前和給藥后5 min、15 min、0.5 h、0.75 h、1 h、1.5 h、2 h、3 h、4 h、6 h、8 h、12 h、24 h于前腔靜脈采血。靜脈注射給藥的豬分別于給藥前和給藥后5 min、15 min、0.5 h、0.75 h、1 h、2 h、3 h、4 h、6 h、8 h、12 h、24 h于前腔靜脈采血。血樣離心（3 000 r/min，10 min）后取2～3 m L血漿加入100 μL 1 mol/L鹽酸［2］，立即放入-70℃冰箱保存。第1次試驗結(jié)束后，飼養(yǎng)1周，交叉給藥。

1.2.2 血漿樣品前處理 取肝素抗凝血漿0.5 mL，置于1.5 m L尖底離心管中，加入0.5 m L色譜乙腈，渦旋30 s，12 000 r/min離心10 min后取上清液，過孔徑0.22 μm的尼龍濾膜，上機檢測。

1.2.3 檢測條件 色譜柱：Hypersil BDS C18（5 μm 250 mm×4.6 mm）；流動相：甲醇∶乙腈∶流動相I為10∶20∶70（體積比，流動相I∶1‰磷酸水，用三乙胺調(diào)pH值到2.3～2.4，過孔徑0.22 μm的水系濾膜）；波長：230 nm；流速：0.9 mL/min；柱溫：20℃；進(jìn)樣量：10 μL。

1.3 安全性評價試驗方法

將24頭健康長白 × 大白二元雜交豬（公母兼有，體重25 kg左右）隨機分為4組，分別為空白對照組、1倍劑量組、3倍劑量組、5倍劑量組，每組6頭。1倍劑量組、3倍劑量組、5倍劑量組分別按80、240、400 mg/kg（BW）口服卡巴匹林鈣可溶性粉，連續(xù)給藥5 d（1次/d）。連續(xù)給藥5 d后24 h，前腔靜脈采集各組試驗豬的血液，包括鮮血（加抗凝劑）和分離血清（不加抗凝劑）。新鮮血液用于測定血液生理指標(biāo)，如紅細(xì)胞數(shù)（RBC）、白細(xì)胞數(shù)（WBC）、血紅蛋白含量（HGB）、血細(xì)胞比容（HCT）、血小板計數(shù)（PLT）；血清用于血液生化指標(biāo)的測定，如丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、總膽紅素（TBIL）、尿酸（UA）、直接膽紅素（DBIL）、尿素氮（BUN）、肌酐（CREA）、血總蛋白（TP）、肌酸激酶（CK）。

1.4 數(shù)據(jù)處理

藥動學(xué)試驗不同采樣時間點的血藥濃度數(shù)據(jù)用WinNonlin5.2.1軟件的非房室模型進(jìn)行擬合。采用SPSS 17.0統(tǒng)計分析軟件對血液生理生化指標(biāo)數(shù)據(jù)進(jìn)行顯著性檢驗，采用t檢驗比較試驗組與對照組間血液生理指標(biāo)、血清生化指標(biāo)的差異性。

圖1　液相色譜檢測方法結(jié)果

2　結(jié)果與分析

2.1 藥動學(xué)研究結(jié)果

2.1.1 液相色譜檢測方法結(jié)果 在1.2.3液相色譜條件下測得阿斯匹臨和水楊酸的保留時間分別為9.9、13.8 min，空白血漿在上述保留時間無干擾峰出現(xiàn)（圖1）

2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性范圍 以血漿中藥物濃度的1/2為X軸、對應(yīng)峰面積為Y軸做標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖2）。阿司匹林、水楊酸的線性方程分別：y=31650x+677.55（r2=0.9993），y=38614x+710.54 （r2=0.9989）。

2.1.3 回收率和精密度 測得水楊酸、阿司匹林的回收率分別為80.1%～104.84%、81.67%～103.51%。批內(nèi)變異系數(shù)分別為2.43%～9.98%、2.55%～6.02%；批間變異系數(shù)分別為2.89%～ 8.68%、3.06%～5.45%。其批內(nèi)批間變異系數(shù)小于15%，表明所建立的同時檢測阿司匹林、水楊酸高效液相色譜方法符合生物樣品分析的要求。

2.1.4 藥物動力學(xué)結(jié)果 卡巴匹林鈣靜注給藥后，運用WinNonlin5.2.1 藥物動力學(xué)程序軟件對靜注和口服后血漿中藥物的經(jīng)時過程進(jìn)行擬和，采用非房室模型計算統(tǒng)計矩參數(shù)等藥物動力學(xué)參數(shù)，結(jié)果見表1。阿司匹林、水楊酸藥物時間曲線見圖3。

圖2　阿司匹林（左）、水楊酸（右）的標(biāo)準(zhǔn)曲線

表1　豬靜注、口服卡巴匹林鈣后其代謝產(chǎn)物阿司匹林、水楊酸藥動學(xué)參數(shù)（n=6）

圖3　阿司匹林、水楊酸藥物時間曲線

2.2 安全性評價結(jié)果

2.2.1 血液學(xué)檢查結(jié)果 最后一次給藥24 h后，各劑量組動物與對照組相比，各項血常規(guī)指標(biāo)差異均不顯著（表2）。

表2　各組豬的血液生理指標(biāo)平均值（n=6）

2.2.2 血液生化檢驗結(jié)果 血液生化學(xué)檢查結(jié)果見表3，統(tǒng)計學(xué)分析表明，與對照組相比，各劑量組動物指標(biāo)均無顯著差異，以及各劑量組之間差異也不顯著。表明卡巴匹林鈣可溶性粉對靶動物豬肝腎功能及物質(zhì)代謝無不良影響。

表3　各組豬的血液生化指標(biāo)平均值（n=6）

3　結(jié)論與討論

3.1 分析方法的優(yōu)化確定

目前做阿司匹林和水楊酸同時檢測的方法有很多，有毛細(xì)管電泳法［3-4］、高效液相色譜法［5］、高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法［6］、超高效液相色譜法［7-8］。高效液相色譜法簡便、快捷，應(yīng)用比較廣泛。關(guān)于檢測器的選擇，阿匹林熒光性較弱，水楊酸的熒光性較強。用熒光檢測器，阿司匹林檢測限滿足不了試驗要求。但有研究用柱后衍生反應(yīng)提高阿司匹林的檢測靈敏度，使阿司匹林的檢測限、定量限分別可達(dá)到32.5、50 pg/μL［9］。但該方法需要額外的設(shè)備，對儀器要求比較高。

3.2 卡巴匹林鈣在豬的藥代動力學(xué)特點

豬靜注卡巴匹林鈣后，其代謝產(chǎn)物阿司匹林即可達(dá)峰，峰濃度為48.96 μg/m L，而水楊酸達(dá)峰時間平均為0.54 h，達(dá)峰迅速，峰濃度為83.53 μg/m L。與鄭文等［10］做的雞卡巴匹林鈣藥動結(jié)果相比，阿司匹林和水楊酸的峰濃度要低得多。雞靜注40 mg/kg卡巴匹林鈣后8 h，阿司匹林已幾乎檢測不出，水楊酸84 h仍能檢測出微量的藥物。相比之下，豬對卡巴匹林鈣的代謝要比雞代謝得快，阿司匹林、水楊酸平均滯留時間MRT分別為0.29 （±0.06）、3.53（±0.35） h，比雞靜注給藥后阿司匹林MRT1.72（±0.23 ）h、水楊酸MRT5.67（± 0.39 ）h要小得多。

豬口服卡巴匹林鈣后，其代謝產(chǎn)物阿司匹林平均0.39 h達(dá)峰，峰濃度為8.42 μg/mL；水楊酸平均1.75 h達(dá)峰，峰濃度為60.47 μg/mL。與雞相比，其代謝產(chǎn)物阿司匹林的達(dá)峰時間稍慢，水楊酸達(dá)峰稍快，但差別不大。阿司匹林峰濃度跟雞的很接近，水楊酸峰濃度是雞的1.5倍。其代謝產(chǎn)物阿司匹林和水楊酸在豬平均滯留時間（MRT）分別為0.85 （±0.14）、4.03（±0.52） h，與雞相比，平均滯留時間依然比雞的要小。由此可說明，豬口服卡巴匹林鈣后，代謝產(chǎn)物阿司匹林和水楊酸達(dá)峰迅速，峰濃高，與雞相比半衰期較短，藥物消除較快。

3.3 卡巴匹林鈣的安全性

連續(xù)給藥5 d后，推薦劑量1倍組、3倍組、5倍組與對照組相比，血液學(xué)、血液生化學(xué)等參數(shù)指標(biāo)均無顯著差異，以及各劑量組之間差異也不顯著。同時臨床未觀察到中毒癥狀及不良反應(yīng)，給藥豬解剖，胃腸粘膜、心臟、腎臟、脾臟等組織也未見病灶。本試驗結(jié)果表明，卡巴匹林鈣可溶性粉對靶動物豬是安全的，具有較好的臨床應(yīng)用前景。

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［10］ 鄭文，陳洪亮，黃玲利，等，卡巴匹林鈣可溶性粉在雞的藥動學(xué)研究［J］.家禽科學(xué)，2011（11）：13-16.

（責(zé)任編輯崔建勛）

Study on pharmacokinetics and safety evaluation of carbasalate calcium in pig

HAN Ke-ke1，CHEN Hong1，TIAN Yu-zhu2，WANG Pei1，WANG Jia-peng1，XU Wei1，QUAN Dan1，ZHOU Yu-hui1
（1.College of Veterinary Medicine，South China Agricultural University，Guangzhou 510642，China；2.Qilu Animal Health Products Co.，Ltd，Jinan 250100，China）

Abstract：The pharmacokinetics of aspirin and salicylic acid，carbasalate calcium's metabolites were investigated in pig by oral administration and intravenous injection at a single dosage of 40 mg/kg body weight.The safety of carbasalate calcium was evaluated by oral administration at 1，3，5 times of the recommended dose of carbasalate calcium soluble powder.In the pharmacokinetic study，the plasma samples collected at different points of time were determined by HPLC-UV.The data were analyzed by noncompartmental model of W inNonlin5.2.1 software.The results showed that，time to peak of aspirin and salicylic acid was short and peak concentrations of them were high.Safety evaluation of carbasalate calcium was carried out by detecting hematological parameters，biochemical indicators.Comparing the test group and control group，there was no significant difference between them in regular blood physiology indicators like WBC，RBC，HGB，etc.and serum biochemistry indicators like AST，GLU，TG，TC，etc.There was no clinical adverse reaction.The results indicated that the carbasalate calcium soluble powder was safe to pig at the dosage of 5 times of recommended dose.

Key words：carbasalate calcium； pig； pharmacokinetic； safety evaluation

中圖分類號：S859.79+1

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1004-874X（2016）-0125-05

收稿日期：2015-09-07

基金項目：廣東省自然科學(xué)基金（S2012030006590）

作者簡介：韓可可（1988-），女，在讀碩士生，E-mail：emma881desigh@126.com

通訊作者：陳紅（1969-），女，碩士，高級獸醫(yī)師，E-mail：shuyi@scau.edu.cn，1269038413@qq.com