HPLC法測定馬來酸氯苯那敏注射液的有關(guān)物質(zhì)

施建國蔣宇丹 季曉燕( 上海禾豐制藥有限公司 上海 201206)

HPLC法測定馬來酸氯苯那敏注射液的有關(guān)物質(zhì)

施建國*蔣宇丹 季曉燕
( 上海禾豐制藥有限公司 上海 201206)

摘 要目的：建立HPLC法測定馬來酸氯苯那敏注射液有關(guān)物質(zhì)的方法。方法：采用高效液相色譜法，色譜柱為C18柱(4.6 mm × 250 mm，5 μm)；流動相為乙腈-0.857%磷酸二氫銨溶液（20∶80）（用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0）；流速：1.2 ml/min；檢測波長：225 nm。結(jié)果：氯苯那敏峰與雜質(zhì)A、B、C、D峰之間的分離度良好，氯苯那敏及四個雜質(zhì)的最小檢測限分別為0.017、0.016、0.077、0.030、0.053 μg/ml。結(jié)論：該法簡便、準(zhǔn)確、專屬性好、靈敏度高，可作為馬來酸氯苯那敏注射液有關(guān)物質(zhì)的檢查方法。

關(guān)鍵詞HPLC法 馬來酸氯苯那敏注射液 有關(guān)物質(zhì)

Determination of related substances in chlorphenamine maleate injection by HPLC

SHI Jianguo*, JIANG Yudan, JI Xiaoyan
(Shanghai Harvest Pharmaceutical Co. Ltd., Shanghai 201206, China)

ABSTRACTObjective: To establish an HPLC method for the determination of related substances in chlorphenamine maleate injection. Methods: The HPLC was carried out on a C18column (4.6 mm×250 mm, 5 μm) with a mobile phase of acetonitrile - 0.857% of ammonium dihydrogen phosphate solution (20:80) (adjusted to pH 3.0 with phosphoric acid) at the flow rate of 1.2 ml/min and the detected UV wavelength of 225 nm. Results: Good separation among the peaks of chlorphenamine and impurity A, B, C, D was obtained. The detection limits of chlorphenamine and 4 impurities were 0.017, 0.016, 0.077, 0.030 and 0.053 μg/ml, respectively. Conclusion: This method is simple, accurate with good specificity and high sensitivity and can be used for the analysis of related substances in chlorphenamine maleate injection.

KEY WORDSHPLC; chlorphenamine maleate injection; related substances

馬來酸氯苯那敏為抗組胺藥，臨床上主要用于過敏性鼻炎、皮膚黏膜的過敏及藥疹和接觸性皮炎等[1-2]。馬來酸氯苯那敏注射液為中國藥典2010年版二部收載品種[3]，有關(guān)物質(zhì)采用HPLC法，但僅對未知雜質(zhì)進(jìn)行控制。雜質(zhì)A、C為馬來酸氯苯那敏合成過程中產(chǎn)生的雜質(zhì)，雜質(zhì)B、D為合成過程中的中間體，這四種雜質(zhì)均可能影響到馬來酸氯苯那敏的質(zhì)量。本法參考英國藥典2013馬來酸氯苯那敏原料有關(guān)物質(zhì)檢測方法[4]，建立了馬來酸氯苯那敏注射液中有關(guān)物質(zhì)檢測的改進(jìn)方法。

1 儀器與試藥

Agilent 1200和 Agilent 1260高效液相色譜儀（美國Agilen公司，均配置VWD紫外檢測器）； CPA225 D電子天平（德國Sartorius公司）；磷酸二氫銨(分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；雜質(zhì)A（批號1370-073A3）、B（批號1376-040A1）、D（批號1370-071A4）均購自TLC Pharmachem；C（批號Y0000437）購自European Pharmacopoeia；乙腈（色譜純，F(xiàn)isher Scientific公司）；馬來酸氯苯那敏注射液（規(guī)格：1 ml∶10 mg，批號Y120301本公司產(chǎn)品）；水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈-0.857%磷酸二氫銨溶液（20∶80，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0）為流動相，流速1.2 ml/min，檢測波長為225 nm，進(jìn)樣量20 μl。

2.2 專屬性試驗

取馬來酸氯苯那敏注射液1 ml，共5份，分別以下列條件試驗：①酸破壞 用稀鹽酸溶液調(diào)pH值2左右，100 ℃水浴蒸干，用流動相稀釋至10 ml；②堿破壞 用0.1 mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)pH值12左右，100 ℃水浴蒸干，用流動相稀釋至10 ml；③熱破壞 于100 ℃水浴中加熱10 h，用流動相稀釋至10 ml；④氧化破壞 加30%的過氧化氫溶液2 ml，100 ℃水浴蒸干，用流動相稀釋至10 ml；⑤光破壞 置紫外光（4 500 lx）下直接照射24 h后，用流動相稀釋至10 ml。破壞后的樣品按色譜條件進(jìn)行分析，結(jié)果見圖1。

圖1 馬來酸氯苯那敏注射液破壞試驗色譜圖

結(jié)果表明，經(jīng)光、熱破壞，馬來酸氯苯那敏注射液無明顯降解產(chǎn)物。經(jīng)酸、堿及氧化破壞試驗，馬來酸氯苯那敏注射液明顯產(chǎn)生降解產(chǎn)物，但峰分離度均良好。

2.3 雜質(zhì)A、B、C、D相對保留時間的確定

取馬來酸氯苯那敏注射液1 ml，置100 ml量瓶中，分別精密加入雜質(zhì)A 5 mg、雜質(zhì)B 50 mg、雜質(zhì)C 10 mg、和雜質(zhì)D 50 mg，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取1 ml，置10 ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，配制成含馬來酸氯苯那敏10 μg/ml及雜質(zhì)A、B、C、D分別為5 、50 、10 、50 μg/ml的混合溶液。HPLC檢測結(jié)果見圖2。

圖2 各雜質(zhì)與馬來酸氯苯那敏混合溶液

結(jié)果表明，雜質(zhì)A、B、C、D的相對保留時間分別為0.2、0.25、0.8、3；校正因子分別為1.7、0.8、0.97、2.1。各雜質(zhì)峰與氯苯那敏峰的分離度均符合要求。

2.4 有關(guān)物質(zhì)測定

取馬來酸氯苯那敏注射液適量，加流動相稀釋制成每1 ml約含1 mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取1 ml，置200 ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液。按色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖至氯苯那敏峰保留時間的3.5倍。雜質(zhì)A、B、D的校正響應(yīng)分別為1.7、0.8、2.1。供試品溶液的色譜圖中如有雜質(zhì)峰，雜質(zhì)A、B、C、D峰的相對保留時間分別為0.2、0.25、0.8、3。除溶劑峰與馬來酸峰外，雜質(zhì)A不得超過0.2%，雜質(zhì)B、C、D均不得超過0.1%，其他單雜峰不得超過0.2%，各雜質(zhì)峰面積的和不得超過1.0%。

2.5 檢出限

取雜質(zhì)A、B、C、D及馬來酸氯苯那敏注射液，分

別不斷稀釋進(jìn)樣，按信噪比S/N=3計算，雜質(zhì)A、B、C、D及馬來酸氯苯那敏的最小檢測限分別為：0.016，0.077，0.030，0.053，0.017 μg/ml。

2.6 精密度試驗

取雜質(zhì)A、B、C、D分別配制成含5，50，10，50 μg/ml的溶液，共配制6份，分別按色譜條件進(jìn)樣，按峰面積計，RSD分別為0.18%，0.14%，0.27%，0.23%。

2.7 耐用性試驗

用Agela、Agilent、Kromasil等不同廠家的色譜柱（均為4.6 mm×250 mm，5 μm），分別在Agilent 1200高效液相色譜儀和Agilent 1260高效液相色譜儀上進(jìn)行試驗，結(jié)果表明不同色譜柱，不同高效液相色譜儀對雜質(zhì)的保留和檢出無顯著性差異（表1）。

表1 耐用性試驗結(jié)果

3 討論

國內(nèi)無雜質(zhì)A、B、C、D對照品提供，只有進(jìn)口，價格昂貴，故考慮用相對保留時間對雜質(zhì)A、B、C、D進(jìn)行定位，結(jié)果顯示，該方法可行。此外，將同一樣品分別采用該法及中國藥典2010年版二部方法測定結(jié)果雜質(zhì)檢出分別為0.04%，0.02%，均為未知雜質(zhì)。但是中國藥典方法檢出馬來酸峰和氯苯那敏峰出峰時間較為接近，有文獻(xiàn)[5-8]對色譜條件進(jìn)行優(yōu)化，以改進(jìn)此現(xiàn)象。本法檢出馬來酸峰和氯苯那敏峰出峰時間距離較長，不易混淆。表明本法更適合馬來酸氯苯那敏注射液的有關(guān)物質(zhì)測定。

根據(jù)中國藥典藥品雜質(zhì)分析指導(dǎo)原則[3]附錄204-206，相對響應(yīng)因子在0.9～1.1范圍內(nèi)，可以用主成分的自身對照法計算含量，超出范圍時可采用相對響應(yīng)因子校正后計算，根據(jù)實驗結(jié)果本法采用相對響應(yīng)因子計算不在范圍內(nèi)的雜質(zhì)A、B、D的含量。

馬來酸在特定條件下會轉(zhuǎn)換成富馬酸[9-11]，在本法的酸、堿和氧化破壞試驗中，馬來酸附近有新的雜質(zhì)峰出現(xiàn)，有可能是馬來酸部分轉(zhuǎn)換成富馬酸，需經(jīng)試驗進(jìn)一步確實。

隨著國家對藥品雜質(zhì)要求的提高，藥品檢查有關(guān)物質(zhì)只控制未知雜質(zhì)，已遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠，對已知雜質(zhì)的控制是未來的發(fā)展趨勢。我們在英國藥典原料標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上，對馬來酸氯苯那敏注射液有關(guān)物質(zhì)檢查進(jìn)行改進(jìn)，能更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量。

參考文獻(xiàn)

[1] 張瑤華, 李端. 中國常用藥品集[M]. 上海: 上海交通大學(xué)出版社, 2006: 850.

[2] 孫琛. 臨床用藥大全[M]. 上海: 中國大百科全書出版社, 1995: 431.

[3] 國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典: 2010年版（二部）[M]. 北京: 中國醫(yī)藥科技出版社, 2010: 49-50.

[4] British Pharmacopoeia Commission. British Pharmacopoeia 2013[M]. London: The Stationery Office on Behalf of the Medicines and Healthcare products Regulatory Agency, 2013: 500.

[5] 羅域城, 張帆. 馬來酸氯苯那敏HPLC法測定條件的優(yōu)化[J]. 海峽藥學(xué), 2011, 23(3): 56-58.

[6] 孫素芳, 劉國瑞, 王喆, 等. 馬來酸氯苯那敏片的HPLC測定[J]. 中國醫(yī)藥工業(yè)雜志, 2006, 37(9): 627-629.

[7] 馬春梅, 趙變, 席榮英, 等. 高效液相色譜法測定馬來酸氯苯那敏[J]. 理化檢驗: 化學(xué)分冊, 2012, 48(10): 1244-1246.

[8] 徐燕, 劉峰, 徐曉霞, 等. 以HPLC法測定馬來酸氯苯那敏含量的方法中馬來酸峰及氯苯那敏峰定位的問題[J]. 四川生理科學(xué)雜志, 2008, 30(3): 110-111.

[9] 張國安, 王玉萍, 彭盤英, 等. 反相液相色譜法測定廢水中的馬來酸和富馬酸[J]. 化學(xué)世界, 2010, 51(7): 404-407.

[10] 張萬軒, 劉麗琴, 王思思. 用馬來酸制備富馬酸和蘋果酸的綠色化學(xué)方法[J]. 忻州師范學(xué)院學(xué)報, 2010, 26(2): 28-30.

[11] 高翠英, 李彥威, 賈浩旭. 色譜法同時測定富馬酸和馬來酸的含量[J]. 廣東化工, 2008, 35(8): 140-143.

收稿日期：(2014-07-24)

作者簡介：*施建國(1982-)，男，助理工程師，從事藥物研發(fā)。E-mail：jian44072@126.com

文章編號：1006-1533(2015)01-0075-03

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

中圖分類號：R927.1; O657.72