HPLC法測(cè)定復(fù)方對(duì)乙酰氨基酚片含量

魯波

摘 要：目的：建立復(fù)方對(duì)乙酰氨基酚片中乙酰水楊酸、對(duì)乙酰氨基酚以及咖啡因含量的具體檢測(cè)方法。方法：在測(cè)定的過(guò)程中采用高效液相色譜儀，將C18當(dāng)做色譜柱，將PH值為3.0的0.05M磷酸二氫鉀-配比為75：25的甲醇當(dāng)做流動(dòng)相，檢測(cè)的波長(zhǎng)為254nm，同時(shí)在測(cè)定的過(guò)程中還要采用外標(biāo)法進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果：在對(duì)3種成分進(jìn)行檢測(cè)之后發(fā)現(xiàn)，其具有非常好的線形關(guān)系，此外，在分離度方面也完全符合檢測(cè)的要求。結(jié)論：采用高效液相色譜法對(duì)復(fù)方對(duì)乙酰氨基酚片的含量進(jìn)行測(cè)定操作非常的簡(jiǎn)單，同時(shí)測(cè)定的結(jié)果精確性強(qiáng)，所以也可以將其當(dāng)做復(fù)方對(duì)乙酰氨基酚片的基本檢驗(yàn)方法。

關(guān)鍵詞：復(fù)方對(duì)乙酰氨基酚片；HPLC法；含量測(cè)定

復(fù)方對(duì)乙酰氨基酚片是一種臨床上比較常用的解熱鎮(zhèn)痛的藥物，它在應(yīng)用的過(guò)程中療效非常好，同時(shí)在使用的時(shí)候也不會(huì)產(chǎn)生非常明顯的副作用，所以在這種藥物也得到了非常廣泛的應(yīng)用，相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的含量測(cè)定當(dāng)中采用容量法、中和法、重氮化法以及氧化還原的方法對(duì)3種主要的成分進(jìn)行測(cè)定處理在測(cè)定的時(shí)候，不同的組分之間可以形成良好的玻璃管理，同時(shí)還具備良好的線形關(guān)系，這種方法比較簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確性也比較強(qiáng)，所以也比較適合應(yīng)用在本品的質(zhì)量控制工作中。

1、儀器藥品及試劑

SP8810液相色譜儀，CC100紫外可見(jiàn)光檢測(cè)器，SP4270積分儀。對(duì)乙酞氨基酚對(duì)照品由中國(guó)藥品生物檢定所提供，乙酞水楊酸（含量99.8%），咖啡因（99.6%），以及樣品均由赤峰永巨制藥廠提供，甲醇、磷酸二氫鉀為分析純。

2、色譜條件

流動(dòng)相：0.05M磷酸二氫鉀（磷酸調(diào)pH3.0）一甲醇（75：25），流速0.8ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)254nm，靈敏度0.1，室溫，進(jìn)樣量10μl。

3、實(shí)驗(yàn)方法

線形關(guān)系：精確稱取乙酰水楊酸對(duì)照品25mg，對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品12mg，將其放置在容積為50ml的容量瓶當(dāng)中。加入35ml的流動(dòng)相，同時(shí)采用超聲的方式使其充分的溶解。還要精確的稱取咖啡因?qū)φ掌?5mg，將其放置在容積為50ml的容量瓶當(dāng)中，加入流動(dòng)至刻度的位置。精確量取上述對(duì)照品溶液10ml，加入適量的流動(dòng)相使其到達(dá)刻度，分別取上述對(duì)照品溶液3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5ml，將其放置在容積為10ml的容量瓶當(dāng)中，使用流動(dòng)相將其稀釋到刻度的位置，之后進(jìn)行搖勻處理，取出上述10μl上述的溶液，注入HPLC，將峰面積當(dāng)做縱坐標(biāo)，將濃度當(dāng)做橫坐標(biāo)開(kāi)展直線方程回歸分析，如表1、表2、表3所示：

回歸啦試驗(yàn)：用藥用天平精確的稱取適量的對(duì)照品，將其配制成3批濃度完全不同的溶液，同時(shí)還要按照配方的要求加入輔料，將其制成試液，在過(guò)濾之后，每一種濃度都要取出3份進(jìn)樣，其容積為10μl，之后對(duì)平均回收率進(jìn)行計(jì)算。

重現(xiàn)性試驗(yàn)：取線性關(guān)系實(shí)驗(yàn)的溶液5—10ml，將其連續(xù)進(jìn)樣5次，得出對(duì)乙酰氨基酚的RSD為0.59%，乙酰水楊酸的RSD為0.88%，咖啡因的RSD為0.71%。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：精確的量取上述重現(xiàn)性試驗(yàn)當(dāng)中所使用的溶液，將其分別放置2、4、6、8小時(shí)，4個(gè)時(shí)間間隔對(duì)其進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)隨著時(shí)間的推移，峰面積的變化并不是十分的明顯。

干擾性試驗(yàn)：精確稱取輔料適量，將其按照處方的比例配置成輔料溶液，將其進(jìn)行過(guò)濾處理，取出10μl的過(guò)濾液，將其注入色譜儀中，對(duì)色譜圖進(jìn)行記錄，40分鐘之內(nèi)沒(méi)有出現(xiàn)吸收峰。

有關(guān)物質(zhì)測(cè)定：根據(jù)部頒標(biāo)準(zhǔn)有關(guān)物質(zhì)對(duì)游稗水楊酸檢查限度，可取一定量的水楊酸對(duì)照溶液是行峰面積比較。其樣品溶液在咖啡因峰前能分離水楊酸，分離度大于2。

樣品測(cè)定：取出10片本品，對(duì)其進(jìn)行稱定，同時(shí)還要進(jìn)行研細(xì)處理，，稱取適量的樣品，加入流動(dòng)相，流動(dòng)相的容積為70ml，采用超聲溶解的方式加以處理，之后加入流動(dòng)相，最終的容積為100ml，將其搖勻和過(guò)濾處理，取出5ml的濾液，加入流動(dòng)相至10ml，將其當(dāng)做樣品溶液。

另取對(duì)照品對(duì)乙酞氨基酚12.6mg，乙酞水楊酸23mg，置100m1容量瓶中，加流動(dòng)相70m1，振搖溶解。另取咖啡因15mg置50m1容量瓶中，加流動(dòng)相溶解成50m1，搖勻，精密量取該溶液l0l加到上述100m1容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。精密量取該溶液5m1，加流動(dòng)相稀釋至l0ml，作為對(duì)照品溶液。分別取供試品、對(duì)照品溶液各10ml注入液相色譜儀，外標(biāo)法計(jì)算含量。

取某藥廠生產(chǎn)的復(fù)方對(duì)乙酞氨基酚片，分別用部頒標(biāo)準(zhǔn)和新建立標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)，其含量測(cè)定結(jié)果為部頒方法：乙酞水楊酸98.6%，對(duì)乙酞氨基酚97.4%，咖啡因100.096%HPLC法：乙酞水楊酸98.9%，對(duì)乙酞氨基酚97.8%，咖啡因100.1%。

4討論

高效液相色譜分析的流程。由泵將儲(chǔ)液瓶中的溶劑吸入色譜系統(tǒng)，然后輸出，經(jīng)流量與壓力測(cè)量之后，導(dǎo)入進(jìn)樣器。被測(cè)物由進(jìn)樣器注入，并隨流動(dòng)相通過(guò)色譜柱，在柱上進(jìn)行分離后進(jìn)入檢測(cè)器，檢測(cè)信號(hào)由數(shù)據(jù)處理設(shè)備采集與處理，并記錄色譜圖。廢液流入廢液瓶。遇到復(fù)雜的混合物分離（極性范圍比較寬）還可用梯度控制器作梯度洗脫。這和氣相色譜的程序升溫類(lèi)似，不同的是氣相色譜改變溫度，而HPLC改變的是流動(dòng)相極性，使樣品各組分在最佳條件下得以分離。

高效液相色譜的分離過(guò)程。開(kāi)始樣品加在柱頭上，假設(shè)樣品中含有3個(gè)組分，A、B和C，隨流動(dòng)相一起進(jìn)入色譜柱，開(kāi)始在固定相和流動(dòng)相之間進(jìn)行分配。分配系數(shù)小的組分A不易被固定相阻留，較早地流出色譜柱。分配系數(shù)大的組分C在固定相上滯留時(shí)間長(zhǎng)，較晚流出色譜柱。組分B的分配系數(shù)介于A，C之間，第二個(gè)流出色譜柱。若一個(gè)含有多個(gè)組分的混合物進(jìn)入系統(tǒng)，則混合物中各組分按其在兩相間分配系數(shù)的不同先后流出色譜柱，達(dá)到分離之目的。

不同組分在色譜過(guò)程中的分離情況，首先取決于各組分在兩相間的分配系數(shù)、吸附能力、親和力等是否有差異，這是熱力學(xué)平衡問(wèn)題，也是分離的首要條件。其次，當(dāng)不同組分在色譜柱中運(yùn)動(dòng)時(shí)，譜帶隨柱長(zhǎng)展寬，分離情況與兩相之間的擴(kuò)散系數(shù)、固定相粒度的大小、柱的填充情況以及流動(dòng)相的流速等有關(guān)。所以分離最終效果則是熱力學(xué)與動(dòng)力學(xué)兩方面的綜合效益。

經(jīng)過(guò)以上試驗(yàn)證明，該方法能夠準(zhǔn)確測(cè)定其各成分含量，與部頒法無(wú)顯著差別。此方法可靠，快速方便，操作簡(jiǎn)單，結(jié)果穩(wěn)定，同時(shí)也提高了分析結(jié)果的準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性。

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