良性甲狀腺疾病患者血清IgE、FcεRIα及其抗體水平分析

王玉萍,　崔澤林,　藺麗慧,　王　娟,　李　佳,　彭　霞,　謝國鋼,　李　莉

良性甲狀腺疾病患者血清IgE、FcεRIα及其抗體水平分析

王玉萍,崔澤林,藺麗慧,王娟,李佳,彭霞,謝國鋼,李莉

(上海交通大學(xué)附屬第一人民醫(yī)院檢驗科,上海 200080)

摘要：目的分析免疫球蛋白(IgE)、FcεRIα及其抗體水平在良性甲狀腺疾病患者血清中的表達(dá)情況，探討其與良性甲狀腺疾病的相關(guān)性。方法收集41例Graves′病(GD)、36例橋本甲狀腺炎(HT)和36例甲狀腺結(jié)節(jié)(TN)患者以及60名健康體檢者(正常對照組)的臨床資料及血清，采用競爭酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測血清FcεRIα、抗IgE抗體和抗FcεRI抗體水平，采用速率散射比濁法檢測血清IgE水平，分析4組間的表達(dá)差異并評估其與良性甲狀腺疾病的相關(guān)性。結(jié)果GD組、HT組及TN組IgE水平與正常對照組比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，而FcεRIα水平和抗IgE抗體水平均明顯高于正常對照組(P<0.05)；GD組抗FcεRI抗體水平明顯高于正常對照組。HT組及TN組血清IgE、FcεRIα、抗IgE抗體及抗FcεRI抗體與甲狀腺激素抗體(TRAb)均無相關(guān)性。GD組血清FcεRIα與TRAb呈明顯負(fù)相關(guān)(rs=-0.350，P<0.05)，抗IgE抗體和抗FcεRI抗體與TRAb均呈明顯正相關(guān)(rs值分別為0.546、0.520，P均<0.05)。結(jié)論良性甲狀腺疾病患者血清中高表達(dá)IgE、FcεRIα及其抗體，并且在GD中與甲狀腺抗體有明顯相關(guān)性，提示此抗體系統(tǒng)可能參與了良性甲狀腺疾病的發(fā)生、發(fā)展。

關(guān)鍵詞：免疫球蛋白E；FcεRIα；抗免疫球蛋白E抗體；抗FcεRI抗體；甲狀腺疾病

Analysis on the expressions of serum IgE, FcεRI and their antibodies in patients with benign thyroid diseasesWANGYuping，CUIZelin，LINLihui,WANGJuan,LIJia,PENGXia,XIEGuogang,LILi

.(DepartmentofClinicalLaboratory,ShanghaiFirstPeople′sHospital,ShanghaiJiaotongUniversity,Shanghai200080,China)

Abstract:ObjectiveTo analyze the expressions of immunoglobulin E (IgE), FcεRIα and their antibodies in serum from patients with benign thyroid diseases and investigate their relationships with benign thyroid diseases. MethodsA total of 41 Graves′ disease (GD) patients, 36 Hashimoto′s thyroiditis (HT) patients, 36 thyroid nodule (TN) patients and 60 healthy subjects were enrolled. The expressions of FcεRIα, anti-IgE antibody and anti-FcεRI antibody were determined by competitive enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), and the level of IgE was determined by rate nephelometry. Their differences in 4 groups and their relationships with benign thyroid diseases were analyzed. ResultsThe levels of IgE in GD, HT and TN groups had no statistical significance compared with that in healthy control group (P>0.05). The serum levels of FcεRIα and anti-IgE antibody in GD, HT and TN groups were higher than that in healthy control group (P<0.05). The level of anti-FcεRI antibody in GD group was higher than that in healthy control group. The relationships of the serum levels of IgE, FcεRIα, anti-IgE antibody and anti-FcεRI antibody with thyroid hormone autoantibody (TRAb) were not observed in HT or TN group, but there was a negative correlation of serum FcεRIα with TRAb (rs=-0.350, P<0.05), and there was a positive positive correlation of anti-IgE and anti-FcεRI antibodies with TRAb in GD group (rs=0.546 and 0.520, P<0.05). ConclusionsThere are high expressions of serum IgE, FcεRIα and their antibodies in patients with benign thyroid diseases and a significant correlation of them with TRAb in GD group. The results suggest that these antibodies may participate in the occurrence and progress of benign thyroid diseases.

Key words:Immunoglobulin E; FcεRIα; Anti-immunoglobulin E; Anti-FcεRI; Thyroid disease

良性甲狀腺疾病包括甲狀腺功能亢進(jìn)、甲狀腺炎、單純性甲狀腺腫等，其主要的臨床表現(xiàn)為甲狀腺腫大、腫塊、觸痛，多汗、暴躁、激惹等[1]。這類疾病的發(fā)病與機(jī)體的T細(xì)胞、B細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥應(yīng)答過程密切相關(guān)。近年的研究證實參與機(jī)體天然免疫的肥大細(xì)胞(mast cell，MC)也大量存在于Graves′病及甲狀腺腫的病變組織中[2]，提示肥大細(xì)胞及其效應(yīng)分子可能也參與了良性甲狀腺疾病的發(fā)生、發(fā)展過程。因此，我們選擇了3種良性甲狀腺疾病作為研究對象，其中Graves′病(Graves′ disease，GD)和橋本甲狀腺炎(Hashimoto′s thyroiditis，HT)為器官特異性自身免疫性疾病，甲狀腺結(jié)節(jié)(thyroid nodule，TN)是由各種原因?qū)е录谞钕賰?nèi)出現(xiàn)一個或多個組織結(jié)構(gòu)異常團(tuán)塊的疾病[3]。分析肥大細(xì)胞活化相關(guān)抗體——免疫球蛋白E(immunoglobulin E, IgE)、FcεRIα、抗IgE抗體和抗FcεRI抗體在此3種良性甲狀腺疾病患者血清中的表達(dá)情況，以了解IgE及其抗體、IgE受體及其抗體與良性甲狀腺疾病是否有關(guān)系，為深入揭示IgE及其抗體、IgE受體及其抗體與疾病的相關(guān)性提供依據(jù)。

材料和方法

一、對象

1. 良性甲狀腺疾病組GD、HT及TN患者均為2014年3月至2014年11月在上海交通大學(xué)附屬第一人民醫(yī)院門診和住院的患者，診斷標(biāo)準(zhǔn)均符合《中國甲狀腺疾病診治指南》(中華醫(yī)學(xué)會內(nèi)分泌學(xué)會)[3]。GD組41 例，其中男13 例，女28 例，年齡16～77歲。HT組36 例，其中男11 例、女25 例，年齡27～80歲。TN組36 例，其中男12 例、女24 例，年齡24～84歲。

2. 正常對照組選取上海交通大學(xué)附屬第一人民醫(yī)院健康體檢者60名，男20名，女40名，年齡31～57歲，甲狀腺功能、肝腎功能、血尿常規(guī)等實驗室檢查正常，排除甲狀腺疾病、過敏及自身免疫性疾病。

二、方法

1. 樣本收集所有對象清晨空腹靜脈血5 mL，離心分離血清，于-20℃保存待測。

2. 試劑與儀器IgE采用SIEMENS BNⅡ全自動蛋白分析儀及配套試劑(速率散射比濁法)檢測；FcεRIα、抗IgE抗體和抗FcεRI抗體采用競爭酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測，試劑盒由BlueGene Biotech公司提供；甲狀腺功能項目[包括游離三碘甲狀腺原氨酸(free 3, 5, 3′-triiodothyronine,FT3)、游離四碘甲狀腺原氨酸(free thyroxine, FT4)、總?cè)饧谞钕僭彼?total 3, 5, 3′-triiodothyronine, TT3)、總四碘甲狀腺原氨酸(total thyroxine, TT4)、促甲狀腺激素(thyroid stimulating hormone, TSH)、反三碘甲狀腺原氨酸(reverse triiodothyronine，rT3)、甲狀腺球蛋白(thyroglobulin, Tg)、甲狀腺髓過氧化物酶抗體(anti-thyroid peroxidase antibody, TPOAb)、促甲狀腺素受體抗體(thyrotropin receptor antibody, TRAb)、甲狀腺球蛋白抗體(thyroglobulin antibody, A-TG)]采用羅氏E601型電化學(xué)發(fā)光儀及配套試劑(電化學(xué)發(fā)光法)檢測。

三、統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 17.0和GraphPad Prism 5.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。數(shù)據(jù)呈偏態(tài)分布，以中位數(shù)(M)[四分位數(shù)(P25，P75)]表示，組間比較采用Kruskal-Wallis檢驗，兩指標(biāo)相關(guān)性分析采用Spearman方法。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié)果

一、GD組、HT組、TN組及健康對照組的甲狀腺激素血清學(xué)檢測結(jié)果

GD患者除存在甲亢和彌漫性甲狀腺腫癥狀外，另有22.6%的患者存在突眼和其它浸潤性眼征，3.2%的患者存在脛前黏液性水腫。HT患者均存在甲狀腺彌漫性腫大。

GD組、HT組甲狀腺功能指標(biāo)均存在不同程度的異常，TN組和正常對照組甲狀腺功能均正常，見表1。

二、各組血清IgE、FcεRIα、抗IgE抗體和抗FcεRI抗體水平的檢測結(jié)果

GD組、HT組、TN組和正常對照組之間血清IgE水平差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)。GD組、HT組及TN組血清FcεRIα和抗IgE抗體水平均明顯高于正常對照組(P<0.05)。GD組血清抗FcεRI抗體水平明顯高于正常對照組，HT組、TN組血清抗FcεRI抗體水平與正常對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見表2。

三、血清IgE、FcεRIα、抗IgE抗體和抗FcεRI抗體水平與甲狀腺激素抗體的相關(guān)性分析

HT組及TN組血清IgE、FcεRIα、抗IgE抗體和抗FcεRI抗體與甲狀腺激素抗體均無相關(guān)性；GD組血清TRAb水平與FcεRIα呈明顯負(fù)相關(guān)[相關(guān)系數(shù)(rs)=-0.350，P<0.05]，抗IgE抗體和抗FcεRI抗體與TRAb呈明顯正相關(guān)(rs分別為0.546、0.520，P均<0.05)。見表3。

表1　GD組、HT組、TN組及正常對照組甲狀腺激素水平比較　[M(P25，P75)]

注：與正常對照組比較，*P<0.05

注：與正常對照組比較，*P<0.05

討論

GD具有遺傳易感性，其發(fā)生、發(fā)展與感染、毒素、藥物因素相關(guān)，是由促甲狀腺素受體的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域變異和免疫系統(tǒng)功能紊亂等所致的自身免疫性甲狀腺疾病，與TRAb密切相關(guān)[4]。HT以血清中出現(xiàn)針對甲狀腺組織的特異性A-TG和TPOAb作為其實驗室診斷的金標(biāo)準(zhǔn)。TN是指各種原因?qū)е录谞钕賰?nèi)出現(xiàn)一個或多個組織結(jié)構(gòu)異常的團(tuán)塊[3]。這類疾病的發(fā)病與機(jī)體的T細(xì)胞、B細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥應(yīng)答過程密切相關(guān)，而近年甲狀腺疾病中MC和Fc受體的研究越來越引起關(guān)注。文獻(xiàn)報道無慢性蕁麻疹病史的HT患者自體血清皮膚試驗陽性率為51.3%～60.4%[5]，Graves′眼病的眼外肌中浸潤有大量的MC[2]，并且甲狀腺疾病患者合并慢性蕁麻疹的概率為28%，明顯高于健康人群(6%)[6]。這些反應(yīng)均為IgE和抗IgE抗體、FcεRIα和抗FcεRI抗體通過自身免疫途徑活化MC，引發(fā)速發(fā)相和遲發(fā)相反應(yīng)而產(chǎn)生的過敏、炎癥、防御損傷的結(jié)果。本研究觀察到GD和HT患者血清FcεRIα和抗IgE抗體水平均明顯高于正常對照組(P<0.05)。對GD組血清抗FcεRI抗體進(jìn)行分析，結(jié)果顯示抗FcεRI抗體水平明顯高于正常對照組?？笷cεRI抗體是機(jī)體針對過剩的可溶性FcεRIα產(chǎn)生自身免疫的結(jié)果[7]?？笷cεRI抗體可通過與MC表面的FcεRI結(jié)合活化MC，形成MC活化的正反饋，與GD自身免疫性疾病的本質(zhì)相符，進(jìn)一步證明此抗體系統(tǒng)可能參與了甲狀腺疾病的發(fā)生、發(fā)展。本研究中TN組血清FcεRIα和抗IgE抗體的升高提示此抗體系統(tǒng)或許與TN也有一定的關(guān)系。

KENéZY等[8]報道GD患者易發(fā)生過敏反應(yīng)，并把過敏反應(yīng)視為GD活動性的一個參考指標(biāo)。本研究也證明GD組血清FcεRIα、抗IgE抗體和抗FcεRI抗體水平與甲狀腺抗體表達(dá)水平明顯相關(guān)。其中抗IgE抗體和抗FcεRI抗體均是機(jī)體針對過剩的IgE以及可溶性FcεRIα產(chǎn)生自身免疫的結(jié)果，形成IgE-抗IgE抗體及FcεRIα-抗FcεRI抗體免疫復(fù)合物[9]，導(dǎo)致血清中IgE和FcεRIα水平顯著降低。因而抗IgE抗體和抗FcεRI抗體與GD的特異性抗體TRAb呈正相關(guān)(rs分別為0.546、0.520)，而FcεRIα與TRAb呈負(fù)相關(guān)(rs=-0.350)。

3種良性甲狀腺疾病中4種抗體的表達(dá)水平呈現(xiàn)差異性也證明在不同的疾病中，此抗體系統(tǒng)通過活化不同的信號通路激活或抑制免疫系統(tǒng)，參與到疾病的發(fā)生、發(fā)展中。高、低親和力刺激誘導(dǎo)MC活化不同的信號通路，高親和力刺激誘導(dǎo)受體與Src家族的酪氨酸激酶Lyn(tyrosine-kinase Lyn, Lyn)結(jié)合，低親和力刺激誘導(dǎo)受體與Src家族的酪氨酸激酶Fgr(tyrosine-kinase Fgr, Fgr)結(jié)合，使T細(xì)胞活化街接蛋白1(linker for activated of T cells 1, LAT1)分子的磷酸化向LAT2分子的磷酸化轉(zhuǎn)換，由此引起MC脫顆粒的減少以及細(xì)胞因子的分泌增加,從而使機(jī)體產(chǎn)生不同的免疫反應(yīng)[10-11]。這或許就是導(dǎo)致疾病發(fā)作或緩解的重要原因。

此外，目前這些抗體在MC活化中的作用、MC與甲狀腺疾病的關(guān)系等尚不知曉。本研究僅僅提示這些抗體與良性甲狀腺疾病存在著相關(guān)性，并未檢測到4種抗體對于疾病診斷的特異性，并且IgE和抗IgE抗體、FcεRIα和抗FcεRI抗體之間形成的配受體復(fù)合物以及免疫復(fù)合物的狀態(tài)研究也仍處于初級階段。因此，深入研究IgE及其抗體、IgE受體及其抗體與疾病的關(guān)系對于認(rèn)識和揭示疾病發(fā)生的機(jī)制有重要意義。

參考文獻(xiàn)

[1]王斌，彭文暉.良性甲狀腺疾病手術(shù)治療的臨床分析[J].中國醫(yī)藥指南，2014,12(26)：198.

[2]MOSHKELGOSHA S, SO PW, DEASY N, et al. Cutting edge:retrobulbar inflammation,adipogenesis, and acute orbital congestion in a preclinical female mouse model of Graves′orbitopathy induced by thyrotropin receptor plasmid-in vivo electroporation[J].Endocrinology,2013,154(9):3008-3015.

[3]中華醫(yī)學(xué)會內(nèi)分泌學(xué)會《中國甲狀腺疾病診治指南》編寫組.中國甲狀腺疾病診治指南——甲狀腺結(jié)節(jié)[J].中華內(nèi)科雜志，2008,47(10)：867-968.

[4]SEGNI M, PUCARELLI I, TRUGLIA S,et al.High prevalence of antinuclear antibodies in children with thyroid autoimmunity[J].J Immunol Res,2014,2014:150239.

[5]TURKOGLU Z, ZINDANCI I, TURKOGLU O, et al.Skin autoreactivity in Hashimoto′s thyroiditis patients without urticaria: autologous serum skin test positivity correlation with thyroid antibodies, sonographical volume and grading[J].Eur J Dermatol,2012,22(3):345-350.

[6]DOUTRE MS.Chronic urticaria and thyroid auto-immunity[J].Clin Rev Allergy Immunol,2006,30(1):31-37.

[7]PLATZER B, RUITER F, VAN DER MEE J, et al.Soluble IgE receptors-elements of the IgE network[J].Immunol Lett，2011,141(1)：36-44.

[8]MOLNéR I. What is the role of allergic sensitization in Graves′ disease[J].Orv Hetil,2007,148(29):1347-1352.

[9]MARONE G,SPADARO G,PALUMBO C,et al.The anti-IgE/anti-Fcepsilon Rlalpha autoantibody network in allergic and autoimmune diseases[J].Clin Exp Allergy,1999,29(1):17-27.

[10]MACNEIL AJ, YANG YJ, LIN TJ. MAPK kinase 3 specifically regulates Fc epsilonRI-mediated IL-4 production by mast cells[J]. J Immunol,2011,187(6):3374-3382.

[11]SUZUKI R, LEACH S, LIU W,et al.Molecular editing of cellular responses by the high-affinity receptor for IgE[J].Science,2014,343(6174):1021-1025.

(本文編輯：儲怡星)

收稿日期：(2015-03-06)

中圖分類號：

文章編號：1673-8640(2015)05-0450-04R446.1

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：ADOI：10.3969/j.issn.1673-8640.2015.05.010

通訊作者：李莉，聯(lián)系電話：021-63240090-4600。

作者簡介：王玉萍，女，1987年生，碩士，主要研究肥大細(xì)胞相關(guān)抗體與自身免疫性疾病。

基金項目：國家自然科學(xué)基金資助項目(81273276)；上海市科委資助項目(12ZR1447800、11JC1410300)