正交試驗(yàn)法優(yōu)選葛根配方顆粒的提取工藝

杜遠(yuǎn)東

【摘 要】 目的：研究?jī)?yōu)化葛根配方顆粒的提取工藝，為探索與改進(jìn)中藥飲片的臨床應(yīng)用形式提供依據(jù)。方法：采用傳統(tǒng)湯劑煎煮方法制備葛根對(duì)照藥物；篩選、確定葛根提取的溶媒，然后按正交L9（34）設(shè)計(jì)，對(duì)浸泡時(shí)間、溶劑用量、提取時(shí)間、提取次數(shù)四個(gè)因素進(jìn)行試驗(yàn)研究，以葛根素含量與出膏率為指標(biāo)，予以綜合評(píng)價(jià)（直觀分析和方差分析）。結(jié)果：最佳提取工藝為：12倍量的60%乙醇浸泡1h，提取2次，每次1.h。結(jié)論：通過正交試驗(yàn)優(yōu)選葛根配方顆粒的提取工藝，穩(wěn)定、合理、重現(xiàn)性好，能有效的提取葛根素，且適于大生產(chǎn)，可作為葛根配方顆粒的提取工藝。

【關(guān)鍵詞】 葛根；提取工藝；正交試驗(yàn)

【中圖分類號(hào)】R284.2 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號(hào)】1007-817（201）1-001-02

葛根為豆科植物野葛Pueraria lobata （Wild.） Ohwi或甘葛藤P. thomsonii Benth的干燥根，其主要活性成分為異黃酮類化合物，如葛根素、大豆素、大豆苷等。葛根配方顆粒是葛根飲片經(jīng)水提、濃縮、干燥、制粒等工序制成的單味中藥顆粒劑[1]。將葛根飲片制備為顆粒劑，可以有效地去除植物纖維等無活性成分，增加穩(wěn)定性，易儲(chǔ)存，服用方便。

1 材料與儀器

1.1 材料 葛根（西安盛興飲片廠）；葛根素對(duì)照品（批號(hào)：0766-200611，中國藥品生物制品檢定所）；甲醇（色譜級(jí)）；超純水（實(shí)驗(yàn)室自制）。

1.2 儀器 Waters高效液相色譜儀（Waters269 Separations Module，Waters2996 PAD檢測(cè)器），含在線真空脫氣機(jī)、四元梯度泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱；梅特勒GB204電子天平；SB3200D超聲波清洗機(jī)（寧波新莖生物科技股份有限公司）；101型電熱鼓風(fēng)干燥箱（北京科偉永鑫實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備廠）；艾柯-Advanced-06型超純水機(jī)（成都唐氏康寧科技發(fā)展有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 提取方法

2.1.1 采用傳統(tǒng)工藝提取 稱取100g藥材，加入水量沒過藥材面1～2cm即可，浸泡0.h，用武火煎煮至沸騰，然后改用文火煎煮，30min/次，提取2次，合并藥液，濃縮，定容至20ml，備用。

2.1.2 水沸后提取 稱取100g藥材，加入沸水中，水量以沒過藥材面1～2cm即可，武火煮沸后，改用文火，30min/次，提取2次，合并藥液，濃縮，定容至20ml，備用。

2.1.3 水提 稱取藥材100g，分別加入10、8倍量的水提取，第一次提取1h，第二次提取30min，濾出藥液，合并藥液，濃縮，定容至20ml，備用。

2.1.4 60%乙醇提取[2] 稱取100g藥材，加入倍量的60%乙醇回流提取，第一次提取1.h，第二次提取1 h，濾取藥液，合并藥液，減壓回收乙醇，定容至20ml，備用。

2.1. 9%乙醇提取 稱取100g藥材，加入倍量的9%乙醇回流提取，第一次提取1.h，第二次提取1 h，濾取藥液，合并藥液，減壓回收乙醇，定容至20ml，備用。

2.2 高效液相色譜測(cè)定含量

2.2.1 色譜條件[3] 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相：甲醇-水（2∶7）；檢測(cè)波長(zhǎng)：20nm。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取葛根素標(biāo)準(zhǔn)品10.4mg，加30%的乙醇定容至0ml，稀釋倍，制成2mg/0ml的對(duì)照品溶液，用微孔濾膜過濾，備用。

2.2.3 供試品溶液 吸取各樣品溶液2ml，用30%的乙醇定容至100ml，用微孔濾膜過濾，備用。

2.2.4 結(jié)果 由表1可知，60%乙醇提取所得的葛根素含量最高，因此溶劑選擇60%乙醇。

2.3 正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)優(yōu)選葛根提取工藝 選取浸泡時(shí)間（A）、加醇量（B）、提取時(shí)間（C）、提取次數(shù)（D）四個(gè)水平，以葛根素含量與干膏收率為指標(biāo)的進(jìn)行正交試驗(yàn)，優(yōu)化葛根提取工藝。按“2.2的方法測(cè)定葛根素含量，因素水平、正交試驗(yàn)、正交試驗(yàn)結(jié)果、直觀分析、方差分析的結(jié)果見表2、3、4、、6。

以干膏收率與葛根素含量的綜合評(píng)分為考察指標(biāo)，直觀分析表（表）中極差R值最小的為誤差項(xiàng)。對(duì)各因素進(jìn)行直觀分析，A因素：K2>K3>K1； C因素：K2>K3>K1。D因素：K2>K3>K1；B因素干膏收率為K1>K3>K2；含量測(cè)定為K2>K3>K1 ，綜合考慮，B因素選K3。根據(jù)以上結(jié)果分析得出工藝為A2B3C2D2，即為用60%乙醇，12倍的量，浸泡1h，提取2次，每次1. h。

2.4 驗(yàn)證試驗(yàn) 分別稱取20g葛根藥材，按優(yōu)選最佳工藝條件進(jìn)行3次驗(yàn)證試驗(yàn)，結(jié)果見表7。

3 結(jié)論

正交試驗(yàn)結(jié)果表明，該優(yōu)選工藝合理、穩(wěn)定、重現(xiàn)性好，為葛根配方顆粒的生產(chǎn)工藝奠定了基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)

[1] 顧志平，陳碧珠，馮瑞之.中藥葛根及其同屬植物資源的利用和評(píng)價(jià)[J].藥學(xué)學(xué)報(bào)，1996，31（）： 3.

[2] 匡海學(xué).中藥化學(xué)[M].1版.北京：中國中醫(yī)藥出版社，2003：178.

[3] 國家藥典委員會(huì). 中華人民共和國藥典（第一部）[S]. 北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010： 313.

（收稿日期：201.04.21）