秋石斛組織培養(yǎng)的研究

張娟

摘要：秋石斛為蘭科植物，具有較高的觀賞價(jià)值。本試驗(yàn)旨在建立秋石斛的工廠化育苗模式。采用秋石斛的高位芽為外植體，用75%酒精消毒1min后，再用0.1%HgCl2消毒20min，達(dá)到最佳的消毒效果。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)最佳的不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+6-BA1.0mg·L1+IBA0.5mg·L1+土豆泥80g·L1+活性炭1g·L1，增殖系數(shù)為4.5。最佳的生根壯苗培養(yǎng)基為MS+IBA0.8mg·L1+土豆泥80g·L1+活性炭1g·L1，生根率99%。移栽成活率達(dá)到95%。

關(guān)鍵詞：秋石斛;組織培養(yǎng);不定芽誘導(dǎo);生根培養(yǎng)

中圖分類號(hào)：S723.1+32.6文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1004-3020（2015）03-0020-03

TissueCultureTechniqueofDendrobiumhybrida

ZhangJuan

（FujianResearchInstituteofForestryFuzhou350012）

Abstract：DendrobiumhybridabelongstofamilyOrchidaceaewithhighornamentalvalue.WeestablishedamassproductionmethodforD.hybrida.Takinghighpositionbudsastheexplants，theoptimaldisinfectiontreatmentwas75%alcoholfor1minuteandthen0.1%HgCl2for20minutes.TheresultsshowedtheoptimalmediumforproliferationofadventitiousbudwastheMSmediumsupplementedwith1mg·L16-BA，0.5mg·L1IBA，100mg·L1mashedpotatoand1mg·L-1activatedcharcoal（AC），providingaproliferationcoefficientof4.5.TheoptimalmediumforrootingwasMSmediumsupplementedwith0.8mg·L1IBA，100mg·L1mashedPotatoand1mg·L1AC，providing99%rootingrateand95%survivalrate.

Keywords：Dendrobiumhybrida;tissueculture;inductionofadventitiousbud;rootingculture

秋石斛Dendrobiumhybrida為蘭科石斛屬，主要分布在我國西南、華南、臺(tái)灣等熱帶、亞熱帶和秦嶺以南地區(qū)，喜高溫、濕潤環(huán)境。秋石斛每年秋季開花，花色多，花量多，而且花期可長達(dá)兩個(gè)月，具有非常高的觀賞價(jià)值，又由于其花形類似蝴蝶，故稱蝴蝶石斛[1]，作為一種新型的切花品種，常用于餐盤布置、插花等，近年來市場需求量很大[2]。目前秋石斛的主要繁殖方式為分株和高芽繁殖[3]，繁殖系數(shù)低，推廣局限性大。本試驗(yàn)對(duì)秋石斛外植體消毒、增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)等進(jìn)行研究，以期為大規(guī)模的組培苗生產(chǎn)提供了技術(shù)支撐。

1材料和方法

1.1材料

本試驗(yàn)以秋石斛品種“陽光”的高位芽為外植體，秋石斛材料由鑫閩種業(yè)有限公司提供。

1.2方法

1.2.1外植體的消毒

于2012年3月中旬，將生長狀況良好的植株上萌發(fā)的高位芽取下，剝?nèi)ネ鈱尤~片，剪去根和頂部葉片，用飽和洗衣粉溶液浸泡30min后，清水沖洗干凈。在超凈工作臺(tái)中進(jìn)行消毒處理，先用75%酒精消毒，再用0.1%Hgcl2浸泡，最后用無菌水沖洗5次，消毒處理見表1。

經(jīng)過消毒處理的材料接種于MS+6BA2.0mg·L1+NAA0.5mg·L1+胰蛋白胨2g·L1的外植體培養(yǎng)基。每瓶接種一個(gè)莖段，試驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.2不定芽的增殖

經(jīng)過初代培養(yǎng)的材料接種在繼代培養(yǎng)基中，用于誘導(dǎo)不定芽。比較不同種類和不同用量的添加物，對(duì)秋石斛不定芽增殖的影響。每瓶培養(yǎng)基中接種5個(gè)莖段，每個(gè)處理20瓶，試驗(yàn)重復(fù)3次。接種50d后，觀察苗木生長情況，統(tǒng)計(jì)增殖率。繼代培養(yǎng)基：①M(fèi)S+6BA1.0mg·L1+IBA0.5mg·L1+蛋白胨2g·L1;②MS+6BA1.0mg·L1+IBA0.5mg·L1+花寶一號(hào)2g·L1;③MS+6BA1.0mg·L1+IBA0.5mg·L1+土豆泥80g·L1;④MS+6BA1.0mg·L1+IBA0.5mg·L1+香蕉泥80g·L1;⑤MS+6BA1.0mg·L1+IBA0.5mg·L1+土豆泥80g·L1+活性炭1g·L1。

1.2.3根的誘導(dǎo)

將經(jīng)過增殖培養(yǎng)，生長至3～4cm的單株從不定芽中剝離，接種在添加不同濃度的ABT（0.6，0.8，1.0）和IBA（0.6，0.8，1.0）MS培養(yǎng)基中，并在培養(yǎng)基中添加80g·L1土豆泥和1g·L1活性炭（Ac），進(jìn)行生根壯苗培養(yǎng)。每瓶培養(yǎng)基中接種10個(gè)單株，每個(gè)處理10瓶，試驗(yàn)重復(fù)3次。50d后觀察根的生長情況以及苗木生長狀況。生根培養(yǎng)基如下：①M(fèi)S+ABT0.6mg·L1+土豆泥80g·L1+AC1g·L1;②MS+ABT0.8mg·L1+土豆泥80g·L1+AC1g·L1;③MS+ABT1.0mg·L1+土豆泥80g·L1+AC1g·L1;④MS+IBA0.6mg·L1+土豆泥80g·L1+AC1g·L1;⑤MS+IBA0.8mg·L1+土豆泥80g·L1+AC1g·L1;⑥MS+IBA1.0mg·L1+土豆泥80g·L1+AC1g·L1。

1.2.4煉苗移栽

將高長至7～8cm的生長健壯、根系發(fā)達(dá)的生根苗移到大棚。打開瓶蓋煉苗3d后，取出生根苗，洗凈根部附著培養(yǎng)基，移栽于水苔基質(zhì)中，觀察移栽成活率。

1.3培養(yǎng)條件

試驗(yàn)培養(yǎng)基中均添加30g·L1白糖，卡拉膠6g·L1，pH值均為5.8。經(jīng)過121℃、1.1kg·cm2高壓消毒20min。培養(yǎng)室溫度為25±2℃，光強(qiáng)1000～1500lx，光照時(shí)間12h·d1。

1.4數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

污染率=污染株數(shù)/接種數(shù)×100%;存活率=存活株數(shù)/接種數(shù)×100%;生根率=生根株數(shù)/接種數(shù)×100%;移栽成活率=成活株數(shù)/移栽總株數(shù)×100%。

2結(jié)果與分析

2.1不同消毒處理對(duì)秋石斛消毒效果的影響

試驗(yàn)中設(shè)計(jì)6種不同的消毒處理，將經(jīng)過消毒的芽接種于初始培養(yǎng)基中，15d后觀察統(tǒng)計(jì)污染率和成活率。統(tǒng)計(jì)結(jié)果如表1。試驗(yàn)結(jié)果表明采用處理5：酒精消毒1min后，用0.1%HgCl2消毒20min，能達(dá)到最佳的消毒效果，存活率達(dá)到68%。在0.1%HgCl2消毒時(shí)間一致時(shí)，發(fā)現(xiàn)酒精消毒30s的消毒效果遠(yuǎn)比酒精消毒1min效果差。當(dāng)升汞消毒時(shí)間增加到25min時(shí)，由于過長的消毒時(shí)間對(duì)植物細(xì)胞產(chǎn)生毒害，使其死亡率提高。

2.2不定芽增殖

在繼代培養(yǎng)基中添加不同的添加物，觀察其對(duì)不定芽增殖的影響，50d后統(tǒng)計(jì)增殖率并進(jìn)行方差分析。從表2和表3中可以看出，不同培養(yǎng)基配比下，秋石斛的增值系數(shù)存在顯著性差異（F0.05（4，10）=3.47805

2.3生根培養(yǎng)

將長為3cm左右的無根單株接種到生根培養(yǎng)基中，從表4可以看到：在MS+IBA0.8mg·L1+土豆泥80g·L1+AC1g·L1的培養(yǎng)基中，生根率和根數(shù)都優(yōu)于其它組合，并且苗木葉片濃綠、莖粗壯、生長狀況優(yōu)良。試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)IBA對(duì)秋石斛根的誘導(dǎo)作用優(yōu)于ABT，羅嵐[6]在秋石斛的生根培養(yǎng)試驗(yàn)中，認(rèn)為IBA能促進(jìn)秋石斛生根，這與本試驗(yàn)結(jié)果一致。

3結(jié)論與討論

試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)最佳的不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+6BA1.0mg·L1+IBA0.5mg·L1+土豆泥80g·L1+活性炭1g·L1，增殖系數(shù)為4.5;最佳的生根壯苗培養(yǎng)基為MS+IBA0.8mg·L1+土豆泥80g·L1+活性炭1g·L1，生根率99%。

秋石斛多種植于高溫高濕的環(huán)境中，莖葉中繁殖著大量的微生物，給外植體的消毒造了很大的困難。陸順教[7]等分別對(duì)秋石斛外植體的取材部位進(jìn)行了研究，認(rèn)為基部萌發(fā)的側(cè)芽細(xì)菌較多，而高位芽不易受內(nèi)生菌感染。本試驗(yàn)采用高位芽為外植體，一定程度上避免了來自基質(zhì)的污染，且內(nèi)生菌較少，消毒效果較好。

試驗(yàn)在秋石斛的增殖過程中發(fā)現(xiàn)，有添加土豆泥培養(yǎng)基較未添加土豆泥的培養(yǎng)基，能更為有效的促進(jìn)苗木生長，苗木葉片濃綠，莖稈粗壯;未添加活性炭的培養(yǎng)基與添加活性炭的培養(yǎng)基相比，苗木容易出現(xiàn)褐化現(xiàn)象，從而影響了植物快速繁殖的成功率。這是以后試驗(yàn)或生產(chǎn)上需要注意和值得進(jìn)一步思考的地方。

參考文獻(xiàn)

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