青葙子化學(xué)成分及保肝活性的研究

馬環(huán)宇

青葙子化學(xué)成分及保肝活性的研究

馬環(huán)宇

（黑龍江省中醫(yī)藥科學(xué)院藥劑科，哈爾濱150036）

摘要：青葙子味苦，性微寒，歸肝經(jīng)，現(xiàn)代多用于肝臟類疾病的治療，并且具有明目的功效。隨著現(xiàn)代醫(yī)療和生物科技的不斷進(jìn)步，人們發(fā)現(xiàn)青葙子當(dāng)中發(fā)揮藥性作用的主要為三萜皂苷，并將其命名為青葙苷。本文即是對青葙子化學(xué)成分及保肝活性進(jìn)行研究，首先探討了青葙子的化學(xué)成分，通過提取和分離實驗獲得成分結(jié)構(gòu)，然后針對于青葙總皂苷的制備工藝進(jìn)行了分析，最后闡述了青葙總皂苷對于急性肝損傷病癥的療效，以期能為相關(guān)工作提供參考。

關(guān)鍵詞：青葙子；化學(xué)成分；青葙總皂苷；肝損傷；保肝活性

青葙子是莧科青葙屬的植物，是將成熟后的青葙種子進(jìn)行干燥制得的，根據(jù)《神農(nóng)本草經(jīng)》的記載，該藥物具有清肝明目的功效，主治視力模糊、肝火眩暈、眼生翳膜、肝熱目赤等癥狀。肝損傷是一種由多種疾病所引起的病理狀態(tài)，該類疾病發(fā)病率較高，并且很難治愈，容易引起反復(fù)發(fā)作的情況，并演變成為肝硬化、纖維化以及肝癌等嚴(yán)重疾病，而中醫(yī)認(rèn)為青葙子對于肝臟具有極強(qiáng)的保護(hù)作用。

1　青葙子化學(xué)成分的實驗研究

青葙子作為我國中藥當(dāng)中主治肝臟損傷的藥物，其應(yīng)用歷史比較久遠(yuǎn)，并且現(xiàn)代醫(yī)療科技也證明其具有抗癌、保肝等功效，對于脂肪肝、化學(xué)性肝損傷等病癥也具有很好的防治作用。

1.1實驗材料和儀器實驗所需要的主材料為制備的青葙子、柱層析、大孔樹脂、反相硅膠、顯色劑等，實驗儀器包括TLC板、纖維熔點測定儀、質(zhì)譜儀、核磁共振儀、紫外分光光度計等。

1.2實驗方法選取青葙子藥材50 kg，將其充分研磨，并與50%的乙醇溶液混合，在室溫下靜置24 h。然后采用滲漉提取方式，將提取后的溶液進(jìn)行減壓濃縮，并通過大孔樹脂柱的提純。分別利用無菌蒸餾水、30%的乙醇溶液、60%的乙醇溶液以及95%的乙醇溶液對提純后的藥品進(jìn)行洗脫，同時分別對洗脫液進(jìn)行二次減壓濃縮。根據(jù)研究顯示，青葙子的大部分有效藥物成分是在進(jìn)行60%的乙醇溶液洗脫時產(chǎn)生的，因此本次實驗重點進(jìn)行60%的乙醇溶液洗脫操作。將這一階段的洗脫溶液利用硅膠柱進(jìn)行反復(fù)的層析，并同時利用反相硅膠柱進(jìn)行純化，以此得到青葙苷A、青葙苷B、青葙苷C以及青葙苷D，其質(zhì)量應(yīng)分別在30 mg、25 mg、23mg以及50mg。

青葙苷A為白色粉末，易溶于水，其分子式為C41H62O15；青葙苷B同樣為白色粉末，易溶于水，其分子式為C42H64O17；青葙苷C為白色粉末，易溶于水，分子式為C42H86O13；青葙苷D為白色粉末，易溶于水，分子式為C48H96O18。其中青葙苷C主要為三氟乙酸水解后的產(chǎn)物，其經(jīng)過衍生之后可以形成糖睛乙酸脂。而青葙苷D與青葙苷C均為齊墩果烷型化合物，同樣為三氟乙酸水解后的產(chǎn)物，并且經(jīng)過衍生后也可以形成糖睛乙酸脂，但相比于青葙苷C，青葙苷D含有D-葡萄糖結(jié)構(gòu)。

2　青葙總皂苷的制備工藝

在制備過程中所需要的試劑包括95%的乙醇溶液、乙腈溶液、甲醇溶液、雙蒸餾水溶液以及青葙子。制備所需要的儀器包括高效液相色譜儀、電子分析天平、超聲清洗機(jī)等［1］。

在本次實驗的研究當(dāng)中，分別選擇了203 nm、210 nm、220 nm的紫外末端光對四個皂苷類化合物進(jìn)行檢驗，發(fā)現(xiàn)其均沒有明顯的紫外吸收效果，并且溶劑起到的干擾性非常大，因此不能夠選擇紫外檢測儀器。而利用蒸發(fā)光散射檢測器則可以針對于不吸收或不發(fā)光的化合物進(jìn)行檢查，避免了流動相對于紫外光干擾性較強(qiáng)的缺點。

首先選取25 g青葙子，對其進(jìn)行充分的研磨，并轉(zhuǎn)移到容量為100 m l的錐形瓶當(dāng)中，加入10倍于青葙子劑量的濃度為50%的甲醇溶液，在室溫下靜置12 h。利用超聲提取的方法，共進(jìn)行兩次操作，每次提取時間為0.5 h，合并兩次的提取液。將其放入離心機(jī)當(dāng)中，采用每分鐘4000 r的速率離心10 min。提取試管當(dāng)中的上清液，將其濃縮后轉(zhuǎn)移至容量為10m l的容量瓶當(dāng)中，用雙蒸餾水將其定容到10ml。選擇孔洞直徑為0.45μm的濾膜進(jìn)行過濾，將過濾后的溶液作為實驗溶液。同時選擇制備好的青葙苷C和青葙苷D，采用相同的方式制備對比溶液。經(jīng)過檢測之后，青葙子當(dāng)中含有的青葙苷比例為1.36‰，而青葙苷D為1.87‰，提取的方法主要是利用乙醇溶液來完成，其穩(wěn)定性較高、成本較低，并且乙醇是一種良好的溶劑，利用煎煮法索提取的藥物有效成分比較完整，提取速率較高，但是提取物當(dāng)中的色素殘留則高于滲漉法，但總體效果則要高于滲漉法，最終提取的青葙總皂苷的含量為92.79%。

3　青葙總皂苷急性肝損傷的藥效分析

采用的是小鼠急性肝損傷模型實驗方法，利用四氯化碳肝損傷小鼠模型作為實驗對象，為小鼠口服青葙總皂苷藥劑進(jìn)行治療，并在實驗完成后測定小鼠血液當(dāng)中天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)氨酶、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)氨酶的含量，同時測定肝組織漿液當(dāng)中丙二醛、谷胱甘肽過氧化物酶、過氧化氫酶以及超氧化物歧化酶的含量［2］。

青葙總皂苷藥劑主要利用青葙子活性因子進(jìn)行制備，將其與0.5%西黃著膠進(jìn)行混合和研磨，分別制備濃度為0.05 mg/ml、0.10 mg/m l、0.20 mg/m l的混懸液。同時配合藥物包括四氯化碳溶液、生理鹽水溶液等。

在實驗開始時，為小白鼠進(jìn)行口服用藥，劑量為0.2m l/10 g，在連續(xù)給藥3天之后，為小鼠腹腔注射濃度為10%的四氯化碳溶液，劑量為10 m l/kg。在培養(yǎng)18 h之后摘除小鼠的眼球，提取血液，并分離小鼠肝臟，將其制成漿液，測定血液和肝臟漿液當(dāng)中各物質(zhì)的含量。

實驗結(jié)束后可以看出，肝損傷小鼠血液當(dāng)中的天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)氨酶、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)氨酶的含量明顯升高，與普通小鼠數(shù)據(jù)存在較大的差異［3］。而在青葙總皂苷藥劑治療之后，則可見天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)氨酶、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)氨酶的升高趨勢被明顯控制，穩(wěn)定在1.0～4.0 mg/kg。而對肝臟漿液進(jìn)行分析后可以看出，肝損傷小鼠漿液當(dāng)中的過氧化氫酶、谷胱甘肽過氧化物酶、超氧化物歧化酶的含量明顯降低，而丙二醛含量則明顯升高，與普通小鼠數(shù)據(jù)存在較大的差異，這表明了因四氯化碳所引發(fā)的肝損傷會導(dǎo)致肝組織內(nèi)細(xì)胞的過氧化反應(yīng)增強(qiáng)，嚴(yán)重影響組織的健康和生理代謝。而本次實驗當(dāng)中所配置的三種不同濃度的藥劑均能夠有效控制過氧化氫酶、谷胱甘肽過氧化物酶、超氧化物歧化酶的降低和丙二醛的升高，其可以將丙二醛的濃度控制在37.82～76.52 nmol/mg，明顯低于肝損傷小鼠的87.95 nmol/mg。

經(jīng)過顯微鏡病理觀察可以看出，健康小鼠的肝臟切片結(jié)構(gòu)較為清晰，肝組織排列順序穩(wěn)定，沒有明顯的病變情況［4］。而肝損傷的小鼠肝臟切片內(nèi)則可以看到大面積的壞死病灶，肝臟細(xì)胞的內(nèi)部結(jié)構(gòu)和外部排序被完全打亂，干細(xì)胞的輪廓基本消失，并且其中伴有大量的淋巴細(xì)胞炎癥。利用低濃度藥劑進(jìn)行治療的小鼠肝臟內(nèi)細(xì)胞排布仍顯雜亂，細(xì)胞水腫增大，但輪廓保持較為完整；中濃度藥劑治療的小鼠肝組織內(nèi)肝細(xì)胞體積增大，部分細(xì)胞具有水腫表現(xiàn)，細(xì)胞輪廓保持完好；高濃度藥劑小鼠肝組織內(nèi)細(xì)胞保持完整，但結(jié)構(gòu)較為混亂，沒有明顯的炎癥病灶和細(xì)胞病變［5］。

參考文獻(xiàn)

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doi:10.3969/j.issn.1672-2779.2015.18.075

文章編號：1672-2779（2015）-18-0146-02

收稿日期：（本文編輯：張文娟本文校對：白海玉2015-07-02）

MA Huanyu
(Department of Pharmacy， Heilongjiang Province Institute of Traditional Chinese Medicine， Harbin 150036， China)

Abstract:Semen celosiae has bitter taste,slightly cold,owned by the liver.It is used to treat liver disease,and has effect on improving eyesight.With the continuous progress ofmodern medical and biological science and technology,people found that themain function in semen celosiae was triterpenoid saponins which was named celosin.This paper studied the chemical constituents of semen celosiae and hepatoprotective activity.First of all,we discussed the chemical constituents of semen celosiae,then analyzed the preparation technique. At last,we elaborated the therapeutic effect of total saponins on acute liver injury disease in order to provide a reference for the relevant work.

Keywords:semen celosiae；chemical constituents；total saponins；liver injury；hepatoprotective activity