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    香菇液體菌種培養(yǎng)條件優(yōu)化

    2015-04-02 20:59:01徐思煒張君勝周雯
    江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2014年12期
    關(guān)鍵詞:發(fā)酵條件正交試驗(yàn)香菇

    徐思煒 張君勝 周雯

    摘要:從碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽及發(fā)酵控制條件等方面,對(duì)香菇(Lentinus edodes液體菌種培養(yǎng)條件的優(yōu)化進(jìn)行了研究。單因素試驗(yàn)結(jié)果表明:香菇菌絲生長(zhǎng)最佳碳源為麥芽糖,最佳氮源為麥麩。正交試驗(yàn)結(jié)果表明:培養(yǎng)基最佳配方為麥麩70%、麥芽糖3%、MgSO4 015%、H2PO4 02%;適宜培養(yǎng)條件為250 mL三角瓶裝液量100 mL,pH值50,接種量13%,轉(zhuǎn)速180 r/min。

    關(guān)鍵詞:香菇;液體菌種;發(fā)酵條件;正交試驗(yàn)

    中圖分類號(hào): S6461+204文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A

    文章編號(hào):1002-1302(201412-0290-03

    香菇(Lentinus edodes別稱香蕈、香菌,是側(cè)耳科植物香蕈的子實(shí)體,營(yíng)養(yǎng)價(jià)值很高。香菇蛋白質(zhì)含量高達(dá)186%,脂肪含量低至48%,碳水化合物含量為71%,粗纖維含量為96%,含有人體必需的8種氨基酸、多種維生素、礦物元素等[1-4]。傳統(tǒng)的香菇制種技術(shù)具有成本高、周期長(zhǎng)、勞動(dòng)強(qiáng)度大等缺點(diǎn),液體菌種制備技術(shù)具有成本低、周期短、易保存、易控制、污染低等優(yōu)點(diǎn),是發(fā)展規(guī)?;愎疆a(chǎn)業(yè)的理想選擇。本研究探討香菇液體培養(yǎng)基最佳配方及發(fā)酵條件,旨在為香菇液體菌種生產(chǎn)提供參考。

    1材料與方法

    11材料

    111菌種

    供試香菇菌種由江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院動(dòng)物科技學(xué)院生物技術(shù)實(shí)驗(yàn)室提供。

    112培養(yǎng)基

    PDA活化培養(yǎng)基:馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、MgSO4·7H2O 1 g、H2PO4 2 g、瓊脂20 g、水1 000 mL,pH值自然。種子液體培養(yǎng)基:馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、酵母膏3 g、MgSO4·7H2O 1 g、H2PO4 1 g、水1 000 mL,pH值60。碳源供試培養(yǎng)基:酵母膏1 g、MgSO4·7H2O 1 g、H2PO4 1 g、水1 000 mL,pH值60,分別加入供試碳源。氮源供試培養(yǎng)基:麥芽糖3 g、MgSO4·7H2O 1 g、H2PO4 1 g、水1 000 mL,pH值60,分別加入供試氮源。

    113主要儀器設(shè)備

    超凈工作臺(tái)、電子天平、恒溫振蕩培養(yǎng)箱、蒸汽滅菌鍋、真空干燥箱、試管及三角瓶等玻璃儀器。

    12方法

    121斜面菌種制備

    在超凈工作臺(tái)中,挑取香菇母種菌塊1 cm2,轉(zhuǎn)入PDA斜面活化培養(yǎng)基,25 ℃下培養(yǎng)10 d,選取菌絲潔白、濃密、健壯、無(wú)污染的斜面試管備用[7]。

    122液體菌種的制備

    取250 mL三角瓶,裝入100 mL種子液體培養(yǎng)基并進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。在超凈工作臺(tái)中接入1 cm2斜面菌種2塊,置于恒溫振蕩培養(yǎng)箱中,溫度設(shè)定為 25 ℃。靜置24 h后,在25 ℃、160 r/min條件下振蕩12 d終止培養(yǎng),獲得香菇液體菌種。

    123培養(yǎng)方法

    將100 mL供試培養(yǎng)基分裝至250 mL三角瓶中,滅菌后以10%的接種量將菌種接入,然后放入培養(yǎng)箱中,在25 ℃、160 r/min條件下培養(yǎng)12 d。

    124碳源、氮源篩選試驗(yàn)

    將不同供試碳源、氮源分別加入培養(yǎng)基中進(jìn)行單因素試驗(yàn),碳源分別為葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、可溶性淀粉、玉米粉(表1,氮源分別為NH4NO3、蛋白胨、酵母膏、黃豆芽、麥麩(表2,每處理3水平,重復(fù)3次。

    [F(W6][HT6H][J]表1不同碳源篩選試驗(yàn)[HTSS][STB]

    [HJ5][BG(!][BHDFG3,W4,W5。5W]編號(hào)葡萄糖含量(%蔗糖含量(%麥芽糖含量(%可溶性淀粉含量(%玉米粉含量(%

    [BHDG12]111122

    [BHDW]222233

    333344[HJ][BG)F][F)]

    [F(W6][HT6H][J]表2不同氮源篩選試驗(yàn)[HTSS][STB]

    [HJ5][BG(!][BHDFG3,W4,W5。5W] 編號(hào)NH4NO3含量(%蛋白胨含量(%酵母膏含量(%黃豆芽含量(%麥麩含量(%

    [BHDG12]105116060

    [BHDW]210227070

    315338080[HJ][BG)F][F)]

    125香菇液體菌種培養(yǎng)基優(yōu)化

    根據(jù)上述單因素碳源、氮源篩選試驗(yàn)結(jié)果,加入無(wú)機(jī)鹽MgSO4、H2PO4,設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)(表3,每組試驗(yàn)重復(fù)3次,以菌絲干質(zhì)量為指標(biāo),取平均值。

    [F(W6][HT6H][J]表3香菇液體培養(yǎng)基正交試驗(yàn)因素水平[HTSS][STB]

    [HJ5][BG(!][BHDFG3,W5,W6。4W]水平A:麥麩含量(%B:麥芽糖含量(%C:MgSO4含量(%D:H2PO4含量(%

    [BHDG12]1601010010

    [BHDW]2702015015

    3803020020[HJ][BG)F][F)]

    126培養(yǎng)條件篩選試驗(yàn)

    將上述試驗(yàn)篩選出的優(yōu)化配方作為培養(yǎng)基,以裝液量、pH值、接種量、轉(zhuǎn)速為因素,設(shè)計(jì)培養(yǎng)條件正交試驗(yàn)(表4,每組試驗(yàn)重復(fù)3次,以菌絲干質(zhì)量為指標(biāo),取平均值。

    [F(W7][HT6H][J]表4液體培養(yǎng)條件正交試驗(yàn)因素水平[HTSS][STB]

    [HJ5][BG(!][BHDFG3,W5,W6。4W]水平A:裝液量(mLB:pH值C:接種量(%D:轉(zhuǎn)速(r/min

    [BHDG12]1805010140

    [BHDW]21005513160

    31206015180[HJ][BG)F][F)]endprint

    127菌絲干質(zhì)量測(cè)定

    培養(yǎng)液過(guò)濾后取香菇菌絲,用蒸餾水沖洗至無(wú)培養(yǎng)液,放入干燥箱內(nèi),80 ℃下烘干至恒質(zhì)量,用電子天平稱量菌絲干質(zhì)量[8]。

    2結(jié)果與分析

    21不同碳源對(duì)香菇菌絲干質(zhì)量的影響

    由圖1可知,以麥芽糖為碳源培養(yǎng)結(jié)果最優(yōu),菌絲干質(zhì)量最高,以蔗糖為碳源培養(yǎng)結(jié)果最差,菌絲干質(zhì)量最低。由此可知,適合香菇菌絲生長(zhǎng)的最佳碳源為麥芽糖。

    [F(W10][TPXSW1tif][F]

    22不同氮源對(duì)香菇菌絲干質(zhì)量的影響

    由圖2可知,以麥麩為氮源培養(yǎng)結(jié)果最優(yōu),菌絲干質(zhì)量最高,以無(wú)機(jī)氮源NH4NO3為氮源培養(yǎng)結(jié)果最差,菌絲干質(zhì)量最低,適合香菇菌絲生長(zhǎng)的最佳氮源為麥麩。

    [F(W11][TPXSW2tif][F]

    23液體培養(yǎng)基最佳配方確定

    由表5、表6、圖3可知,最佳液體培養(yǎng)基配方組合為A2B3C2D3,即麥麩70%、麥芽糖3%、MgSO4 015%、H2PO4 02%,影響香菇菌絲生長(zhǎng)的因素由強(qiáng)到弱依次為麥麩>麥芽糖>MgSO4>H2PO4。

    [F(W25][HT6H][J]表5液體培養(yǎng)基優(yōu)化配方正交試驗(yàn)結(jié)果[HTSS][STB]

    [HJ5][BG(!][BHDFG3,W3,W20,W6W]序號(hào)[B(][BHDWG12,W20W]因素水平[BHDWG12,W5。4W][XXSX2-SX192]A:麥麩 B:麥芽糖 C:MgSO4 D:H2PO4[BW]菌絲干質(zhì)量(g/100 mL

    [BHDG38mm,W3,W5。4,W6W]111111534

    [BHDW]212221760

    313331975

    411110798

    512221982

    613331874

    711111269

    812222580

    913332078

    1021232021

    1122312317

    1223122463

    1321232814

    1422311915

    1523121515

    1621232512

    1722312220

    1823123024

    1931322216

    2032132508

    2133212804

    2231321559

    2332131375

    2433212841

    2531321533

    2632132788

    2733211727[HJ][BG)F][F)]

    [F(W10][HT6H][J]表6液體培養(yǎng)基優(yōu)化配方試驗(yàn)方差分析[HTSS][STB]

    [HJ5][BG(!][BHDFG12,W6,W5,W3,W5。3W]變異來(lái)源平方和自由度均方F值顯著性

    [BHDG12,W6Q0,W5DW,W3,W5。3DWW]校正模型11615611161564698140000

    [BHDW]A:麥麩14402072029120080

    B:麥芽糖10102050520420159

    C:硫酸鎂09492047419180176

    D:磷酸二氫鉀03532017707140503

    誤差4450180247

    總變異12435827

    校正總和820126[HJ][BG)F][F)][FL]

    [F(W10][TPXSW3tif][F]

    [FL(22]24最佳培養(yǎng)條件的確定

    [JP4]由表7、表8、圖4可知,最佳液體培養(yǎng)條件組合為A2B1C2D3,即裝液量100 mL,pH值50,接種量13%,轉(zhuǎn)速180 r/min,影響香菇菌絲生長(zhǎng)的因素由強(qiáng)到弱依次為裝液量>轉(zhuǎn)速>pH值>接種量。

    [F(W27][HT6H][J]表7液體培養(yǎng)條件正交試驗(yàn)結(jié)果[HTSS][STB]

    [HJ5][BG(!][BHDFG3,W3,W5。4,W6W]序號(hào)A:裝液量 B:pH值C:接種量 D:轉(zhuǎn)速 菌絲干質(zhì)量(g/100 mL

    [BHDG12]111112293

    [BHDW]212222396

    313332612

    411113119

    512221855

    613332172

    711112636

    812221634

    913332972

    1021232544

    1122312735

    1223122571

    1321233606

    1422313243

    1523122369

    1621233814

    1722311895

    1823122133

    1931322547

    2032132415

    2133212533

    2231321278

    2332131239

    2433211385

    2531321278

    2632131239

    2733211385[HJ][BG)F][F)]

    [F(W10][HT6H][J]表8培養(yǎng)條件重復(fù)試驗(yàn)方差分析[HTSS][STB]endprint

    [HJ5][BG(!][BHDFG12,W6,W5,W3,W5。3W]變異來(lái)源平方和自由度均方F值顯著性

    [BHDG12,W6Q2,W5DW,W3,W5。3DWW]校正模型14190211419024405340000

    [BHDW]A:裝液量53182265982540003

    B:pH值11492057417830197

    C:接種量00742003701140893

    D:轉(zhuǎn)速12092060518770182

    誤差5798180322

    總變異15545027

    校正總和1354826[HJ][BG)F][F)]

    3結(jié)論與討論

    本研究表明,香菇菌絲生長(zhǎng)的最適碳源為麥芽糖,可溶性淀粉在高溫滅菌后需水解方能利用,因此效果不如麥芽糖。玉米粉高溫滅菌后雜質(zhì)相對(duì)較多,在菌絲吸收利用方面次于可溶性淀粉。葡萄糖或因高溫滅菌過(guò)程中發(fā)生不明顯焦化現(xiàn)象,導(dǎo)致實(shí)際利用率較低。最佳氮源為麥麩,香菇作為異養(yǎng)菌種,對(duì)有機(jī)氮源利用率較高,麥麩高溫處理后可溶性蛋白含量較高,同時(shí)富含各種維生素,適宜菌絲生長(zhǎng)。黃豆芽、酵母膏、蛋白胨營(yíng)養(yǎng)成分相對(duì)單一,促進(jìn)菌絲生長(zhǎng)效果一般。銨鹽雖然較易吸收,但作為無(wú)機(jī)氮源的NH4NO3,容易引起pH值波動(dòng)以及銨毒性,因此總體效果不佳,不易被菌絲吸收利用,菌絲干質(zhì)量最低。培養(yǎng)基優(yōu)化配方結(jié)果表明,氮源、碳源對(duì)菌絲的生長(zhǎng)影響較大,MgSO4、H2PO4次之。綜上所述,最佳液體基培養(yǎng)條件組合為A2B1C2D3,即裝液量100 mL,pH值50,接種量13%,轉(zhuǎn)速180 r/min,影響香菇菌絲生長(zhǎng)的培養(yǎng)因素依次為裝液量>轉(zhuǎn)速>pH值>接種量。

    [HS2][HT85H]參考文獻(xiàn):[HT8SS]

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