茵陳壓制飲片溶出行為的變化

謝 凡， 宋 英* ， 袁 燕， 吳 萍

(1. 成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，四川 成都610072;2. 成都中醫(yī)藥大學(xué)，四川 成都610075)

茵陳(Artemisiae scopariae Herba)為治療黃疸之要藥，以清熱利濕，利膽退黃為主要功效，主要用于治療黃疸以及傳染性黃疸型肝炎，濕溫暑濕、濕瘡瘙癢［1］。茵陳密度較小，質(zhì)地疏松，普通飲片不利于定量小包裝和藥房調(diào)劑［2-4］。壓制飲片對于小包裝的技術(shù)改進(jìn)是一個良好的開端［5］。茵陳蒿湯由茵陳、梔子、大黃等組成［6］。原方來源于《傷寒論·辨陽明病脈證并治》，具有清熱利濕退黃的功效，臨床主要用于治療濕熱黃疸［7］。茵陳為方中君藥，綠原酸為其主要有效成分之一［8-10］，《中國藥典》以綠原酸作為茵陳中成分定量測定的指標(biāo)。本實驗選用茵陳為研究對象，以綠原酸為評價指標(biāo)，對比茵陳壓制前后有效成分的溶出，為壓制飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究提供參考。

1 儀器與試藥

HP 1100 高效液相色譜儀(配有DAD 檢測器、自動進(jìn)樣器、四元梯度泵、在線脫氣裝置，美國惠普公司)，Agilent Chem Station 色譜工作站(美國Agilent 公司);依利特C18色譜柱(Hypersil BDS，150 mm×4.6 mm，5 μm，大連依利特分析儀器有限公司);BP211D 分析天平(十萬分之一型，德國賽多利斯公司);101A-3 干燥箱(上海市實驗儀器總廠);永欣TW-2000W 可調(diào)溫電爐(郫縣永結(jié)電器總廠)。

綠原酸對照品(批號110737-200415，供含量測定用，中國藥品生物制品檢定所);茵陳傳統(tǒng)飲片(批號120701)購自四川省中藥飲片有限公司，符合《中國藥典》2010 年版一部“茵陳”項下有關(guān)規(guī)定;茵陳壓制中藥飲片(批號120701)購自四川省中藥飲片有限公司;乙腈為色譜純，水為重蒸餾水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 茵陳復(fù)方測定方法研究［11-14］

2.1.1 色譜條件 依利特Hypersil BDS 色譜柱(150 mm×4.6 mm，5 μm);流動相為乙腈-0.05%磷酸溶液(10 ∶90);體積流量1 mL/min;檢測波長327 nm，柱溫30 ℃;進(jìn)樣量5 μL。

2.1.2 對照品溶液的制備 精密稱取綠原酸對照品2.61 mg，置25 mL 棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度搖勻，即得(0.104 4 mg/mL)。

2.1.3 供試品溶液的制備 按照茵陳蒿湯處方比例稱取藥材1 500 g，加10 倍量的水，浸泡30 min，第1 次煎煮保持微沸15 min，第2 次煎煮保持沸騰10 min，濾過，藥液定容至10 000 mL。精密吸取上述樣品溶液10 mL，置25 mL 棕色量瓶中，加50% 甲醇至刻度，搖勻，經(jīng)微孔濾膜(0.45 μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.1.4 陰性樣品溶液的制備 按“2.1.3”項下供試品溶液制備方法，制備缺茵陳陰性樣品，作為陰性樣品溶液。

2.1.5 系統(tǒng)適用性試驗 按“2. 1. 1”項下色譜條件，精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性供試品溶液各5 μL，注入液相色譜儀，結(jié)果陰性無干擾，理論塔板數(shù)按綠原酸峰計算不低于5 000，供試品中綠原酸色譜峰與相鄰色譜峰分離度﹥1.5，見圖1。

圖1 對照品、陰性樣品和供試品的HPLC 圖譜Fig.1 HPLC chromatograms of reference substances，negative sample and sample

2.1.6 線性范圍考察 分別精密吸取綠原酸對照品溶液1、3、5、10、15 μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積。以峰面積(Y)對進(jìn)樣量(X)進(jìn)行回歸，計算回歸方程Y =1 601.617 32X +25.426 76 (r =0.999 3)，結(jié)果表明，在0.104 4 ～1.566 μg 范圍內(nèi)綠原酸峰面積與進(jìn)樣量有良好的線性關(guān)系。

2.1.7 綠原酸的測定 按上述色譜條件，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測定得茵陳壓制飲片、傳統(tǒng)飲片中綠原酸含有量均值分別為5.772 mg/g、5.105 mg/g。

2.1.8 精密度試驗 按上述色譜條件，精密吸取綠原酸對照品溶液5 μL，注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6 次，記錄綠原酸色譜峰峰面積均值為887.6，RSD 為0.2%，表明精密度良好。

2.1.9 穩(wěn)定性試驗 按上述色譜條件，精密吸取供試品溶液5 μL，分別于0、2、4、6、8、10 h，注入液相色譜儀，記錄峰面積，計算綠原酸峰面積均值為369.8，RSD 為1.5%，表明供試品溶液在10 h 內(nèi)穩(wěn)定性較好。

2.1.10 重復(fù)性試驗 分別制備供試品溶液6 份，按上述色譜條件，注入液相色譜儀，記錄綠原酸色譜峰峰面積，計算樣品中綠原酸含有量均值為0.041 9 mg/g，RSD 為2.7%，表明方法重復(fù)性較好。

2.1.11 加樣回收率試驗 精密稱取已知含有量的樣品制備溶液5 mL (0.104 7 mg/mL)，共6 份，分別精密加入綠原酸對照品溶液3 mL，按供試品制備方法及色譜條件，測定，計算得綠原酸的加樣回收率平均值為100.1%，RSD 為2. 6%，表明該方法的加樣回收率較好。

2.2 單味飲片煎煮質(zhì)量的比較 分別稱取茵陳傳統(tǒng)飲片和定量壓制飲片各600 g，兩組，分別作為機器煎煮組與傳統(tǒng)煎煮組。加15 倍量水，浸泡30 min，第1 次煎煮保持微沸15 min，第2 次煎煮保持沸騰10 min，濾過，濾液定容至10 000 mL，備用。精密吸取上述樣品溶液5 mL，置25 mL 棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，經(jīng)微孔濾膜(0.45 μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。精密吸取供試液10 μL，注入液相色譜儀，計算綠原酸量，結(jié)果見表1。由此表明，茵陳壓制飲片使用機器煎煮和傳統(tǒng)煎煮的綠原酸含有量均比傳統(tǒng)飲片高。

2.3 茵陳蒿湯煎煮質(zhì)量的比較 按茵陳蒿湯處方比例稱取6 份，其中茵陳分別選取壓制前、后的飲片，分為機器煎煮組與傳統(tǒng)煎煮組。按照“2.2”項下煎煮，藥液定容至10 000 mL。分別精密吸取上述溶液10 mL，置25 mL 棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，經(jīng)微孔濾膜(0.45 μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。精密吸取供試液10 μL，注入液相色譜儀，計算綠原酸量，結(jié)果見表2。由此表明，茵陳壓制飲片使用機器煎煮和傳統(tǒng)煎煮的綠原酸含有量均比傳統(tǒng)飲片高。

表1 單味煎煮比較結(jié)果(n=6)Tab.1 Comparison result of single herb decoction(n=6)

表2 復(fù)方煎煮比較結(jié)果(n=6)Tab.2 Comparison result of compound decoction (n=6)

2.4 不同時間點綠原酸溶出曲線比較 分別稱取茵陳傳統(tǒng)飲片和定量壓制飲片各100 g，加水2 000 mL (補加吸水量)，浸泡30 min，分別于煎煮5、10、15、20、30、40、50、60 min 取樣100 mL，并補充水體積，藥液濾過，備用。精密吸取上述樣品溶液5 mL，置25 mL 棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，經(jīng)微孔濾膜(0.45 μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。精密吸取供試液10 μL，注入液相色譜儀，計算綠原酸量，溶出曲線見圖2。

圖2 定量壓制飲片與傳統(tǒng)飲片溶出曲線Fig.2 Comparison chart of chlorogenic acid dissolving amount from compressed pieces and traditional pieces

3 討論

中藥定量壓制飲片工藝已獲得4 項國家專利成果技術(shù)，符合傳統(tǒng)的中藥應(yīng)用要求，采用壓制技術(shù)，使體積大幅縮小，解決了生產(chǎn)、運輸、倉儲和藥房調(diào)劑等出現(xiàn)的困擾［15-16］。飲片壓制成塊后，能使飲片揮發(fā)性成分不易散失，提高藥效。同時，加大了飲片比重，使中藥更易完全浸入水中，避免了漂浮，有利于浸潤和煎煮，符合中醫(yī)所說的“藥力共出”。對飲片進(jìn)行壓制，破壞了組織結(jié)構(gòu)，提高了溶出度，壓制飲片沒有改變其內(nèi)在質(zhì)量。

茵陳定量壓制飲片壓制前后單味煎煮、復(fù)方煎煮、溶出曲線比較結(jié)果表明，壓制中藥飲片水煎液中綠原酸含有量、藥材中含有量及干膏收率均略高于傳統(tǒng)飲片，壓制飲片并不影響茵陳的煎煮效果，且能提高煎煮效率。由對比溶出曲線圖可知:煎煮時間在約30 min 之前，壓制飲片綠原酸溶出略高于傳統(tǒng)飲片，說明中藥定量壓制飲片能夠保證藥效的穩(wěn)定性，有利于藥效成分的溶出。煎煮時間在約30 min 之后，壓制飲片和傳統(tǒng)飲片的綠原酸含有量均出現(xiàn)下降趨勢，證明壓制中藥飲片亦不是隨煎煮時間增長有效成分增多，煎煮時間越長，反而會影響藥效。

［1］ 任仁安，陳瑞華. 中藥鑒定學(xué)［M］. 上海:上?？萍冀逃霭嫔?，1992:502

［2］ 鄧蘇平. 中藥飲片小包裝存在的不足及需要解決的問題［J］. 中國藥房，2010，21(31):2969-2971.

［3］ 李毅民，周向明，洪 軍，等. 小包裝中藥飲片調(diào)劑管理［J］. 中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2009，29(9):768.

［4］ 甘雨良. 淺談中藥飲片在臨床應(yīng)用中存在的問題與對策［J］. 中國實用醫(yī)藥，2008，3(3):150.

［5］ 宋 英. 中藥飲片的定量壓制研究［J］. 中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2012，32(18):48-51.

［6］ 閔春艷. 茵陳蒿湯合煎與分煎的成份比較研究［J］. 上海中醫(yī)藥雜志，2004，38(2):53.

［7］ 朱世敏，唐志鵬. 茵陳蒿湯護肝作用研究進(jìn)展［J］. 上海中醫(yī)藥雜志，2008，42(2):73.

［8］ 吳衛(wèi)華，康 楨，歐陽冬生，等. 綠原酸的藥理學(xué)研究進(jìn)展［J］. 天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2006，18(4):691-694.

［9］ 陳慧芳. 植物活性成分詞典:第3 冊［M］. 北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2001:12.

［10］ 黃泰康. 常用中藥有效成份與藥理手冊［M］. 北京:中國中醫(yī)藥科技出版社，1994:1565.

［11］ 國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典:2010 年版一部［S］. 北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:223.

［12］ 趙美瑾，許 麗，王瑞紅，等. 茵陳蒿湯質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中含量的研究［J］. 遼寧中醫(yī)雜志，2004，34(7):973-974.

［13］ 謝 韜，梁敬鈺，劉 凈. 茵陳化學(xué)成分和藥理作用研究進(jìn)展［J］. 海峽藥學(xué)，2004，16(1):8-13.

［14］ 王 倩. 茵陳藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)建立及茵陳篙湯藥藥物動力學(xué)研究［D］. 沈陽:沈陽藥科大學(xué)，2002.

［15］ 謝海洲. 傳統(tǒng)中藥的精制與改革之我見［J］. 中醫(yī)藥學(xué)刊，2003，21(2):177.

［16］ 卜訓(xùn)生. 小包裝中藥飲片調(diào)劑的優(yōu)勢及存在問題［J］. 北京中醫(yī)藥，2008，27(7):554.