青龍衣活性部位的化學成分研究

周媛媛， 蔣艷秋， 孟 穎， 劉兆熙， 楊炳友

(黑龍江中醫(yī)藥大學藥學院，黑龍江 哈爾濱150040)

青龍衣為胡桃科植物胡桃楸Jugland mandshurica Maxim 或胡桃Juglans regia 未成熟外果皮，主產(chǎn)河北、山東、東北等地［1］。青龍衣始載于《開寶本草》，該藥辛、苦、澀、平，古代應用主要利用其清熱解毒、止痛止痢之功效［2］?，F(xiàn)代藥理學研究表明，青龍衣具有明顯的鎮(zhèn)痛和抗腫瘤作用［3］。本實驗對青龍衣三氯甲烷和乙酸乙酯抗腫瘤活性部位進行了化學成分研究，分離得到15 個化合物。

1 儀器與材料

MS-2010 型質譜儀和Finnigan LCQ LC-MS 聯(lián)用儀;Bruker-400 型超導核磁共振光譜儀;島津公司FTIR-8400S 型紅外光譜儀;AB-8 型大孔吸附樹脂(南開大學化工廠);柱色譜硅膠(200 ～300 目，青島海洋化工廠);其他試劑均為分析純。

青龍衣藥材2012 年8 月采集自吉林省長白山區(qū)，經(jīng)黑龍江中醫(yī)藥大學中藥鑒定教研室王振月教授鑒定為胡桃楸Jugland mandshurica Maxim 的青果皮。

2 提取與分離

將干燥的青龍衣藥材10.0 kg 粉碎，95%乙醇回流提取3 次，減壓濃縮得乙醇浸膏(853 g)。提取物用適量水混懸后，分別用乙酸乙酯和三氯甲烷進行兩相回流，得乙酸乙酯層浸膏(84 g)和三氯甲烷層浸膏(96 g)，乙酸乙酯浸膏通過AB-8 型大孔吸附樹脂柱色譜，以H2O、50%乙醇和95%乙醇依次洗脫，其中95%乙醇洗脫組分(32 g)反復用硅膠柱層析后得到化合物1 (32 mg)，化合物2 (28 mg);50%乙醇洗脫組分(42 g)反復用硅膠柱層析后得到化合物3 (30 mg)，化合物4 (29 mg)，化合物5 (33 mg)，化合物6 (28 mg)，化合物7 (31 mg)，化合物8 (30.5 mg)，化合物9(26 mg)。三氯甲烷浸膏反復硅膠柱層析后得到化合物10 (31 mg)，化合物11 (30 mg)，化合物12(26 mg)，化合物13 (32 mg)，化合物14 (30 mg)，化合物15 (32 mg)。

3 結構鑒定

化合物1:無色針狀晶體(MeOH)，mp 283 ～287 ℃，Liebermann-Burchard 反應陽性。ESI-MS(m/z):455 ［M-H］-，表明其相對分子質量為456。IR (KBr)譜顯示有羥基(3 415 cm-1)和羰基(1 694 cm-1)吸收。TLC 與熊果酸對照品展開，兩者Rf值一致，同對照品混合后熔點不下降，故化合物1 為熊果酸(ursolic acid)。

化合物2:無色針狀粉末 (MeOH)，Liebermann-Burchard 反應陽性，Molish 反應陰性。ESIMS (m/z):487 ［M-H］-，表明其相對分子質量為488。IR (KBr)譜顯示有羥基(3 458 cm-1)和羰基(1 703 cm-1)吸收。1H-NMR (400 MHz，Methanol-d4)δ:0.68，0.80，1.01，1.18 (3H ×4，s， Me-25， Me-24， Me-23， Me-27 )，0.92，0.87 (3H ×2，d，J =6.4 Hz，Me -29，Me-30)，3.24 (d，J =10.8 Hz，H-23a)，3.32 (1H，dd，J=9.6，1.6 Hz，H-3)，3.48 (d，J =10.8 Hz，H-23b)，3.69 (m，H-2)，5.23 (1H，t，J =3.2 Hz，H-12)。13C-NMR (100 MHz，Methanol-d4)δ:48.2 (C-1)，69.6 (C-2)，78.2 (C-3)，43.5(C-4)，48.1 (C-5)，19.0 (C-6)，33.7 (C-7)，40.6 (C-8)，48.2 (C-9)，39.1 (C-10)，24.3(C-11)，126.8 (C-12)，139.9 (C-13)，43.3(C-14)，28.7 (C-15)，25.4 (C-16)，47.5 (C-17)，54.2 (C-18)，39.9 (C-19)，40.3 (C-20)，33.6 (C-21)，38.2 (C-22)，66.3 (C-23)，14.2(C-24)，17.8 (C-25)，17.6 (C-26)，23.8 (C-27)，181.7 (C-28)，17.6 (C-29)，21.7 (C-30)。NMR 數(shù)據(jù)與文獻［4］報道基本一致，故化合物2 為2α，3β，23-三 羥 基-12-烯-28-熊 果 酸(2α，3β，23-trihydroxy urs-12-en-28-oic acid)。

化合物3:無色針狀結晶(MeOH)，三氯化鐵-鐵氰化鉀反應陽性，溴甲酚綠反應陽性。EI-MS(m/z):170［M］+，表明其相對分子質量為170。1H-NMR (400 MHz，Methanol-d4) δ:6.98(2H，s，H-2，H-6)。13C-NMR (100 MHz，Methanol-d4)δ:121.8 (C-1)，110.4 (C-2，6)，146.5(C-3，5)，139.4 (C-4)，170.3 (-COOH)。NMR譜數(shù)據(jù)與文獻報道［5］基本一致，故化合物3 為沒食子酸(gallic acid)。

化合物4:無色針狀結晶(MeOH)，溴甲酚綠反應陰性，三氯化鐵-鐵氰化鉀反應陽性。EI-MS(m/z):152［M］+，表明其相對分子質量為152。1H-NMR (400 MHz，Methanol-d4) δ:9.73(1H，s，-CHO)，3.92 (3H，s，-OCH3)，7.43(1H，d，J =7.0 Hz，H-5)，7.39 (1H，d，J =2.0 Hz，H-2)，6.94 (1H，dd，J =7.0 Hz，2.0 Hz，H-6)。13C-NMR (100 MHz，Methanol-d4)δ:111.2 (C-2 )，116.4 (C-5 )，127.8 (C-6 )，130.5 (C-1 )，149.9 (C-3 )，154.6 (C-4 )，193.0 (-CHO)，56.6 (-OCH3)。NMR 數(shù)據(jù)與文獻［6］報道基本一致，故化合物4 為香草醛(vanillin)。

化合物5:無色針狀結晶，三氯化鐵-鐵氰化鉀反應陽性，溴甲酚綠反應陽性。ESI-MS (m/z):167 ［M-H］-，表明其相對分子質量為168。1H-NMR(400 MHz，Methanol-d4)δ:7.44 (1H，d，J =8.0，2.0 Hz，H-6)，7.43 (1H，d，J =2.0 Hz，H-2)，6.92 (1H，d，J = 8.0 Hz，H-5)，3.87(3H，s，-OCH3)。13C-NMR (100 MHz，Methanold4)δ:122.9 (C-1)，112.7 (C-2)，146.6 (C-3)，148.7 (C-4)，113.8 (C-5)，124.6 (C-6)，56.9 (-OCH3)。NMR 譜數(shù)據(jù)與文獻［7］報道基本一致，故化合物5 為香草酸(vanillic acid)。

化合物6:白色片狀結晶(CHCl3)，mp 76 ～78 ℃。鹽酸-鎂粉反應陰性，Molish 反應陰性。1HNMR (400 MHz，DMSO-d6)δ:12.35 (-COOH)，7.34 ～7.22 (5H，m)，3.55 (2H，s，-CH2)。根據(jù)1H-NMR 譜數(shù)據(jù)可推斷化合物6 可能為苯乙酸，TLC 展開后與苯乙酸對照品Rf對照一致，故化合物6 為苯乙酸(phenylethyl acid)。

化合物7:無色針晶(乙醚)，mp 116 ～117℃。EI-MS (m/z):182 ［M+］，表明其相對分子質量為182。1H-NMR (400 MHz，CDCl3)δ:3.76(3H，s，H-9)，3.63 (2H，s，H-7)，6.62 (1H，d，J = 2.5 Hz，H-6)，6.73 (1H，dd，J = 8.5，2.5 Hz，H-4)，6.84 (1H，d，J=8.5，H-3)。13CNMR (100 MHz，CDCl3)δ:121.9 (C-1)，148.8(C-2)，118.5 (C-3)，115.5 (C-4)，149.3 (C-5)，117.7 (C-6)，37.8 (C-7)，173.8 (C-8)，52.8 (C-9)。NMR 數(shù)據(jù)與文獻［8］報道基本一致，故化合物7 為2，5-二羥基苯乙酸甲酯(2，5-dihydroxy methyl phenylacetate)。

化合物8:白色粉末。1H-NMR (400 MHz，Methanol-d4)δ:9.75 (1H，s，H-7)，7.76 (2H，d，J=8.5 Hz，H-2，6)，6.85 (2H，d，J =8.5 Hz，H-3，5)。13C-NMR (100 MHz，Methanol-d4，)δ:130.3 (C-1)，133.5 (C-2，6)，117.0 (C-3，5)，165.4 (C-4)，192.8 (C-7)。NMR 數(shù)據(jù)與文獻［9］報道基本一致，故化合物8 為對羥基苯甲醛(p-hydroxy benzalde -hyde)。

化合物9:無色針晶，mp 130 ～132 ℃。EI-MS(m/z):148 ［M+］，表明其相對分子質量為148。1H-NMR (400 MHz，CDCl3)δ:7.57 (2H，m，H-3＇，H-5＇)，7.43 (3H，m，H-2＇，H-4＇，H-6＇)，6.48 (1H，d，J = 16.0 Hz，H-2)，7.83(1H，d，J=16.2 Hz，H-3)。13C-NMR (100 MHz，CDCl3)δ:172.8 (C-1)，117.6 (C-2)，147.4(C-3)，134.3 (C-1＇)，128.6 (C-2，6＇)，129.3(C-3＇，5＇)，130.2 (C-4＇)。NMR 數(shù) 據(jù) 與 文 獻［10］報道基本一致，TLC 與對照品肉桂酸展開，兩者Rf值一致，同對照品混合后熔點不下降，故化合物9 為肉桂酸(cinnamic acid)。

化合物10:白色無定形粉末(CHCl3)，分子式為C11H12O3，ESI-MS (m/z):191 ［M-H］-，表明其相對分子質量為192。1H-NMR (400 MHz，CDCl3)δ:8.55 (1H，s，5-OH)，7.58 (1H，dd，J = 8.0，1.0 Hz，H-7)，7.33 (1H，t，J = 8.0 Hz，H-8)，7.07 (1H，dd，J =8.0，1.0 Hz，H-6)，4.98 (1H，m，H-4)，3.57 (3H，s，4-OCH3)，2.87 (1H，m，H-2β)，2.63 (1H，m，H-2α)，2.24 (1H，m，H-3β)，2.11 (1H，m，3α)。13C-NMR (100 MHz，CDCl3)δ:196.2 (C-1)，35.6 (C-2)，27.3 (C-3)，80.2 (C-4)，156.3 (C-5)，122.32 (C-6)，129.6 (C-7)，119.3 (C-8)，132.5 (C-9)，126.7 (C-10)，55.3 (C-11)。NMR 數(shù)據(jù)與文獻［11］報道基本一致，故化合物10 為4-甲氧基-5-羥基-1-四氫萘酮(5-hydroxy-4-methoxy-α-tetralone)。

化合物11:紅色針狀結晶。EI-MS (m/z):218［M］+，表明其相對分子質量為218。1H-NMR(400 MHz，CDCl3)δ:6.08 (1H，s，H-3)，7.25(1H，d，J =8.7 Hz，H-6)，7.57 (1H，t，J =8.2，7.7 Hz，H-7)，7.66 (1H，d，J =7.5 Hz，H-8)，4.14 (2H，q，J = 7.0 Hz，H-11)，1.53(3H，t，J = 7.0 Hz)。13C-NMR (100 MHz，CDCl3)δ:179.5 (C-1)，160.6 (C-2)，109.8(C-3)，190.7 (C-4)，161.3 (C-5)，125.1 (C-6)，135.5 (C-7)，119.6 (C-8)，131.3 (C-9)，114.3 (C-10)，65.7 (C-11)，13.9 (C-12)。NMR 數(shù)據(jù)與文獻［12］報道基本一致，故化合物11為5-羥基-2-乙氧基-1，4-萘醌(2-ethoxy-5-hydroxyna phthalene -1，4 -dione)。

化合物12:黃色晶體。ESI-MS (m/z):348［M］-，表明其相對分子質量為348。1H-NMR (400 MHz，CDCl3)δ:11.54 (1H，s，7-OH)，11.51(1H，s，1-OH)，7.70 ～7.55 (2H，m，H-9，10)，7.52 (1H，dd，J = 8.5，7.6 Hz，H-3)，7.24 (1H，dd，J = 7.6，2.0 Hz，H-8)，7.16(1H，dd，J = 7.5，1.0 Hz，H-4)，6.93 (1H，dd，J = 8.5，1.2 Hz，H-2)，4.83 (1H，s，5-OH)，4.24 (1H，dd，J =4.0，1.2 Hz，H-12)，3.02 ～3.07 (2H，m，H-14)。13C-NMR (100 MHz，CDCl3)δ:198.2 (C-13)，188.9 (C-6)，180.5 (C-11)，163.6 (C-1)，162.1 (C-7)，154.5 (C-5a)，148.8 (C-11a)，146.4 (C-4a)，137.4 (C-9)，136.8 (C-3)，132.7 (C-11a)，125.3 (C-8)，120.5 (C-10)，119.5 (C-2)，115.2 (C-6a)，110.6 (C-13a)，82.2 (C-5)，54.2 (C-14)，52.8 (C-12)。NMR 數(shù)據(jù)與文獻［13］報道基本一致，故化合物12 為黃杞醌(Engelharquinone)。

化合物13:黃色針狀晶體，mp 160 ～161 ℃。ESI-MS (m/z):205 ［M +H］+，表明其相對分子質量為204。1H-NMR (400 MHz，CDCl3)δ:3.91(3H，s，OCH3-2)，6.13 (1H，s，H-3)，12.20(1H，s，OH-5)，7.68 (1H，dd，J = 7.5，0.9 Hz，H-8)，7.56 (1H，dd，J =8.2，7.5 Hz，H-7)，7.27 (1H，dd，J =8.2，0.9 Hz，H-6)。13CNMR (100 MHz，CDCl3)δ:179.2 (C-1)，190.9(C-4)，161.2 (C-2)，161.2 (C-5)，125.1 (C-6)，135.5 (C-7)，119.6 (C-8)，109.4 (C-3)，114.1 (C-10)，131.2 (C-9)，56.7 (OCH3)。NMR 數(shù)據(jù)與文獻［13］報道基本一致，故化合物為2-甲氧基胡桃醌(2-methoxyjuglone)。

化合物14:白色針晶，mp 139 ～141 ℃，Liebermann-Burchard 反應陽性。EI-MS (m/z):414［M］+，表明其相對分子質量為414。1H-NMR(400 MHz，CDCl3)δ:0.69 (3H，s，H-18)，0.82 (3H，t，J =7.0 Hz，H-29)，0.84 (3H，d，J = 6.8 Hz，H-26)，0.86 (3H，d，J = 7.2 Hz，H-21)，0.93 (3H，d，J =6.8 Hz，H-27)，1.02(3H，s，H-19)，3.55 (1H，m，H-3)，5.37(1H，d，J =5.2 Hz，H-6)。13C-NMR (100 MHz，CDCl3)δ:37.3 (C-1)，26.2 (C-2)，71.9 (C-3)，42.5 (C-4)，140.9 (C-5)，121.8 (C-6)，33.7 (C-7)，31.7 (C-8)，50.2 (C-9)，36.6(C-10)，21.3 (C-11)，39.9 (C-12)，42.2 (C-13)，56.6 (C-14)，24.2 (C-15)，28.4 (C-16)，56.2 (C-17)，19.6 (C-18)，11.8 (C-19)，36.3(C-20)，18.7 (C-21)，31.8 (C-22)，28.4 (C-23)，45.7 (C-24)，29.4 (C-25)，12.2 (C-26)，19.9 (C-27)，23.1 (C-28)，19.2 (C-29)。NMR數(shù)據(jù)與文獻［14］報道基本一致，且在薄層板上與β-谷甾醇的對照品對照Rf值相同，樣品與對照品混合熔點測定不下降，故化合物為β-谷甾醇(βsitosterol)。

化合物15:白色粉末，Liebermann-Burchard反應陽性，Molish 反應陽性。ESI-MS (m/z):575［M-H］-，表明其相對分子質量為576。IR (KBr)譜顯示有羥基(3 450 cm-1)。TLC 與對照品胡蘿卜苷展開，兩者Rf值一致，同對照品混合后熔點不下降，故化合物15 為胡蘿卜苷(daucosterol)。

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