血竭超微細粉和普通細粉在六白白疕巴布劑中體外透皮釋藥研究

董希光　王超　張偉　于爽　孫晶

[摘要] 目的 對比研究血竭超微細粉和普通細粉在六白白疕巴布劑中主要藥效成分血竭素的體外透皮釋藥情況，為該巴布劑制備工藝研究提供參考依據(jù)。 方法 使用藥物透皮擴散實驗儀，以色譜柱為Diamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）、流動相為乙腈-磷酸二氫鈉溶液（0.05 mol/L）（50∶50）、檢測波長440 nm、柱溫40℃、流速1 mL/min的高效液相色譜法（HPLC）色譜條件，檢測兩種巴布劑樣品中血竭素12 h內(nèi)透過離體兔皮釋藥情況。 結(jié)果 HPLC檢測方法顯示血竭素峰分離效果良好，穩(wěn)定性、精密度和加樣回收試驗的RSD分別為1.14%、0.92%、0.89%，符合含量測定要求；兩種樣品巴布劑1～2 h內(nèi)均為快速透皮釋藥階段，2～12 h為平穩(wěn)緩慢透皮釋藥階段。其中超細粉樣品巴布劑2、4、12 h內(nèi)血竭素累積透皮釋藥率分別為29.12%、38.60%和59.36%，而普通細粉樣品巴布劑在同一時間段僅為16.74%、21.77%和44.28%。在考察的12 h內(nèi)，超微細粉樣品巴布劑血竭素累積透皮釋藥率高于普通細粉樣品巴布劑15%左右。 結(jié)論 本含量測定方法良好，以血竭藥物超微細粉作為該巴布劑的填充劑，血竭素體外透皮釋藥效果明顯優(yōu)于以普通細粉作為巴布劑填充劑的樣品巴布劑。

[關(guān)鍵詞] 超微細粉；普通細粉；血竭素；高效液相色譜法；含量測定；透皮釋藥

[中圖分類號] R285.5 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2014）09（b）-0004-05

六白白疕巴布劑是以山東省青島市海慈醫(yī)療集團制劑實驗室（以下簡稱“我室”）中藥制劑六白膏進行劑型改革，研制而成的一種新型外用中藥巴布制劑。前期曾就組方藥物提取和主要藥效成分甘草酸體外離體兔皮透皮釋藥進行實驗研究[1-2]。本實驗對六白白疕巴布劑組方藥物的另一種主要藥物血竭制成超微細粉和普通細粉兩種粉體樣品巴布劑中血竭素不同時段的離體兔皮體外透皮釋藥情況進行對比研究，為該巴布劑制備工藝提供試驗參數(shù)?，F(xiàn)報道如下：

1 儀器與材料

RYJ-6B型藥物透皮擴散實驗儀（上海），安捷倫1100高效液相色譜系統(tǒng)（美國Agilen公司）；DJ-10A電動粉碎機（上海）；WKZ-10型超微粉碎破壁機（濰坊產(chǎn)）；Rise-2002型激光粒度分析儀（濟南）。

血竭素高氯酸鹽對照品（含量測定用，中國藥品生物制品檢定所，批號：110811-200704，）；乙腈（色譜純，天津凱信化學(xué)試劑公司）；水為重蒸水；其他試劑均為分析純。

健康白色家兔，體重（1.85±0.16）kg（市售）；藥材取自我室中藥房。經(jīng)青島市藥檢所中藥科吳愛英主任藥師鑒定為麒麟竭Daemonorops draco Bl.樹脂加工品。巴布劑樣品由我室制備。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品巴布劑制備

按不含血竭的處方比例取白鮮皮、甘草等藥材飲片225 g，用50%乙醇制成醇提水沉液200 mL，分別用提取液100、40、60 mL，將阿拉伯膠30 g、聚乙烯醇10 g、西黃耆膠20 g進行浸泡，水浴加熱使其溶脹，分別制成透明膠狀液；另將將甘油20 mL、平均粒徑25 μm血竭超微細粉3 g加到乳缽中研勻；再將阿拉伯膠透明膠狀液、西黃耆膠透明膠狀液、聚乙烯醇透明膠狀液依次倒入乳缽中研勻，待稍冷，趁溫時均勻涂布于無紡布上，厚度約為0.70 mm，置40℃烘箱下烘0.5 h，蓋上防粘層，制成每克含血竭30 mg的超微細粉樣品巴布劑。

另取平均粒徑為120 μm的普通細粉，按上述相同方法制成每克含血竭30 mg的普通細粉樣品巴布劑。

2.2 血竭素含量測定方法

2.2.1 色譜條件 色譜柱為Diamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為乙腈-磷酸二氫鈉溶液（0.05 mol/L）（50∶50）；檢測波長為440 nm；柱溫為40℃；流速為1 mL/min；進樣量為10 μL。理論板數(shù)按血竭素峰計算不低于4000。

2.2.2 對照品儲備液制備 精密稱取血竭素高氯酸鹽對照品0.9615 mg，置于10 mL容量瓶中，加入3%磷酸甲醇溶液使溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為96.15 μg/mL的對照品儲備液。

2.2.3 供試品溶液制備 揭取樣品巴布劑膏體約2 g，剪碎，精密稱重，置具塞錐瓶中，加入20 mL氨試液將膏體浸潤、溶脹、堿化，三氯甲烷密塞振搖提取2次，每次用量10 mL，每次提取時間3 min。合并三氯甲烷提取液，并用三氯甲烷定容至50.0 mL。取提取液5.0 mL，揮干，殘渣用0.3%磷酸甲醇溶液溶解定容至5.0 mL，搖勻，微孔濾膜（0.45 μm）過濾，取續(xù)濾液，即為供試品溶液。

2.2.4 陰性對照品溶液制備 照處方比例和制備工藝制備不含血竭的陰性對照樣品，按供試品溶液制備方法制成陰性對照溶液。按上述色譜條件進樣，記錄色譜圖，結(jié)果表明陰性對照溶液對血竭素測定無干擾。色譜圖見圖1～3。

2.2.5 線性關(guān)系考察 分別精密量取濃度為96.15 μg/mL的對照品儲備液0.2、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 mL，置于10 mL容量瓶中，加入3%磷酸甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別制成濃度為1.923、3.846、7.692、11.538、15.384、19.230 μg/mL的對照品溶液，按“2.1”項下色譜條件，測定峰面積。以峰面積積分值（Y）為縱坐標，進樣濃度（X）為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方程為Y=2.2651×104X+2.8973×103（r=0.9974）。結(jié)果表明，血竭素進樣濃度在1.923～19.23 μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液（批號：090612），分別在0、1、2、4、6 h分別精密吸取10 μL，依法測定峰面積積分值RSD為1.14%，表明供試品溶液在室溫下放置6 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.7 精密度試驗 精密吸取濃度為7.692 μg/mL的對照品溶液10 μL，依法連續(xù)測定5次，峰面積積值RSD為0.92%。說明儀器精密度較好。

2.2.8 加樣回收率試驗 取5份已知含量濃度為9.22 μg/mL的同一批樣品巴布劑溶液（批號：090612）0.5 mL，加到1.0 mL的容量瓶中，分別精密加入7.692 μg/mL對照品溶液0、0.1、0.2、0.3、0.4 mL，0.3%磷酸甲醇溶液定容，混勻后按“2.1”項下色譜條件依法測定、計算回收率。平均加樣回收率分別為97.846%，RSD為0.89%（n=5）。加樣回收率試驗表明，所建方法加樣回收率高，符合含量測定的要求。結(jié)果見表1。

結(jié)果表明，在選定的色譜條件下，采用適量氨試液浸潤、溶脹巴布劑膏體，并堿化解離組方藥物中的血竭素甘草酸，再用三氯甲烷提取血竭素，目標成分分離度高，穩(wěn)定性好，儀器精密度和加樣回收率高，其他成分無干擾，含量測定準確性，可以作為六白白疕巴布劑血竭素含量測定方法。

2.3 血竭素提取方法考察

2.3.1正交優(yōu)化實驗 由于六白白疕巴布劑組方藥物中的甘草所含甘草酸，易與血竭素形成鹽，影響血竭素在三氯甲烷提取液中轉(zhuǎn)溶。實驗用適量氨試液浸潤溶解巴布膏膏體，同時堿化、游離血竭素的甘草酸鹽，以提高血竭素在三氯甲烷等溶劑中的提取轉(zhuǎn)移率。在單因素考察的基礎(chǔ)上，用20 mL氨試液將約2 g巴布劑膏體浸潤并解離血竭素甘草酸鹽，對三氯甲烷的提取次數(shù)（A）、溶劑用量（B）和提取時間（C）三個因素及三個因素的交互作用進行L8（27）試驗方案設(shè)計。試驗方案及實驗結(jié)果見表2，方差分析見表3。

2.3.2 影響因素正交分析 直觀分析表明，因素影響大小順序為B>C>A，最佳工藝為A2B2C2；方差分析顯示提取次數(shù)（A）、溶劑用量（B）和提取時間（C）三個因素對實驗結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05或P<0.01），而三個因素間的交互作用對試驗結(jié)果差異無統(tǒng)計學(xué)意義。對最佳工藝A2B2C2（即試驗8）的殘留膏體測定血竭素成分，結(jié)果未能檢測出血竭素成分，表明此法血竭素基本提取完整，可以作為樣品含量測定的提取檢測方法，即約2 g膏體量，用20 mL氨試液浸潤、溶解、堿化，三氯甲烷密塞振搖提取2次，每次用量15 mL，每次提取時間為3 min。

2.3.3 樣品巴布劑含量測定 取超微粉樣品巴布劑三批樣品，批號分別為20130618、20130622、20130627，按“2.3”項下優(yōu)化方案及“2.2.3”項下制備方法，即約2 g膏體量，用20 mL氨試液浸潤、溶解、堿化，三氯甲烷密塞振搖提取2次，每次用量15 mL，每次提取時間3 min。合并三氯甲烷提取液，并用三氯甲烷定容至50.0 mL。取提取液5.0 mL，揮干，殘渣用0.3%磷酸甲醇溶液溶解定容至5.0 mL，搖勻，微孔濾膜（0.45 μm）過濾，取續(xù)濾液，測定血竭素含量，每批樣品重復(fù)測定3 次。測定結(jié)果見表4。三批樣品3次測定的RSD分別為1.34%、0.59%和0.40%，表明重復(fù)性好；三批樣品三次測定均值的RSD為0.81%。同法測定普通粉樣品巴布劑三次樣品（批號分別為20130708、20130716、20130724）血竭素平均含量。測定結(jié)果見表5。三批樣品3次測定的RSD分別為0.52%、0.42%和0.45%，表明重復(fù)性好；三批樣品均值的RSD為0.36%。

2.4 透皮釋藥實驗

2.4.1 離體兔皮的制備 將健康白色家兔腹部皮毛用脫毛劑脫毛，靜養(yǎng)24 h后處死，剝?nèi)「共科つw，除盡皮下黏膜及脂肪組織，用生理鹽水洗凈，置生理鹽水中低溫冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>

2.4.2 兔皮安裝 將兔皮固定于樣品室與接受室之間， 接受池中加入（37±1）℃保溫的生理鹽（釋藥接受液），真皮一側(cè)與接受液充分接觸，排凈空氣；給藥室兔皮角質(zhì)層一側(cè)用吸水濾紙吸干水；開動電磁攪拌器保持恒速攪拌（約200 r/min），維持接受池的動態(tài)環(huán)境。

2.4.3 釋藥液制備 取巴布劑樣品，剪成直徑2 cm左右的圓形小塊，揭去防粘層，連帶背襯布精密稱重，貼敷于兔皮角質(zhì)層并上夾固定，分別于0.5、1、2、4、8、12、16、24 h共8個時間段從接受池側(cè)口中精密吸取0.05 mL釋藥液，揮干后用3%磷酸甲醇0.5 mL溶解，移至1 mL容量瓶中，再加入濃度為96.15 μg/mL對照品儲備液0.4 mL，加3%磷酸甲醇溶液定容至1.0 mL，混勻，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾，制成釋藥液。每次取樣后立即從接受池側(cè)口補加生理鹽水，排凈接受池氣泡后繼續(xù)實驗。實驗結(jié)束后將帶膏背襯布清水洗凈膏體，背襯布干燥稱重。折算樣品膏體血竭素含量（mg/g）。依法對兩種樣品的各3個批次進行試驗。

2.4.4 累積釋藥量測定 將釋藥液按“2.2.1”項下色譜條件測定血竭素含量。每一時段釋藥液共測3次，取平均值。按不同時段累積釋藥量（μg）=[實際測定值濃度-外加血竭素濃度（96.15 μg/mL×0.4 mL）]/釋藥液吸取量（0.05 mL）×接受池容量（mL），累積釋藥率（%）=累積釋藥量（μg）/[樣品巴布劑凈重（g）×每克樣品巴布劑血竭素含量（μg/g）]×100%，并與相應(yīng)樣品膏體血竭素含量進行比較，計算不同時段相應(yīng)樣品血竭素釋藥率。

2.4.5 實驗結(jié)果 三批次超微粉樣品巴布劑（批號：20130618、20130622、20130627）在0.5、1、2、4、8、12、16、24 h釋藥率3次測定平均值依次為7.24%、18.67%、29.12%、38.60%、49.34%、53.88%、57.17%、59.36%，而三批次普通粉樣品巴布劑（批號：20140708、20140716、20140724）在相同時段釋藥率三次測定平均值依次為1.27%、5.84%、16.73%、21.77%、29.29%、34.82%、38.93%、44.28%。以釋藥率為縱坐標，時間為橫坐標做曲線圖，結(jié)果見圖4。

從累積透皮釋藥曲線分析，兩種樣品巴布劑1～2 h內(nèi)均為快速透皮釋藥階段，2～12 h為平穩(wěn)緩慢透皮釋藥過程，其中超細粉樣品巴布劑2 h和4 h內(nèi)血竭素累積透皮釋藥率與普通粉樣品巴布劑6 h和10 h內(nèi)相當，12 h內(nèi)累積透皮釋藥率超微細粉樣品巴布劑高于普通細粉樣品巴布劑15%左右。超微粉樣品巴布劑均明顯優(yōu)于普通粉樣品巴布劑。

3 討論

3.1 關(guān)于流動相的選擇

按照《中國藥典》2010年版中血竭素的的含量測定方法進行操作，參考有關(guān)文獻報道，比較了乙腈-0.05 mol/L磷酸二氫鈉溶液（35∶65、40∶60、45∶55、50∶50）多種不同配比[3-8]，結(jié)果乙腈-0.05 mol/L磷酸二氫鈉溶液（50∶50）作為流動相時能夠?qū)⒀咚嘏c雜質(zhì)峰完全分離，出峰時間適當，峰形好。

3.2 關(guān)于血竭素定容方法

血竭素為色原酮類化合物，性質(zhì)不穩(wěn)定，見光易分解，溶液放置顏色會逐漸加深。因此待測樣品溶液制備后立即置棕色量瓶中，用3%磷酸甲醇替代《中國藥典》2010年版中的甲醇進行定容，使樣品中的血竭素形成血竭素的磷酸鹽，增強其穩(wěn)定性[9-10]。穩(wěn)定性試驗考察結(jié)果表明，同一供試品溶液在0、1、2、4、6 h時峰面積積分值RSD為1.14%，表明血竭素的磷酸鹽在甲醇溶液中6 h內(nèi)室溫下放置是穩(wěn)定的。

3.3 關(guān)于供試品溶液制備

巴布膏劑含量測定難點在于排除基質(zhì)的干擾，同時最大限度提取轉(zhuǎn)移目標成分。由于六白白疕巴布劑組方藥物中的甘草所含甘草酸易與血竭素形成鹽，影響血竭素在脂溶性溶劑中的溶解和轉(zhuǎn)移。參考文獻報道[11]，對供試品溶液提取檢測方法進行考察。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，一定量氨試液既可浸潤溶解巴布膏膏體，同時又能堿化、游離血竭素的甘草酸鹽，減少其他水溶性成分和基質(zhì)的影響。提高血竭素在三氯甲烷等溶劑中的提取轉(zhuǎn)移率，實驗結(jié)果表明，用膏體10倍的氨試液先浸潤溶脹巴布膏體，使血竭素甘草酸鹽在堿性環(huán)境下游離，再用三氯甲烷提取，可以增加血竭素在三氯甲烷相中的溶解轉(zhuǎn)溶，殘留膏體未能檢測出血竭素成分。表明此法可以基本提取轉(zhuǎn)溶血竭素成分，含量測定精確性高。

3.4 關(guān)于超微粉碎

中藥材超微粉碎后，可使大部分藥材細胞壁膜破裂，有效成分不必經(jīng)過壁、膜的釋放過程，直接暴露在外，有利于提高有效成分的溶出和透皮吸收效果[12-18]；在外用貼膏劑中，由于超微細粉的粒徑小，一方面易于從基質(zhì)材料中滲透出來，另一方面填充在基質(zhì)中可以減少基質(zhì)之間的相互作用力，有利于成分釋放，提高釋藥速率[13]。本項研究中，血竭作為組方中的貴重藥，在巴布劑劑型研究中替代硅藻土等用作填充劑，可以提高巴布劑藥物成分相對比例。本研究結(jié)果表明，以血竭素不同時段體外透皮釋藥量為指標，超微細粉明顯優(yōu)于普通細粉，與有關(guān)研究報道等[13-18]研究結(jié)論基本一致，為中藥以超微粉作為填充劑的外用貼膏劑制劑研究提供了一個新的思路。

[參考文獻]

[1] 張偉，張云麗，楊一丁，等.六白白疕巴布劑藥物提取正交實驗研究[J].齊魯藥事，2010，29（11）：645-646.

[2] 張偉，高文勇，張云麗，等.六白白疕巴布劑經(jīng)皮吸收研究[J].齊魯藥事，2010，29（12）：710-711.

[3] 李小曲.HPLC法測定骨傷跌打止痛膠囊中血竭素的含量[J].中國藥師，2014，17（2）：343-345.

[4] 劉長龍，高鵬.提取溶劑酸度對血竭及玉紅生肌凝膠中血竭素含量的影響[J].遼寧中醫(yī)雜志，2013，40（3）：520-522.

[5] 湯小燕，陳越，李炯.HPLC測定神農(nóng)鎮(zhèn)痛膏中血竭素的含量[J].中國執(zhí)業(yè)藥師，2014，（4）：14-16.

[6] 李長達.安陽固本膏中血竭素的HPLC含量測定[J].中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2012，6（19）：119-120.

[7] 國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：133.

[8] 楊瑞瑞，李雪，喬蓉霞，等.展筋活血散質(zhì)量標準研究[J].中國藥品標準，2013，14（4）：251-255.

[9] 胡世強，張偉.《中國藥典》2010年版血竭中血竭素含量測定提取方法的改進[J].中國藥品標準，2013，14（1）：36-37.

[10] 陳振振，張靈英，李莉，等.HPLC法測定創(chuàng)傷愈合藥噴霧劑中血竭素的含量[J].中國獸藥雜志，2012，46（10）：24-26，35.

[11] 陳佳，孫磊，金紅宇，等.HPLC法測定薄荷護表膏中血竭素的含量[J].中國藥事，2011，25（3）：271-272.

[12] 鹿麗麗，蕭偉，徐連明，等.不同粒徑龍血竭粉的物理性質(zhì)及體外溶出度比較[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2013，19（10）：14-16.

[13] 胡琴，孫娥，張振海.不同粒徑血竭粉體對ZJHX橡膠膏透皮吸收和黏附性的影響[J].中國中藥雜志，2012，37（23）：3549-3552.

[14] 卓丹如，闕慧卿，章寧，等.不同粉碎度野生西洋參人參皂苷Rb1的體外溶出度研究[J].藥物評價研究，2013， 36（5）：374-376.

[15] 張海英，趙泳波.丹參超微粉碎前后丹參酮ⅡA的溶出行為比較[J].光譜實驗室，2013，30（5）：2335-2338.

[16] 熊慧，郭舟，趙靜文.梔子超微粉與細粉中梔子苷的體外溶出度比較[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2013，19（21）：53-55.

[17] 劉莉，劉強，鐘海巖.丁香普通粉與超微粉中丁香酚的含量及對小鼠腸運動作用的研究[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2010，16（8）：128.

[18] 俞忠明，戴詩文，壽旦，等.超微粉碎工藝對血竭透皮吸收的影響研究[J].浙江中醫(yī)雜志，2008，43（6）：359-360.

（收稿日期：2014-05-24 本文編輯：衛(wèi) 軻）

從累積透皮釋藥曲線分析，兩種樣品巴布劑1～2 h內(nèi)均為快速透皮釋藥階段，2～12 h為平穩(wěn)緩慢透皮釋藥過程，其中超細粉樣品巴布劑2 h和4 h內(nèi)血竭素累積透皮釋藥率與普通粉樣品巴布劑6 h和10 h內(nèi)相當，12 h內(nèi)累積透皮釋藥率超微細粉樣品巴布劑高于普通細粉樣品巴布劑15%左右。超微粉樣品巴布劑均明顯優(yōu)于普通粉樣品巴布劑。

3 討論

3.1 關(guān)于流動相的選擇

按照《中國藥典》2010年版中血竭素的的含量測定方法進行操作，參考有關(guān)文獻報道，比較了乙腈-0.05 mol/L磷酸二氫鈉溶液（35∶65、40∶60、45∶55、50∶50）多種不同配比[3-8]，結(jié)果乙腈-0.05 mol/L磷酸二氫鈉溶液（50∶50）作為流動相時能夠?qū)⒀咚嘏c雜質(zhì)峰完全分離，出峰時間適當，峰形好。

3.2 關(guān)于血竭素定容方法

血竭素為色原酮類化合物，性質(zhì)不穩(wěn)定，見光易分解，溶液放置顏色會逐漸加深。因此待測樣品溶液制備后立即置棕色量瓶中，用3%磷酸甲醇替代《中國藥典》2010年版中的甲醇進行定容，使樣品中的血竭素形成血竭素的磷酸鹽，增強其穩(wěn)定性[9-10]。穩(wěn)定性試驗考察結(jié)果表明，同一供試品溶液在0、1、2、4、6 h時峰面積積分值RSD為1.14%，表明血竭素的磷酸鹽在甲醇溶液中6 h內(nèi)室溫下放置是穩(wěn)定的。

3.3 關(guān)于供試品溶液制備

巴布膏劑含量測定難點在于排除基質(zhì)的干擾，同時最大限度提取轉(zhuǎn)移目標成分。由于六白白疕巴布劑組方藥物中的甘草所含甘草酸易與血竭素形成鹽，影響血竭素在脂溶性溶劑中的溶解和轉(zhuǎn)移。參考文獻報道[11]，對供試品溶液提取檢測方法進行考察。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，一定量氨試液既可浸潤溶解巴布膏膏體，同時又能堿化、游離血竭素的甘草酸鹽，減少其他水溶性成分和基質(zhì)的影響。提高血竭素在三氯甲烷等溶劑中的提取轉(zhuǎn)移率，實驗結(jié)果表明，用膏體10倍的氨試液先浸潤溶脹巴布膏體，使血竭素甘草酸鹽在堿性環(huán)境下游離，再用三氯甲烷提取，可以增加血竭素在三氯甲烷相中的溶解轉(zhuǎn)溶，殘留膏體未能檢測出血竭素成分。表明此法可以基本提取轉(zhuǎn)溶血竭素成分，含量測定精確性高。

3.4 關(guān)于超微粉碎

中藥材超微粉碎后，可使大部分藥材細胞壁膜破裂，有效成分不必經(jīng)過壁、膜的釋放過程，直接暴露在外，有利于提高有效成分的溶出和透皮吸收效果[12-18]；在外用貼膏劑中，由于超微細粉的粒徑小，一方面易于從基質(zhì)材料中滲透出來，另一方面填充在基質(zhì)中可以減少基質(zhì)之間的相互作用力，有利于成分釋放，提高釋藥速率[13]。本項研究中，血竭作為組方中的貴重藥，在巴布劑劑型研究中替代硅藻土等用作填充劑，可以提高巴布劑藥物成分相對比例。本研究結(jié)果表明，以血竭素不同時段體外透皮釋藥量為指標，超微細粉明顯優(yōu)于普通細粉，與有關(guān)研究報道等[13-18]研究結(jié)論基本一致，為中藥以超微粉作為填充劑的外用貼膏劑制劑研究提供了一個新的思路。

[參考文獻]

[1] 張偉，張云麗，楊一丁，等.六白白疕巴布劑藥物提取正交實驗研究[J].齊魯藥事，2010，29（11）：645-646.

[2] 張偉，高文勇，張云麗，等.六白白疕巴布劑經(jīng)皮吸收研究[J].齊魯藥事，2010，29（12）：710-711.

[3] 李小曲.HPLC法測定骨傷跌打止痛膠囊中血竭素的含量[J].中國藥師，2014，17（2）：343-345.

[4] 劉長龍，高鵬.提取溶劑酸度對血竭及玉紅生肌凝膠中血竭素含量的影響[J].遼寧中醫(yī)雜志，2013，40（3）：520-522.

[5] 湯小燕，陳越，李炯.HPLC測定神農(nóng)鎮(zhèn)痛膏中血竭素的含量[J].中國執(zhí)業(yè)藥師，2014，（4）：14-16.

[6] 李長達.安陽固本膏中血竭素的HPLC含量測定[J].中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2012，6（19）：119-120.

[7] 國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：133.

[8] 楊瑞瑞，李雪，喬蓉霞，等.展筋活血散質(zhì)量標準研究[J].中國藥品標準，2013，14（4）：251-255.

[9] 胡世強，張偉.《中國藥典》2010年版血竭中血竭素含量測定提取方法的改進[J].中國藥品標準，2013，14（1）：36-37.

[10] 陳振振，張靈英，李莉，等.HPLC法測定創(chuàng)傷愈合藥噴霧劑中血竭素的含量[J].中國獸藥雜志，2012，46（10）：24-26，35.

[11] 陳佳，孫磊，金紅宇，等.HPLC法測定薄荷護表膏中血竭素的含量[J].中國藥事，2011，25（3）：271-272.

[12] 鹿麗麗，蕭偉，徐連明，等.不同粒徑龍血竭粉的物理性質(zhì)及體外溶出度比較[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2013，19（10）：14-16.

[13] 胡琴，孫娥，張振海.不同粒徑血竭粉體對ZJHX橡膠膏透皮吸收和黏附性的影響[J].中國中藥雜志，2012，37（23）：3549-3552.

[14] 卓丹如，闕慧卿，章寧，等.不同粉碎度野生西洋參人參皂苷Rb1的體外溶出度研究[J].藥物評價研究，2013， 36（5）：374-376.

[15] 張海英，趙泳波.丹參超微粉碎前后丹參酮ⅡA的溶出行為比較[J].光譜實驗室，2013，30（5）：2335-2338.

[16] 熊慧，郭舟，趙靜文.梔子超微粉與細粉中梔子苷的體外溶出度比較[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2013，19（21）：53-55.

[17] 劉莉，劉強，鐘海巖.丁香普通粉與超微粉中丁香酚的含量及對小鼠腸運動作用的研究[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2010，16（8）：128.

[18] 俞忠明，戴詩文，壽旦，等.超微粉碎工藝對血竭透皮吸收的影響研究[J].浙江中醫(yī)雜志，2008，43（6）：359-360.

（收稿日期：2014-05-24 本文編輯：衛(wèi) 軻）

從累積透皮釋藥曲線分析，兩種樣品巴布劑1～2 h內(nèi)均為快速透皮釋藥階段，2～12 h為平穩(wěn)緩慢透皮釋藥過程，其中超細粉樣品巴布劑2 h和4 h內(nèi)血竭素累積透皮釋藥率與普通粉樣品巴布劑6 h和10 h內(nèi)相當，12 h內(nèi)累積透皮釋藥率超微細粉樣品巴布劑高于普通細粉樣品巴布劑15%左右。超微粉樣品巴布劑均明顯優(yōu)于普通粉樣品巴布劑。

3 討論

3.1 關(guān)于流動相的選擇

按照《中國藥典》2010年版中血竭素的的含量測定方法進行操作，參考有關(guān)文獻報道，比較了乙腈-0.05 mol/L磷酸二氫鈉溶液（35∶65、40∶60、45∶55、50∶50）多種不同配比[3-8]，結(jié)果乙腈-0.05 mol/L磷酸二氫鈉溶液（50∶50）作為流動相時能夠?qū)⒀咚嘏c雜質(zhì)峰完全分離，出峰時間適當，峰形好。

3.2 關(guān)于血竭素定容方法

血竭素為色原酮類化合物，性質(zhì)不穩(wěn)定，見光易分解，溶液放置顏色會逐漸加深。因此待測樣品溶液制備后立即置棕色量瓶中，用3%磷酸甲醇替代《中國藥典》2010年版中的甲醇進行定容，使樣品中的血竭素形成血竭素的磷酸鹽，增強其穩(wěn)定性[9-10]。穩(wěn)定性試驗考察結(jié)果表明，同一供試品溶液在0、1、2、4、6 h時峰面積積分值RSD為1.14%，表明血竭素的磷酸鹽在甲醇溶液中6 h內(nèi)室溫下放置是穩(wěn)定的。

3.3 關(guān)于供試品溶液制備

巴布膏劑含量測定難點在于排除基質(zhì)的干擾，同時最大限度提取轉(zhuǎn)移目標成分。由于六白白疕巴布劑組方藥物中的甘草所含甘草酸易與血竭素形成鹽，影響血竭素在脂溶性溶劑中的溶解和轉(zhuǎn)移。參考文獻報道[11]，對供試品溶液提取檢測方法進行考察。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，一定量氨試液既可浸潤溶解巴布膏膏體，同時又能堿化、游離血竭素的甘草酸鹽，減少其他水溶性成分和基質(zhì)的影響。提高血竭素在三氯甲烷等溶劑中的提取轉(zhuǎn)移率，實驗結(jié)果表明，用膏體10倍的氨試液先浸潤溶脹巴布膏體，使血竭素甘草酸鹽在堿性環(huán)境下游離，再用三氯甲烷提取，可以增加血竭素在三氯甲烷相中的溶解轉(zhuǎn)溶，殘留膏體未能檢測出血竭素成分。表明此法可以基本提取轉(zhuǎn)溶血竭素成分，含量測定精確性高。

3.4 關(guān)于超微粉碎

中藥材超微粉碎后，可使大部分藥材細胞壁膜破裂，有效成分不必經(jīng)過壁、膜的釋放過程，直接暴露在外，有利于提高有效成分的溶出和透皮吸收效果[12-18]；在外用貼膏劑中，由于超微細粉的粒徑小，一方面易于從基質(zhì)材料中滲透出來，另一方面填充在基質(zhì)中可以減少基質(zhì)之間的相互作用力，有利于成分釋放，提高釋藥速率[13]。本項研究中，血竭作為組方中的貴重藥，在巴布劑劑型研究中替代硅藻土等用作填充劑，可以提高巴布劑藥物成分相對比例。本研究結(jié)果表明，以血竭素不同時段體外透皮釋藥量為指標，超微細粉明顯優(yōu)于普通細粉，與有關(guān)研究報道等[13-18]研究結(jié)論基本一致，為中藥以超微粉作為填充劑的外用貼膏劑制劑研究提供了一個新的思路。

[參考文獻]

[1] 張偉，張云麗，楊一丁，等.六白白疕巴布劑藥物提取正交實驗研究[J].齊魯藥事，2010，29（11）：645-646.

[2] 張偉，高文勇，張云麗，等.六白白疕巴布劑經(jīng)皮吸收研究[J].齊魯藥事，2010，29（12）：710-711.

[3] 李小曲.HPLC法測定骨傷跌打止痛膠囊中血竭素的含量[J].中國藥師，2014，17（2）：343-345.

[4] 劉長龍，高鵬.提取溶劑酸度對血竭及玉紅生肌凝膠中血竭素含量的影響[J].遼寧中醫(yī)雜志，2013，40（3）：520-522.

[5] 湯小燕，陳越，李炯.HPLC測定神農(nóng)鎮(zhèn)痛膏中血竭素的含量[J].中國執(zhí)業(yè)藥師，2014，（4）：14-16.

[6] 李長達.安陽固本膏中血竭素的HPLC含量測定[J].中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2012，6（19）：119-120.

[7] 國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：133.

[8] 楊瑞瑞，李雪，喬蓉霞，等.展筋活血散質(zhì)量標準研究[J].中國藥品標準，2013，14（4）：251-255.

[9] 胡世強，張偉.《中國藥典》2010年版血竭中血竭素含量測定提取方法的改進[J].中國藥品標準，2013，14（1）：36-37.

[10] 陳振振，張靈英，李莉，等.HPLC法測定創(chuàng)傷愈合藥噴霧劑中血竭素的含量[J].中國獸藥雜志，2012，46（10）：24-26，35.

[11] 陳佳，孫磊，金紅宇，等.HPLC法測定薄荷護表膏中血竭素的含量[J].中國藥事，2011，25（3）：271-272.

[12] 鹿麗麗，蕭偉，徐連明，等.不同粒徑龍血竭粉的物理性質(zhì)及體外溶出度比較[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2013，19（10）：14-16.

[13] 胡琴，孫娥，張振海.不同粒徑血竭粉體對ZJHX橡膠膏透皮吸收和黏附性的影響[J].中國中藥雜志，2012，37（23）：3549-3552.

[14] 卓丹如，闕慧卿，章寧，等.不同粉碎度野生西洋參人參皂苷Rb1的體外溶出度研究[J].藥物評價研究，2013， 36（5）：374-376.

[15] 張海英，趙泳波.丹參超微粉碎前后丹參酮ⅡA的溶出行為比較[J].光譜實驗室，2013，30（5）：2335-2338.

[16] 熊慧，郭舟，趙靜文.梔子超微粉與細粉中梔子苷的體外溶出度比較[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2013，19（21）：53-55.

[17] 劉莉，劉強，鐘海巖.丁香普通粉與超微粉中丁香酚的含量及對小鼠腸運動作用的研究[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2010，16（8）：128.

[18] 俞忠明，戴詩文，壽旦，等.超微粉碎工藝對血竭透皮吸收的影響研究[J].浙江中醫(yī)雜志，2008，43（6）：359-360.

（收稿日期：2014-05-24 本文編輯：衛(wèi) 軻）