加巴噴丁對(duì)骨癌痛模型大鼠的鎮(zhèn)痛作用及機(jī)制研究

張瑩，王志國(guó)，孫丹丹，歐陽(yáng)竟鋒，趙小亮，王丹巧，李濤，崔悅，牛曉紅

（中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院 醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心，北京 100700）

加巴噴丁對(duì)骨癌痛模型大鼠的鎮(zhèn)痛作用及機(jī)制研究

張瑩，王志國(guó)，孫丹丹，歐陽(yáng)竟鋒，趙小亮，王丹巧Δ，李濤，崔悅，牛曉紅

（中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院 醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心，北京 100700）

目的研究加巴噴丁對(duì)Walker-256乳腺癌細(xì)胞構(gòu)建的大鼠脛骨轉(zhuǎn)移性癌痛模型的鎮(zhèn)痛作用及其機(jī)制。方法雌性wistar大鼠30只，隨機(jī)分為假手術(shù)組（sham）、模型組（model）和加巴噴丁組（GBP，100mg／kg），每組10只；分別進(jìn)行操作對(duì)照和脛骨轉(zhuǎn)移性癌痛造模手術(shù)。以機(jī)械痛縮足域值和影像學(xué)觀察作為大鼠疼痛行為學(xué)的評(píng)價(jià)指標(biāo)；分別采用微透析分析儀ISCUSFflexMicrodialysis Analyzer、放射免疫法、流式多因子檢測(cè)技術(shù)，測(cè)定腦脊液中谷氨酸（Glutamate，Glu）、脊髓中P物質(zhì)（Substance P，SP）及腫瘤局部組織中白細(xì)胞介素-12／P70（Interleukin-12／p70，IL-12P70）、γ干擾素（Interferon-γ，IFN-γ）及 β-神經(jīng)生長(zhǎng)因子（β-nerve growth factor，β-NGF）的含量。結(jié)果與假手術(shù)組相比，手術(shù)組脛骨轉(zhuǎn)移性癌痛模型大鼠機(jī)械痛縮足域值明顯下降，影像學(xué)觀察到骨質(zhì)破壞，腦脊液中Glu、脊髓中SP水平明顯升高（P＜0.01，P＜0.05），腫瘤組織中IL-12P70、IFN-γ水平明顯降低而β-NGF水平明顯升高（P＜0.05）。與模型組相比，加巴噴丁給藥后30min大鼠機(jī)械痛縮足閾值開(kāi)始上升，60～300min明顯升高（均P＜0.01）。加巴噴丁顯著降低了骨癌痛大鼠腦脊液中Glu、脊髓中SP濃度（P＜0.01，P＜0.05），提高了大鼠腫瘤組織中IL-12P70和IFN-γ水平，降低了β-NGF濃度（P＜0.05）。結(jié)論加巴噴丁可減輕骨癌痛大鼠的疼痛行為學(xué)指標(biāo)，其鎮(zhèn)痛機(jī)制可能與抑制中樞興奮性氨基酸、痛感調(diào)質(zhì)及周?chē)窠?jīng)生長(zhǎng)因子水平、增強(qiáng)外周的免疫作用有關(guān)。

加巴噴??；骨腫瘤；急性疼痛；機(jī)械痛縮足閾值；作用機(jī)制

本實(shí)驗(yàn)采用Walker-256乳腺癌細(xì)胞構(gòu)建大鼠脛骨轉(zhuǎn)移性癌痛模型，觀察加巴噴丁對(duì)大鼠疼痛行為學(xué)的干預(yù)作用；采用微透析分析儀ISCUSFflexMicrodialysis Analyzer、放射免疫法和流式多因子檢測(cè)等技術(shù)，測(cè)定腦脊液中谷氨酸（Glutamate，Glu）、脊髓中P物質(zhì)（Substance P，SP）及腫瘤局部組織中白細(xì)胞介素-12／P70（Interleukin-12／p70，IL-12P70）、γ干擾素（Interferon-γ，IFN-γ和β-神經(jīng)生長(zhǎng)因子（β-nerve growth factor，β-NGF）的含量，從中樞興奮性氨基酸、痛感調(diào)質(zhì)及周?chē)窠?jīng)生長(zhǎng)因子、免疫相關(guān)因子的角度，探討加巴噴丁對(duì)骨癌痛鎮(zhèn)痛作用的中樞和外周機(jī)制，為加巴噴丁干預(yù)臨床最難以控制的骨癌痛提供藥理學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 瘤株、主要藥品及試劑 Walker-256乳腺癌細(xì)胞，購(gòu)自中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)細(xì)胞中心；加巴噴?。ńK恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，批號(hào)12031291N0.107）；無(wú)菌骨蠟（上海三友醫(yī)療器械有限公司，批號(hào) 120401）AimPlex?Rat custom 7-plex kit，AimPlex?Mouse／Rat Basic kit，Aimplex?Tissue Lysis Buffer，均購(gòu)自北京曠博生物技術(shù)有限公司；谷氨酸檢測(cè)試劑盒（瑞典CMA，批號(hào)T23423）；SP檢測(cè)試劑盒（上海第二軍醫(yī)大學(xué)，批號(hào)20131231）。

1.2 主要儀器設(shè)備 51000-20C Von Frey hairs疼痛測(cè)試包（美國(guó)Danmic公司）；Aimplex?EZPrep洗板儀（北京曠博生物技術(shù)有限公司）；MS3數(shù)顯型振蕩器（德國(guó)IKA公司）；流式細(xì)胞儀BD FACSCalibur（BD Bioscience）；ISCUSflexMicrodialysis Analyzer生化分析儀、數(shù)據(jù)分析軟件 ICU pilot（瑞典 CMA）；DFM-96γ-放射免疫計(jì)數(shù)儀（合肥眾成機(jī)電公司）。

1.3 脛骨轉(zhuǎn)移性癌痛大鼠模型的構(gòu)建及分組 將凍存的瘤株進(jìn)行復(fù)蘇、傳代，完成腹水瘤細(xì)胞的制備并調(diào)整細(xì)胞濃度為4.7×104個(gè)／μL，置于冰盒內(nèi)備用。Wistar大鼠46只，雌性，體質(zhì)量180～200 g，購(gòu)自中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證編號(hào)為SCXK-（軍）2007-004，正常飼養(yǎng)。大鼠經(jīng)適應(yīng)性刺激后，將連續(xù)3 d機(jī)械痛縮足閾值≥26 g的大鼠隨機(jī)挑取10只作為假手術(shù)組（sham），剩余36只作為手術(shù)組（surgery），參照 Medhurst［4-5］的造模方法，于水合氯醛（3.5 mg／kg）麻醉下，向手術(shù)組大鼠右側(cè)后肢脛骨骨髓腔內(nèi)注入4.5μL含有瘤細(xì)胞的腹水，無(wú)菌骨蠟封口。假手術(shù)組注入同體積的無(wú)菌生理鹽水。

1.4 脛骨轉(zhuǎn)移性癌痛大鼠模型的行為學(xué)評(píng)價(jià)及藥效觀察

術(shù)后用機(jī)械觸痛法［6］進(jìn)行測(cè)評(píng)，將大鼠扣置于鐵絲架上，待其探究活動(dòng)基本消失后，依次用標(biāo)準(zhǔn)化的von frey纖維絲，從較小刺激強(qiáng)度2 g開(kāi)始，以1次／s的頻率，垂直刺激大鼠右后肢足爪底部中外側(cè)皮膚表面，記錄5次中出現(xiàn)3次或3次以上縮足反應(yīng)的最小刺激量作為大鼠的機(jī)械痛縮足閾值，并在術(shù)后第13天和21天進(jìn)行右后肢X線(xiàn)攝片。將術(shù)后10～13 d機(jī)械痛縮足閾值持續(xù)≤8 g兼有X線(xiàn)片骨質(zhì)破壞的手術(shù)組大鼠20只隨機(jī)分為模型組（model；n＝10）和加巴噴丁組（GBP 100mg／kg；n＝10）。假手術(shù)組與模型組均給予等量生理鹽水。連續(xù)給藥7 d后，測(cè)評(píng)給藥前（0min）和給藥后30、60、90、120、180、240、300min各時(shí)間點(diǎn)的機(jī)械痛縮足閾值。

1.5 大鼠腦脊液谷氨酸（Glu）濃度的檢測(cè) 大鼠于麻醉下，迅速暴露枕骨下緣的環(huán)枕膜，將頭皮針從枕骨與環(huán)枕膜連接處插入到小腦延髓池約0.2 cm，抽取大鼠腦脊液，經(jīng)高速低溫離心，以2μL進(jìn)樣，用ISCUSflex檢測(cè)儀及專(zhuān)用試劑盒，利用酵素反應(yīng)、呈色原理，進(jìn)行自動(dòng)檢測(cè)分析。測(cè)量波長(zhǎng)為365和546 nm；功率為100VA。應(yīng)用Laptop計(jì)算機(jī)和LABplotTM軟件控制儀器、運(yùn)算數(shù)據(jù)及分析結(jié)果。

1.6 脊髓組織P物質(zhì)（SP）的檢測(cè) 剝離大鼠L4～L6脊髓節(jié)段，在生理鹽水中煮沸5min，加入1mol／L HAc 1mL，充分勻漿，室溫留置100 min。離心后取上清加入相應(yīng)體積的1 mol／L NaOH。采用平衡飽和加樣程序即將非標(biāo)記抗原（樣品與標(biāo)準(zhǔn)品）、抗體、125I標(biāo)記的抗原依次加入反應(yīng)管中至其達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡，再加分離劑分離B（標(biāo)記的抗原抗體復(fù)合物）與F（標(biāo)記的抗原游離物），γ-放射免疫計(jì)數(shù)儀測(cè)定沉淀的cpm值（B）并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。

1.7 腫瘤局部組織中IL-12P70、IFN-Υ及β-NGF含量的檢測(cè) 剝離大鼠右后肢手術(shù)鉆孔周?chē)[瘤組織，按每100 mg加500μL預(yù)冷的1×AimPlex Tissue Lysis Buffer，充分勻漿，冰浴5min，離心取上清。利用樣本中的抗體與微球耦聯(lián)的特異性抗體、生物素標(biāo)記的檢測(cè)抗體、鏈霉素親和素標(biāo)記的PE工作液相結(jié)合的原理，將反應(yīng)好的樣品通過(guò)流式細(xì)胞儀配備的488 nm激發(fā)光的PE通道進(jìn)行熒光檢測(cè)上機(jī)讀數(shù)。結(jié)合抗原標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，對(duì)IL-12P70、IFN-γ、β-NGF進(jìn)行定量檢測(cè)。

2 結(jié)果

2.1 脛骨轉(zhuǎn)移性癌痛大鼠模型的建立 各組大鼠在術(shù)前至術(shù)后第6天體重?zé)o明顯差別，術(shù)后第10天開(kāi)始，手術(shù)組大鼠體重增長(zhǎng)趨勢(shì)明顯慢于假手術(shù)組，分別為（210.63±8.00）g和（222.56±4.30）g。手術(shù)組大鼠患肢腫脹，行走步態(tài)出現(xiàn)跛行，足趾不能正常外展，保護(hù)體位，甚至部分不能使用患肢。術(shù)后第12天測(cè)機(jī)械痛縮足閾值與術(shù)前相比顯著降低（P＜0.01，見(jiàn)圖1）；而假手術(shù)組上述指標(biāo)無(wú)明顯變化。對(duì)機(jī)械痛縮足閾值進(jìn)行連續(xù)觀察發(fā)現(xiàn)，手術(shù)組大鼠從術(shù)后第9天明顯下降，至第21天均穩(wěn)定維持在（16.45±6.82）g～（10.6±6.51）g，明顯低于假手術(shù)（P＜0.01，見(jiàn)圖2）。X線(xiàn)可見(jiàn)：假手術(shù)組大鼠除鉆孔點(diǎn)外，未見(jiàn)異常骨質(zhì)結(jié)構(gòu)；手術(shù)組大鼠術(shù)后第13天骨質(zhì)有點(diǎn)狀缺損，骨皮質(zhì)部分膨脹，突破骨膜；術(shù)后第21天時(shí)，該大鼠右側(cè)后肢腫脹較前明顯增加，片狀骨溶解，雙側(cè)骨皮質(zhì)均不連續(xù)，甚至出現(xiàn)骨折（見(jiàn)圖3）。

圖1 大鼠脛骨轉(zhuǎn)移性癌痛造模術(shù)前和術(shù)后機(jī)械痛縮足閾值的比較**P＜0.01，與手術(shù)組術(shù)前相比Fig.1 Comparision of preoperative and postoperative paw withdrawal mechanical threshold on tibiametastatic cancer pain ratsmodel**P＜0.01，compared with preoperative surgery group

圖2 大鼠脛骨轉(zhuǎn)移性癌痛造模手術(shù)組和假手術(shù)組術(shù)后機(jī)械痛縮足閾值的比較**P＜0.01，與假手術(shù)組相比Fig.2 Comparison of paw withdrawalmechanical threshold on tibiametastatic cancer pain ratsmodel betweenr surgery and sham surgery group**P＜0.01，compared with sham group

圖3 假手術(shù)組與手術(shù)組大鼠X線(xiàn)攝片結(jié)果Fig.3 The results of X-ray on sham group and surgery group

2.2 加巴噴丁對(duì)脛骨轉(zhuǎn)移性癌痛大鼠機(jī)械痛縮足閾值的影響 給藥第7天反映大鼠疼痛行為學(xué)的指標(biāo)——機(jī)械痛縮足閾值測(cè)評(píng)結(jié)果如表1所示。用藥前（0min），模型組與加巴噴丁組大鼠機(jī)械痛縮足閾值均顯著低于假手術(shù)組（P＜0.01），模型組與加巴噴丁組組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；加巴噴丁組在給藥后30min機(jī)械痛縮足閾值上升，90min達(dá)到藥效最高峰（78.44±27.6）g，在觀察的300min內(nèi)持續(xù)有效，在60min以后的所有時(shí)間點(diǎn)均顯著升高了痛域值（P＜0.01）。

表1 加巴噴丁對(duì)大鼠機(jī)械痛縮足閾值的影響Tab.1 Effects of gabapentin on paw withdrawalmechanical threshold

2.3 加巴噴丁對(duì)大鼠腦脊液中谷氨酸（Glu）、脊髓節(jié)段P物質(zhì)（SP）水平的影響 腦脊液中Glu和脊髓中SP為中樞神經(jīng)系統(tǒng)疼痛相關(guān)的遞質(zhì)和調(diào)質(zhì)，與假手術(shù)組相比，骨癌痛模型組Glu、SP濃度均顯著升高（P＜0.01或P＜0.05）；與模型組比較，給予加巴噴丁干預(yù)后，Glu、SP水平均受到不同程度的抑制（P＜0.01或 P＜0.05，見(jiàn)表2）。

表2 加巴噴丁對(duì)Glu和SP含量的影響Tab.2 The effects of gabapentin on glutamate of cerebrospinal fluid and substance P in spinal segment

2.4 加巴噴丁對(duì)腫瘤局部組織中IL-12P70、IFN-γ、β-NGF的影響 與假手術(shù)組比較，模型組大鼠腫瘤組織中IL-12P70和IFN-γ水平顯著下降（P＜0.05），表明其免疫狀態(tài)低下。與模型組比較，加巴噴丁組大鼠IL-12P70和IFN-γ水平均升高（前者P＜0.05，后者無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義），提示加巴噴丁可以一定程度地改善免疫功能。β-NGF為骨癌痛相關(guān)的活性因子，與假手術(shù)組相比，模型組大鼠的 β-NGF水平由（2.45±3.85）pg／mL升至（44.95±15.43）pg／mL（P＜0.05），加巴噴丁干預(yù)后顯著降低至（15.76±9.88）pg／mL（P＜0.05，見(jiàn)表3）。

表3 加巴噴丁對(duì)腫瘤局部組織中IL-12P70、IFN-γ、β-NGF的影響（pg／mL）Tab.3 The effects of gabapentin on IL-12P70、IFN-γ、β-NGF of tumor local tissue（pg／mL）

3 討論

迄今為止，癌痛的臨床治療還在延續(xù)“三階梯”止痛療法，但因藥物的成癮性、耐受性和不良反應(yīng)等缺點(diǎn)，使40%的患者疼痛得不到有效緩解［7］，嚴(yán)重影響患者的生存質(zhì)量及癌癥的治療效果。因此，對(duì)癌痛鎮(zhèn)痛療效高、不良反應(yīng)少的新方法、新藥物備受關(guān)注和期待。加巴噴丁是前期研究證明對(duì)慢性疼痛效果良好、不良反應(yīng)較少的臨床用藥，對(duì)阿片類(lèi)藥物的代謝影響小，在癌痛的聯(lián)合應(yīng)用中，增加其它鎮(zhèn)痛藥物的作用而不產(chǎn)生有害的相互作用。加巴噴丁對(duì)NMDA受體有拮抗作用［8］，提高腦內(nèi) GABA受體效應(yīng)水平［9］；通過(guò)抑制突觸后膜電壓依賴(lài)型鈣離子通道，阻礙疼痛信息的傳遞［10］，提示了對(duì)于臨床最為常見(jiàn)、癥狀最為嚴(yán)重、最難以控制的骨癌痛有效干預(yù)的可能性。

本研究采用部分模擬臨床骨癌痛癥狀與發(fā)病機(jī)制的大鼠脛骨轉(zhuǎn)移性癌痛模型，觀察到加巴噴丁明顯改善了該模型大鼠的疼痛行為學(xué)指標(biāo)，提高了大鼠的機(jī)械痛縮足閾值，在整體水平證實(shí)了加巴噴丁可干預(yù)骨癌痛的假設(shè)。進(jìn)一步的研究顯示，加巴噴丁顯著提高了骨癌痛大鼠腫瘤組織中IL-12P70和IFN-γ水平，降低了β-NGF濃度；顯著降低了該模型大鼠腦脊液中Glu、脊髓中SP濃度，一定程度反映了加巴噴丁鎮(zhèn)痛作用的機(jī)制。

骨癌痛的病理機(jī)制獨(dú)特而復(fù)雜，至今仍不完全清楚。但大量研究表明，神經(jīng)系統(tǒng)的外周和中樞敏化直接參與骨癌痛的機(jī)制，并且是疼痛產(chǎn)生和維持的主要原因。骨癌組織中的腫瘤和其它間質(zhì)細(xì)胞會(huì)分泌多種炎癥因子、生長(zhǎng)因子及轉(zhuǎn)化因子等，加之周?chē)窠?jīng)損傷引起的傷害性感受器異常興奮，直接導(dǎo)致了神經(jīng)系統(tǒng)外周的敏化效應(yīng)。外周敏化后的神經(jīng)信息通過(guò)背根神經(jīng)節(jié)、脊髓背角到達(dá)高級(jí)神經(jīng)中樞，經(jīng)過(guò)多種神經(jīng)遞質(zhì)、興奮性氨基酸、SP、降鈣素基因相關(guān)肽等的介導(dǎo)調(diào)制，使疼痛信息傳遞神經(jīng)元的興奮性增高，敏感性增強(qiáng)，引起中樞的敏化效應(yīng)，導(dǎo)致痛覺(jué)過(guò)敏、觸誘發(fā)痛和自發(fā)痛出現(xiàn)，并維持慢性骨癌痛癥狀。

神經(jīng)生長(zhǎng)因子（NGF）是腫瘤組織分泌的活性因子之一。生理狀態(tài)下，機(jī)體表達(dá)的NGF水平較低，但當(dāng)腫瘤發(fā)生或外周神經(jīng)損傷時(shí)NGF產(chǎn)生增加。高濃度的NGF誘導(dǎo)感覺(jué)神經(jīng)元的表型及反應(yīng)特性發(fā)生變化，并與受體結(jié)合，誘導(dǎo)SP和降鈣素基因相關(guān)肽水平的上調(diào)［11］，參與骨癌痛的周?chē)艋瘷C(jī)制。本實(shí)驗(yàn)觀察到的大鼠脛骨轉(zhuǎn)移性癌痛模型腫瘤組織NGF水平升高現(xiàn)象，可能為骨癌組織分泌及繼發(fā)的局部神經(jīng)損傷引起；加巴噴丁干預(yù)，部分抑制了過(guò)多產(chǎn)生的NGF，減輕了周?chē)艋?，使大鼠疼痛行為學(xué)指標(biāo)改善。這與既往使用NGF抗體，通過(guò)阻斷NGF通路獲得抗傷害感受［12］的研究結(jié)果相一致。

在骨癌痛的周?chē)鷻C(jī)制中，免疫系統(tǒng)的調(diào)控也具有非常重要的作用。臨床研究發(fā)現(xiàn)，癌癥伴有癌痛的患者機(jī)體免疫水平低下，細(xì)胞免疫、體液免疫處于休眠狀態(tài)，CD3、CD4、CD8、IL-2及IgA、C3、C4等指標(biāo)異常；疼痛緩解后，這些異常的免疫指標(biāo)得到恢復(fù)。對(duì)常規(guī)鎮(zhèn)痛治療無(wú)效的癌痛病人進(jìn)行免疫機(jī)能調(diào)整性治療后，伴隨整體免疫功能的改善，鎮(zhèn)痛藥的療效得以發(fā)揮，癌痛也有所減輕［13］。本研究中骨癌痛模型組大鼠免疫學(xué)指標(biāo)IL-12P70和IFN-γ的含量減少，一方面可能與腫瘤不斷增長(zhǎng)、整體免疫力低下有關(guān)；另一方面也可能與瘤細(xì)胞自身分泌的IL-10和PGE2等抑制性細(xì)胞因子，阻礙單核-巨噬細(xì)胞和NK細(xì)胞活化、抑制巨噬細(xì)胞表達(dá)MHC II類(lèi)分子及B7等共刺激分子有關(guān)。加巴噴丁干預(yù)后，上調(diào)了免疫應(yīng)答，提高了IL-12P70和IFN-γ的水平，可能是其減輕骨癌痛作用的周?chē)鷻C(jī)制之一。

SP是一種速激肽，廣泛存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，是神經(jīng)中樞參與痛覺(jué)傳導(dǎo)的重要經(jīng)遞質(zhì)或調(diào)質(zhì)。疼痛的周?chē)艋畔魅爰顾?，背角的神?jīng)元釋放SP，后者與NK-1受體結(jié)合，引起細(xì)胞膜去極化，并促使興奮性氨基酸Glu過(guò)度釋放，加速傷害性信息傳遞，參與致痛機(jī)制，增加對(duì)疼痛的敏感性。但也有報(bào)道認(rèn)為低劑量的SP尚具有鎮(zhèn)痛的作用［14］。Glu是神經(jīng)中樞內(nèi)最重要的興奮性氨基酸遞質(zhì)，直接參與骨癌痛的中樞敏化過(guò)程。周?chē)奶弁葱畔⒓癝P引起的異常沖動(dòng)，引起中樞內(nèi)傳入神經(jīng)纖維末端釋放過(guò)量的Glu，作用于NMDA受體，引起Na＋、K＋通透性增加和Ca2＋大量?jī)?nèi)流，產(chǎn)生興奮性突觸后電流，易化突觸傳遞，誘發(fā)中樞神經(jīng)通路產(chǎn)生高度興奮而達(dá)到中樞敏化［15］，引發(fā)或維持痛覺(jué)過(guò)敏、痛覺(jué)超敏和自發(fā)痛。研究人員于鞘內(nèi)分別注射SP或Glu均可誘發(fā)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物痛覺(jué)過(guò)敏；用辣椒素排空SP或使用Glu受體拮抗劑MK-801均可升高實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的痛閾值［16］。本課題組前期研究也顯示：坐骨神經(jīng)部分損傷［17］和切口痛［18］模型大鼠隨其機(jī)械痛敏和冷痛敏的產(chǎn)生其紋狀體細(xì)胞外液Glu、脊髓和腦脊液中SP含量明顯增加。上述的觀點(diǎn)支持本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果及推論：骨癌痛模型大鼠脊髓SP、腦脊液Glu的產(chǎn)生異常增加，而加巴噴丁可能通過(guò)抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)的SP和Glu水平、抑制神經(jīng)元去極化、降低神經(jīng)對(duì)刺激的敏感性發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用。

綜上所述，加巴噴丁具有減輕骨癌痛大鼠疼痛行為的作用，其鎮(zhèn)痛機(jī)制可能與調(diào)整周?chē)椭袠猩窠?jīng)系統(tǒng)中重要的活性因子、疼痛相關(guān)的遞質(zhì)和調(diào)質(zhì)的水平有關(guān)。然而，加巴噴丁在骨癌痛外周和中樞敏化中的具體作用機(jī)制，特別是對(duì)上述物質(zhì)的分子調(diào)控和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制尚待進(jìn)一步研究。

［1］辛立，張顏波，李美藝，等.加巴噴丁治療中重度晚期癌癥患者內(nèi)臟痛的臨床評(píng)價(jià)［J］.泰山醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2011，28（5）：324-326.

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（編校：吳茜）

Research on the analgesic effect and mechanism of gabapentin on ratsmodel w ith tibia metastatic cancer pain

ZHANG Ying，WANG Zhi-guo，SUN Dan-dan，OU YANG Jing-feng，ZHAO Xiao-liang，WANG Dan-qiaoΔLITao，CUIYue，NIU Xiao-hong

（Medical Experimental Center，China Academy of Chinese Medical Sciences，Beijing 100700，China）

ObjectiveTo study the analgesic effectand mechanism of gabapentin on tibiametastatic cancer pain ratmodel constructed by walker-256 breast cancer cells.Methods30 Femalewistar ratswere randomly divided into sham group，modelgroup and GBP group（100mg／kg），each group had 10 rats.Sham operation were used as operation control and tibiametastatic cancer pain operation were done separately.Paw withdrawalmechanical threshold and observation of X-ray were used to evaluate rats’pain behavior.ISCUSbiochemicalmethod，radioimmunoassay，and streamingmulti-factor detection techniquewere used to detect glutamate level of cerebrospinal fluid，substance P level in the spinal cord and expression of IL-12P70，IFN-γ，β-NGF in the tumor tissue.ResultsCompared with sham group，paw withdrawalmechanical threshold of tibia metastatic ratmodel in operaion group were decreased significantly，and X-ray showed bone destruction，the glutamate level of cerebrospinal fluid and substance P level in the spinal cord were increased significantly（P＜0.01 or P＜0.05）.IL-12P70 and IFN-γlevelswere significantly lower andβ-NGF levelwas higher than that in sham group（P＜0.05）.Compared with model group，paw withdrawalmechanical threshold of rats in gabapentin group began to rise in 30min after administration，and peaked in 60～300min（P＜0.01）.Gabapentin reduced the glutamate level of cerebrospinal fluid，substance P level in the spinal cord andβ-NGF level of tumor tissue concentrations significantly（P＜0.01 or P＜0.05），but increased IL-12P70 and IFN-γlevels of tumor tissue.ConclusionGabapentin can relieve the bone cancer pain of ratmodel.Its analgesic mechanism may lie indecreasing the levels of central excitatory amino acids，pain-associated neuromodulator and the nerve growth factor，and enhancing the peripheral immune function.

gabapentin；bone neoplasms；acute pain；paw withdrawalmechanical threshold；mechanism of action

R965.1

A

1005-1678（2014）03-0008-05

加巴噴?。╣abapentin，GBP）分子結(jié)構(gòu)與 γ-氨基丁酸（γaminobutyric acid，GABA）相似，在臨床上多用作抗癲癇治療，近年來(lái)在神經(jīng)病理性疼痛方面的應(yīng)用也逐漸廣泛，如帶狀皰疹后神經(jīng)痛、三叉神經(jīng)痛、糖尿病性神經(jīng)痛等。加巴噴丁與嗎啡聯(lián)合應(yīng)用于術(shù)后鎮(zhèn)痛可減少嗎啡的用量和不良反應(yīng)，與氫考酮聯(lián)合應(yīng)用于癌癥患者的中、重度疼痛可增加氫考酮的鎮(zhèn)痛效果，使疼痛進(jìn)一步緩解［1-2］。但加巴噴丁單獨(dú)使用對(duì)兼有神經(jīng)病理性疼痛和炎癥疼痛雙重特征的骨癌痛作用如何尚不清楚［3］。

國(guó)家科技部國(guó)際科技合作專(zhuān)項(xiàng)（2010DFA31890）；中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院自主選題研究項(xiàng)目（ZZ2013003）

張瑩，女，碩士，研究方向：中西醫(yī)結(jié)合基礎(chǔ)，E-mail：rachelzy24＠126.com；王丹巧，通信作者，女，研究員，博士生導(dǎo)師，研究方向：中藥藥理學(xué)與中西醫(yī)結(jié)合基礎(chǔ)研究，E-mail：dq_wang96＠sohu.com。