中藥化學成分的液質聯(lián)用鑒定法探討

于輝

（承德護理職業(yè)學院，河北 承德 067000）

中藥化學成分的液質聯(lián)用鑒定法探討

于輝

（承德護理職業(yè)學院，河北 承德 067000）

目的研究采用液質聯(lián)用法鑒定中藥化學成分。方法用2種方法對86種中藥的化學成分進行鑒定。觀察組采用液質聯(lián)用方法，對照組采用色譜法。對比2組鑒定方法的檢測效果、準確率以及鑒定時間等。結果觀察組優(yōu)者占比76.74%（66／86），優(yōu)良率為90.70%（78／86），均顯著高于對照組（P＜0.05）。觀察組成功鑒定83例，成功率為96.51%，顯著高于對照組（P＜0.05）。觀察組鑒定時長、校正后保留時間誤差均顯著少于對照組（P＜0.05）。結論液質聯(lián)用法鑒定中藥化學成分準確率高，鑒定時間短，適應范圍廣。

中藥；化學成分；液質聯(lián)用；鑒定法

1.2 研究方法

1.2.1 基本過程 觀察組采用液質聯(lián)用方法鑒定。確定86種中藥的原植物來源，盡可能把該植物已知的化學成分結構、質譜數據、UV數據收集完全。必要時收集整個屬的化學成分的相關數據。進行LC-MS正負離子切換一級質譜檢測，確定分子量。結合DAD所得紫外圖譜特征，確定化合物大概類型。進行多級質譜檢測，根據裂解碎片，確定分子中可能含有的碎片，結合分子量和生源，盡量歸屬化合物［3］。做其他高分辨率質譜檢測，得到分子式。采用反應質譜法得到立體異構體。根據初步鑒定結果，對照化合物標準品。對照組采用傳統(tǒng)鑒定方法。對照86種中藥的標準品，將被測定成分和標準品進行色譜分析，獲得Rf值或保留時間、混熔點、紅外光譜、分子量，總結鑒定成功率。

1.2.2 樣品溶液的配置 采用精密儀器稱取一定量對照品，以甲醇為溶液配制成單位為1 g／L的標準溶液，各取等量的

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS13.0軟件進行分析。正態(tài)計量數據采用“x±s”表示，比較以χ2檢驗。計數數據用率表示，行t檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 2組鑒定效果對比 觀察組鑒定效果為優(yōu)者占比76.74%，優(yōu)良率為 90.70%（78／86），均明顯高于對照組的48.84%，69.77%，優(yōu)良率提高了20.93%，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。提示對于中藥化學成分鑒定，液質聯(lián)用能夠提高鑒定效果，具有重要意義（見表1）。標準溶液配置成一樣的混標溶液［4］。再取各中藥成份配制成校正標準溶液。

1.2.3 建立質譜庫 以其中一根色譜柱為標準色譜柱，收集各標準品圖譜，提取各標準品保留時間和質譜信息，以一定的模式建立標準質譜庫。在正負離子模式下分別采集標準品建立質譜庫［5］。

1.2.4 樣本成份鑒定 用標準品溶液校正，通過校正得到適用于當前色譜柱的質譜庫。采集樣品圖譜，利用軟件進行質譜庫檢索和成份鑒定。

1.3 鑒定效果評價［6］優(yōu)：鑒定中藥化學成份準確率明顯提高，鑒定耗時大幅度減少，分離提純精準率明顯提高，適應范圍顯著增加。良：鑒定中藥化學成份準確率有所提高，鑒定耗時有所減少，分離提純精準率有所提高，適應范圍有所增加?？桑鸿b定中藥化學成份準確率沒有提高，鑒定耗時幾乎不變，分離提純精準率無變化，適應范圍無增加。差：鑒定中藥化學成份準確率降低，鑒定耗時增加，分離提純精準率下降，適應范圍縮小。優(yōu)良率為優(yōu)占比率與良占比率之和。

表1 2組鑒定效果對比［n（%）］Tab.1 Comparision of identification effect between two groups［n（%）］

2.2 2組成功率對比 觀察組成功鑒定83例，成功率為96.51%，顯著高于對照組的67例，成功率高出18.60%，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。提示液質聯(lián)用方法鑒定中藥化學成分可以有效提高成功率。

2.3 2組鑒定時長和保留時間誤差對比 觀察組鑒定時長為（79.52±6.15）min，校正后保留時間誤差為（0.12±0.004）min，均顯著少于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。提示相對于傳統(tǒng)鑒定方法，液質聯(lián)用方法鑒定中藥化學成分可以減少鑒定時間，還可以減小保留時間誤差，具有積極意義（見表2）。

表2 2組鑒定時長與保留時間誤差對比（min）Tab.2 Comparision of identification time and retention time error between two groups（min）

3 討論

中藥是中國傳統(tǒng)中醫(yī)特有的藥物，是我國勞動人民幾千年來不斷實踐、認識和積累的智慧結晶。為了傳播中醫(yī)藥，讓世界各地接受和使用中醫(yī)藥，中醫(yī)藥的現(xiàn)代化研究至關重要。中藥是一個十分復雜的化學體系，成份繁多，結構復雜，性質相似［7］。作為基礎的中藥化學成分研究，需要準確快速對中藥化學成份進行提取、分離和鑒定。目前常用的儀器是高效液相色譜儀器，但是該儀器需要與DVD檢測器連接起來使用。這種方法只能夠為研究提供單個色譜峰的保留時間和紫外圖譜等，卻幾乎不能提供未知成份的信息。液質聯(lián)用將高效液相色譜的高分離效能與質譜的靈敏結構測定結合，可以快速、準確的鑒定中藥化學成分，增強了實用價值［8］。因為液質聯(lián)用不僅能夠分析氣相色譜－質譜所不能分析的極強性、難揮發(fā)、熱不穩(wěn)定性化合物之外，分析范圍廣，MS幾乎可以檢測所有的化合物，比較容易地解決了分析熱不穩(wěn)定化合物的難題；且具有分離能力強、定性分析結果可靠、檢測限低、靈敏度高、分析時間快、自動化程度高等特點。隨著科技不斷進步，質譜信息庫的越來越完善，液質聯(lián)用技術將推動中醫(yī)藥的發(fā)展和傳承，使中醫(yī)藥更加現(xiàn)代化和國際化。

本文通過對比液質聯(lián)用法以及傳統(tǒng)方法對中藥化學成分鑒定的效果，結果發(fā)現(xiàn)，觀察組療效為優(yōu)者占比76.74%（66／86），優(yōu)良率為90.70%（78／86），均顯著高于對照組。提示對于中藥化學成分鑒定，液質聯(lián)用能夠提高鑒定效果，具有重要意義。此外，觀察組鑒定成功率為96.51%，比對照組成功率高出18.60%。與屠鵬飛等［9］報道一致，提示液質聯(lián)用方法鑒定中藥化學成分可以有效提高成功率。但也有結果不同的報道，如張加余與許玲玲等人的報道，其內容反映出利用液質聯(lián)用的方法成功率并未顯著提高，實驗結果也相對不明顯，其利用價值也為得到充分體現(xiàn)［10-11］。另外，觀察組鑒定時長、校正后保留時間誤差均顯著少于對照組。陳士林等［12］也有過類似報道，提示相對于傳統(tǒng)鑒定方法，液質聯(lián)用方法鑒定中藥化學成分可以減少鑒定時間，還可以減小保留時間誤差，具有積極意義。

綜上所述，用液質聯(lián)用法鑒定中藥化學成分，不僅可以提高鑒定效率，還可以提高鑒定的準確率，應該在中藥現(xiàn)代化研究上推廣。

［1］錢葉飛，尚爾鑫，段金廒，等.基于液質聯(lián)用數據庫技術的中藥及天然產物化學成分快速鑒定方法的建立［J］.中國中藥雜志，2012，21（1）：3256-3263.

［2］WANG YueSi，YAO Li，WANG LiLi，etal.Mechanism for the formation of the January 2013 heavy haze pollution episode over central and eastern China［J］.Science China（Earth Sciences），2014，1（2）：14-25.

［3］宋麗，王少云，聶磊，等.中藥炮制質量分析方法與藥效評價研究進展［J］.中藥材，2013，1（2）：151-156.

［4］魏文峰，王昶，張樹明，等.串聯(lián)質譜技術在中藥化學成分分析中的應用研究進展［J］.中國實驗方劑學雜志，2013，14（2）：351-354.

［5］LI JunHai，YU NanJia，ZENG Peng，et al.Design and integrated simulation of a pressurized feed system of the dual-thrust hybrid rocket motor［J］.Science China（Technological Sciences），2013，4（2）：989-1000.

［6］王宇歆，劉洪斌，李東華，等.液相色譜質譜聯(lián)用技術在中藥研究中的應用進展［J］.中國中西醫(yī)結合外科雜志，2011，4（3）：444-446.

［7］唐學紅，肖先舉.高效液相色譜-質譜聯(lián)用技術在藥物分析中的應用［J］.當代化工，2011，40（9）：988-990.

［8］《中南藥學》2011年第9卷關鍵詞索引［J］.中南藥學，2011，12（2）：944-960.

［9］屠鵬飛，史社坡，姜勇，等.中藥物質基礎研究思路與方法［J］.中草藥，2012，43（2）：209-215.

［10］張加余，喬延江，張倩，等.液質聯(lián)用技術在天然產物結構鑒定中的應用進展［J］.藥物分析雜志，2013，2（6）：349-354.

［11］許玲玲，安睿，王新宏.液質聯(lián)用技術在中藥分析中的應用［J］.中成藥，2006，2（7）：239-246.

［12］陳士林，郭寶林，張貴君，等.中藥鑒定學新技術新方法研究進展［J］.中國中藥雜志，2012，8（2）：1043-1055.

（編校：吳茜）

Identification of chem ical composition in traditional Chinesemedicine by liquid chromatography-mass spectrometry

YU Hui

（Chengde Nursing Vocational College，Chengde 067000，China）

ObjectiveTo identify the chemical components of traditional Chinesemedicine by liquid chromatography-mass spectrometry.MethodsChemical components of86 traditional Chinesemedicineswere identified by twomethods，observation group with LC-MSmethod and control group with traditional LCmethods.The identification efficacy，accuracy，and identification time between twomethodswere compared.ResultsThe excellent rate in observation group was76.74% （66／86），the excellentand good ratewas90.70% （78／86），which were significantly higher than those in controlgroup（P＜0.05）.83 kinds of traditional Chinese medicine were successfully identified in observation group，the success rate was 96.51%，significantly higher than control group（P＜0.05）.The identification tine，retention time after correction of errors in observation group were significantly less than control group（P＜0.05）.ConclusionLC-MS has high accuracy，short identification time and wide adaptation range in identification of chemical components of traditional Chinesemedicine.

Chinesemedicine；chemical components；LC-MS；identificationmethod

R284.1

A

1005－1678（2014）04－0172－03

目前，對于中藥的研究，人們提出中藥現(xiàn)代化的理論，即用現(xiàn)代科學技術，研制開發(fā)現(xiàn)代中藥制劑，闡明其藥效物質和作用機制，最終實現(xiàn)大規(guī)模工業(yè)化生產，為國際市場接受并形成具有國際競爭力的新藥產品［1］。為達到中藥現(xiàn)代化，中藥化學成分研究是基礎研究之一，有著重要的地位。雖然常用的中藥已經基本了解了其有效化學成分，但這些信息比較雜亂，反而為研究帶來了不便［2］。鑒于此，本文通過使用液質聯(lián)用的方法來鑒定中藥化學成分，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料 Waters ACQUITY UPLC超高效液相色譜系統(tǒng)（沃特世科技有限公司），Sequenom質譜系統(tǒng)（晶能生物技術有限公司），質譜工作站，EasyQ-A純水超純水一體機（上海博飲環(huán)保科技有限公司），電子天平，標準對照品，86種中藥材料，如桃葉珊瑚苷、橙皮苷、槲皮素等購自中國藥品生物制品鑒定所，延胡索乙素、芍藥苷、甘草利酮、甘草苷等為實驗室自制，純度按HPLC面積歸一化法＞98%。

于輝，女，本科，副教授，研究方向：中草藥化學成分分析研究，E-mail：yh20061＠163.com。